一种蛹虫草子实体杂聚多糖及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种蛹虫草子实体杂聚多糖的制备方法及其应用。本发明专利技术涉及的制备方法主要包括以下步骤：蛹虫草子实体烘干、粉碎、乙醇脱脂、热水超声提取、提取液经浓缩、醇沉、脱蛋白、柱层析、透析、冷冻干燥得蛹虫草子实体杂聚糖TY258。本发明专利技术蛹虫草多糖具有降脂和抗动脉粥样硬化功效，在25mg/kg即可显著降低高脂诱导的动脉粥样硬化模型小鼠（载脂蛋白E敲除和低密度脂蛋白受体敲除小鼠）胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平、以及肝脏和主动脉弓的脂质蓄积，提升小鼠高密度脂蛋白胆固醇水平、超氧化物歧化酶和脂蛋白酯解酶的活性。该蛹虫草子实体多糖亦可显著降低高脂诱导的豚鼠和大鼠血浆甘油三酯、胆固醇、丙二醛和氧化低密度脂蛋白的含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物活性物质及其制备方法和用途，具体是一种蛹虫草子实体中杂聚多糖及其制备方法和降脂的应用。
技术介绍
心脑血管疾病是一种高发病率、高致残率、高病死率的疾病，其主要病理过程是在血管壁病变的基础上，血液成分和（或）血流动力学改变，造成缺血性或出血性疾病。其病因较多，其中一个重要的病因是动脉粥样硬化。高血脂是诱发动脉粥样硬化的主要因素之一。当体内胆固醇过高，特别是低密度脂蛋白水平（LDL-C）以及甘油三酯增高时，氧化的LDL则可被巨噬细胞吞噬，进而沉积在动脉内皮下，引起内皮下变性，进而导致血小板在动脉内壁聚集，若同时伴有动脉壁损伤或胆固醇转运障碍，则易在动脉内膜形成脂斑，最后，血管壁隆起、向官腔内突起形成粥样斑块。脂蛋白脂酶（LPL）是脂质代谢的关键酶，其由肝外实质细胞合成分泌入血，水解乳糜微粒（chylomicron,CM）以及VLDL上的甘油三酯（Triglyceride,TG）；LPL缺乏会引起CM和VLDL水平增高。蛹虫草（CordycepsmilitarisL.Link）又名北虫草、北冬虫夏草，其与冬虫夏草属于同属真菌，不仅具有与冬虫夏草相近的生物活性，且易于人工培养，成为冬虫夏草极具潜力的替代品。蛹虫草多糖是蛹虫草含量较高的生物活性物质之一，且具有类似于冬虫夏草的生物学活性，例如：增强免疫、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、降血糖等多种功能。从蛹虫草中制备多糖，并确定其生物学活性，可以促进蛹虫草的临床转化应用和经济价值，对蛹虫草的综合利用具有重要意义。蛹虫草多糖的单糖组成、相对分子质量、糖苷键连接方式可对其生物活性产生重要影响。水提醇沉法获得多糖的方法虽然工艺流程简单，但获得的多糖相对分子质量范围广，组成成分复杂，既不利于多糖构-效关系的阐述，也不利于产品质量控制和后续临床转化应用。近年来，先后有国内外研究者报道了蛹虫草提取液单独或联合用药的降脂和抗动脉粥样硬化效果，但蛹虫草子实体多糖中具有抗动脉粥样硬化和降脂功能的多糖活性成分及其结构和制备方法未见报道。
技术实现思路
本专利技术针对以上不足之处，提供了一种蛹虫草子实体杂聚多糖及其应用，此杂聚多糖可用于制备药物用于降低血浆总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，提升超氧化物歧化酶和脂蛋白酯解酶活性、提升血浆高密度脂蛋白水平。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种蛹虫草子实体杂聚多糖的提取方法，包括以下步骤：1）制备蛹虫草子实体粗多糖：采集蛹虫草子实体，阴干并粉碎，过筛；向粉碎的蛹虫草子实体中加水，经冻融后超声处理，过滤得破壁蛹虫草子实体；破壁后的蛹虫草子实体加入95%的乙醇回流浸提脱脂，过滤得固形物；向固形物中再加入蒸馏水，加热超声浸提，抽滤除去残渣得上清液；上清液减压浓缩后加入95%的乙醇，置于0～4℃过夜，离心，收集沉淀；收集的沉淀经真空冷冻干燥，即得蛹虫草子实体粗多糖；2)蛹虫草子实体多糖的纯化：蛹虫草子实体粗多糖经阴离子交换柱采用去离子水洗脱和凝胶渗透色谱柱分离纯化，即可分离得到纯的蛹虫草子实体杂聚多糖，命名为TY258。获得的TY258，采用凝胶色谱法测定其分子量，其特征为该多糖分子量为625.8kDa；TY258由葡萄糖、半乳糖、甘露糖和6-氧甲基甘露糖组成；各糖苷键的构成比例由甲基化分析结果和核磁共振波谱（NMR）数据确定。NMR如附图1-5所示，数据归属如表格1所示。所得的蛹虫草子实体杂多糖TY258的核磁共振波谱（NMR）数据（见表1）：TY258的模拟结构式如下：其中：Glcp为吡喃型葡萄糖、Manp为吡喃型氧甲基甘露糖、Galp为吡喃型半乳糖；其中B≈2，C≈3，A≈322；该多糖简称TY258。蛹虫草子实体杂聚糖在制备降低血浆总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，提升超氧化物歧化酶和脂蛋白酯解酶活性的药物中的应用。