【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药生物
,具体涉及一种尖吻蝮蛇凝血酶的制备方法。
技术介绍
蛇毒是毒蛇毒腺分泌的一种成分复杂的液体,含有多种蛋白质、多肽、酶类和其它小分子物质,具有广泛的生物活性,目前研究人员已从蝰科洞蝮蛇属蝮蛇(Bothropsatrox)、长白山白眉蝮蛇等蛇毒中发现多种类凝血酶。尖吻蝮蛇(Agkistrodonacutus),蝰科尖吻蝮属,广泛分布于中国华南地区。尖吻蝮蛇凝血酶(HaemocoagulaseAcutus,简写为Halase)是从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化的一种类凝血酶。它通过水解纤维蛋白的Aα链,使纤维蛋白原降解为纤维蛋白单体。专利CN1218747公开了尖吻蝮蛇凝血酶Halase用作治疗出血性疾病药物的用途,药理和毒理研究表明其具有较强的止血作用和极低的毒性。专利CN100523185公开了一种尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶的制备方法,通过透析、两步DEAE-SepharoseFF层析梯度洗脱和SephadexG25层析分离得到蛇毒类凝血酶,其纯度为95%。专利CN101812436公开了一种单肽链的尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶及其制备方法,得率为0.028%。其工艺包含三次DEAE-SepharoseFF层析,其中前两次使用酸性的低浓度NaCl-PBS溶液进行梯度洗脱,第三次层析使用碱性的低浓度NaCl-PBS溶液进行梯度洗脱。专利CN101560510公开了一种尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶,通过在两次< ...
【技术保护点】
一种尖吻蝮蛇凝血酶的制备方法,其特征在于包括以下步骤:(1)粗品澄清:以浓度为0.01M、pH值为6.5‑7.1的磷酸缓冲液,溶解尖吻蝮蛇蛇毒粗品,制成蛇毒溶液,蛇毒溶液经孔径0.45μm的微滤膜过滤,收集滤液;(2)超滤除杂:将所得滤液经孔径10NMWC超滤膜过滤,收集滤液;(3)将步骤(2)所得滤液进行第一次层析,用含有0.05mol/L NaCl,浓度为0.01M,pH值为6.5‑7.1的磷酸缓冲液洗脱,收集出峰组分,以孔径为10NMWC超滤膜超滤浓缩,收集滤液;(4)将步骤(3)所得滤液进行第二次层析,再分别用含0.03mol/L和0.1mol/L NaCl,浓度为0.01M,pH值为7.2‑7.8的磷酸缓冲液依次洗脱,收集0.1mol/L的洗脱峰流出液,以孔径10NMWC超滤膜超滤浓缩,收集滤液;(5)除热原:将步骤(4)所得滤液,用pH值为7.2‑7.8的0.01M磷酸缓冲液层析洗脱,收集出峰组分;(6)脱盐:将步骤(5)所得滤液用注射用水洗脱,对已除热原的上述组分进行脱盐,得到尖吻蝮蛇凝血酶。
【技术特征摘要】
1.一种尖吻蝮蛇凝血酶的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)粗品澄清:以浓度为0.01M、pH值为6.5-7.1的磷酸缓冲液,溶解尖
吻蝮蛇蛇毒粗品,制成蛇毒溶液,蛇毒溶液经孔径0.45μm的微滤膜过滤,收
集滤液;
(2)超滤除杂:将所得滤液经孔径10NMWC超滤膜过滤,收集滤液;
(3)将步骤(2)所得滤液进行第一次层析,用含有0.05mol/LNaCl,浓度
为0.01M,pH值为6.5-7.1的磷酸缓冲液洗脱,收集出峰组分,以孔径为10NMWC
超滤膜超滤浓缩,收集滤液;
(4)将步骤(3)所得滤液进行第二次层析,再分别用含0.03mol/L和0.1mol/L
NaCl,浓度为0.01M,pH值为7.2-7.8的磷酸缓冲液依次洗脱,收集0.1mol/L
的洗脱峰流出液,以孔径10NMWC超滤膜超滤浓缩,收集滤液;
(5)除热原:将步骤(4)所得滤液,用pH值为7.2-7.8的0.01M磷酸缓
冲液层析洗脱,收集出峰组分;
(6)脱盐:将步骤(5)所得滤液用注射用水洗脱,对已除热原的上述组分
进行脱盐,得到尖吻蝮蛇凝血酶。
2.如权利要求1所述的凝血酶的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)粗品澄清:以浓度为0.01M、pH值6.8的磷酸缓冲液,溶...
【专利技术属性】
技术研发人员:邓沁,彭维,王永刚,吴忠,
申请(专利权)人:中山大学,
类型:发明
国别省市:广东;44
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