蛹虫草子实体杂聚糖在制备降低血浆总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，提升血浆高密度脂蛋白水平的药物中的应用。本专利技术首次公开一种结构新颖的蛹虫草子实体杂聚多糖的制备方面以及其在降脂和抗动脉粥样硬化方面的应用，为蛹虫草多糖的构效关系研究提供了详实的实施案例。在本专利技术的实施例中，蛹虫草子实体杂聚多糖TY258可显著下调apoE(-/-)小鼠、LDLR(-/-)小鼠、豚鼠和Wistar大鼠血浆TC、TG、LDL-C、MDA和OX-LDL水平，并上调HDL-C、LPL活性和SOD活性；TY258亦可显著降低动脉粥样硬化模型apoE(-/-)小鼠和LDLR(-/-)小鼠肝脏和主动脉弓内皮下脂质蓄积，起到抗动脉粥样硬化效果。此外，在制备方面，本专利技术的实施方法中均采用了工业化生产中常用的离子交换和分子排阻色谱法，为该专利技术的转化奠定了基础。附图说明图1所示为蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的1H(A)和DEPT(B)核磁共振图谱；图2所示为蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的1H-1HCOSY图谱；图3所示为蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的HSQC核磁共振图谱；图4所示为蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的HMBC核磁共振图谱；图5所示为蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的NEOSY核磁共振图谱；图6所示为蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对肝脏脂质蓄积的影响，与空白组相比，#P＜0.05；##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01；图7蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对主动脉弓脂质蓄积的影响，与空白组相比，#P＜0.05；##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。具体实施方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细描述：实施例1：蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的制备及抗动脉粥样硬化的应用提取制备本专利技术的蛹虫草子实体杂聚多糖TY258并验证其在载脂蛋白E敲除小鼠模型上的降脂和抗动脉粥样硬化效果时，采取了下述各步骤：1)制备蛹虫草子实体粗多糖：采集蛹虫草子实体，阴干后用植物粉碎机粉碎，过100目筛。向粉碎的蛹虫草子实体中加入10倍量的水，搅拌均匀，置于超低温冰箱中-80℃冷冻12小时。迅速投入80℃水浴锅中解冻，水浴2小时。然后500W超声处理30分钟，过滤得固形物为破壁蛹虫草子实体。破壁后的蛹虫草子实体中加入95%乙醇回流2小时，料液比为1:5(W/V)，浸提脱脂及可溶性分子，过滤得固形物。向固形物中加入蒸馏水，料液比为1:10(W/V)，500W超声加热，温度控制在85℃，提取时间为3小时，抽滤除去残渣得上清液。重复提取1次。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛹虫草子实体杂聚多糖，其特征在于，其结构式如下：其中：Glcp为吡喃型葡萄糖、Manp为吡喃型氧甲基甘露糖、Galp为吡喃型半乳糖；其中B≈2，C≈3，A≈322；该多糖简称TY258。

【技术特征摘要】
1.一种蛹虫草子实体杂聚多糖，其特征在于，其结构式如下：
其中：Glcp为吡喃型葡萄糖、Manp为吡喃型氧甲基甘露糖、Galp为吡喃型半乳糖；其中B
≈2，C≈3，A≈322；该多糖简称TY258。
2.根据权利要求1所述的蛹虫草子实体杂聚多糖，其特征在于，所述多糖的分子量为
625.8kDa。
3.如权利要1所述的蛹虫草子实体杂聚多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）制备蛹虫草子实体粗多糖：采集蛹虫草子实体，阴干并粉碎，过筛；向粉碎的蛹虫草
子实体中加水，经冻融后超声处理，过滤得破壁蛹虫草子实体；破壁后的蛹虫草子实体加入
95%的乙醇回流浸提脱脂，过滤得固形物；向固形物中再加入蒸馏水，加热超声浸提，抽滤除

【专利技术属性】
技术研发人员：郭守东，
申请(专利权)人：泰山医学院，
类型：发明
国别省市：山东;37