The present invention relates to the production of at least from at least one nerve cell lineage specific differentiation of progenitor cells is a new type of neural cell differentiation medium; using the method of neural cell differentiation medium; culture medium and the method of the at least one precursor cells into neural lineage specific cell fate the differentiation of use; and comprising at least one of the nerve cell differentiation culture medium complete kit.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术涉及用于从至少一种能够谱系特异性分化的前体细胞生产神经细胞的至少一种新型神经细胞分化培养基；使用所述培养基进行神经细胞分化的方法；所述培养基和所述方法在至少一种前体细胞向神经细胞命运谱系特异性分化中的用途；以及包含所述至少一种所述神经细胞分化培养基的成套试剂盒。专利技术背景干细胞是存在于所有多细胞生物体中的生物细胞，其可分裂且分化为不同的特化细胞类型，并且可自我更新产生更多干细胞。哺乳动物中有两种自然存在的广泛类型的干细胞：胚胎干细胞和成体干细胞，其中胚胎干细胞分离自囊胚的内细胞团，成体干细胞分布于各种组织。还存在第三类干细胞，其为人造的且被称为诱导性多能干细胞(iPSC)。通过将成体细胞去分化为干细胞类似表型来制备iPSC。在成年生物体中，干细胞和祖细胞作为身体的修复系统补充成体组织。在发育的胚胎中，干细胞可分化为所有特化细胞(它们为多能细胞)，而且它们还维持再生器官的正常更替，如血液、皮肤或肠道组织。胚胎干细胞和成体干细胞具有分化为任何细胞类型的能力；因此，它们特别适合于疾病的细胞替代疗法，所述疾病破坏或损害/损伤确定的细胞群体。在合适的发育(或培养)条件下，干细胞的独特多能性为它们提供了使自身再生且还发育为所有三个胚层(即外胚层、中胚层和内胚层)的各种细胞类型的潜能。ESC、诱导性多能干细胞(iPSC)、成体或组织特异性干细胞等生长为特化细胞的潜能吸引了希望利用这些...
【技术保护点】
从至少一种能够谱系特异性分化的前体细胞产生神经细胞的神经细胞分化培养基，其包含以下或由以下组成：i)至少一种细胞培养基础培养基；ii)至少一种用于神经细胞培养的无血清添加剂；iii)细胞周期抑制剂；iv)至少一种原肌球蛋白受体激酶B[TrkB]受体激动剂；v)经典Wnt通路激动剂；vi)抗坏血酸或维生素C或其盐或衍生物；以及vii)钙离子的溶液。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.14 GB 1318126.81.从至少一种能够谱系特异性分化的前体细胞产生神经细胞的
神经细胞分化培养基，其包含以下或由以下组成：
i)至少一种细胞培养基础培养基；
ii)至少一种用于神经细胞培养的无血清添加剂；
iii)细胞周期抑制剂；
iv)至少一种原肌球蛋白受体激酶B[TrkB]受体激动剂；
v)经典Wnt通路激动剂；
vi)抗坏血酸或维生素C或其盐或衍生物；以及
vii)钙离子的溶液。
2.如权利要求1所述的神经细胞分化培养基，其还包含以下至少
一种或多种或由以下至少一种或多种组成，包括其所有的组合：
viii)notch信号转导抑制剂；
ix)CREB(cAMP反应元件结合蛋白)激活剂；
x)γ-氨基丁酸(GABA)受体激动剂；以及
xi)非经典WNT通路激动剂。
3.如权利要求1或2所述的神经分化培养基，其中所述细胞培养
基础培养基选自DMEM、DMEM:F12。
4.如前述权利要求中任一项所述的神经分化培养基，其中所述无
血清添加剂选自：N2添加剂、B27添加剂、谷氨酰胺添加剂、
NeuroBrewTM。
5.如前述权利要求中任一项所述的神经分化培养基，其中所述周
期抑制剂为G1/S细胞检查点的抑制剂。
6.如权利要求5所述的神经分化培养基，其中所述细胞周期抑制
\t剂选自：PD0332991、AZD5438、黄芩素、CI898三盐酸盐、大豆黄
素、WYE687二盐酸盐、YC1、夫拉平度、indisulam、purvalanol、
seliciclib、含羞草碱、purvalanol。
7.如前述权利要求中任一项所述的神经分化培养基，其中所述原
肌球蛋白受体激酶B[TrkB]受体激动剂为脑源性神经营养因子
(BDNF)、神经营养蛋白-4(NT-4)、神经胶质细胞源性神经营养因子
(GDNF)、神经营养蛋白-3(NT-3)、或以上的类似物。
8.如权利要求7所述的神经分化培养基，其中所述原肌球蛋白受
体激酶B[TrkB]受体激动剂选自：7,8-二羟基黄酮、N,N',N”-三(2-羟乙
基)-1,3,5-苯三甲酰胺(LM22A4)、4′-二甲氨基-7,8-二羟基黄酮。
9.如前述权利要求中任一项所述的神经分化培养基，其中所述经
典Wnt通路激动剂为糖原合成酶激酶3β(GSK3β)抑制剂。
10.如权利要求9所述的神经分化培养基，其中所述经典Wnt通
路激动剂选自：CHIR99021、(2'Z,3'E)-6-溴靛红-3'-肟(BIO)、(2'Z,3'E)-6-
溴靛红-3'-丙酮肟(BIO-丙酮肟)、5-乙基-7,8-二甲氧基-1H-吡咯并[3,4-c]
异喹啉-1,3(2H)-二酮(3F8)、1-(7-甲氧基喹啉-4-基)-3-[6-(三氟甲基)吡
啶-2-基]尿素(A1070722)、N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N'-(5-硝基-2-噻唑
基)尿素(AR-A014418)、3-(2,4-二氯苯基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-1H-
吡咯-2,5-二酮(SB216763)、3-[(3-氯-4-羟苯基)氨基]-4-(2-硝基苯
基)-1H-吡咯-2,5-二酮(SB415286)、N-(3-氯-4-甲苯基)-5-(4-硝基苯
基)-1,3,4-噁二唑-2-胺(TC-G24)、2-甲基-5-[3-[4-(甲基亚硫酰基)苯
基]-5-苯并呋喃基]-1,3,4-噁二唑(TCS2002)或3-[[6-(3-氨基苯基)-7H-吡
咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基苯酚双三氟乙酸酯(TWS119)。
11.如权利要求2-13中任一项所述的神经分化培养基，其中所述
notch信号转导抑制剂为γ-分泌酶抑制剂。
12.如权利要求11所述的神经分化培养基，其中所述notch信号
转导抑制剂选自：N-[N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基]-S-苯基甘氨酸
叔丁酯(DAPT)、司马西特、BMS-299897、BMS-708163、二苯并氮杂
卓、MK-0752、RO4929097、LY900009、LY3039478、LY411575、
MRK-003、MRK-006或BMS-906024。
13.如权利要求2-12中任一项所述的神经分化培养基，其中所述
CREB激活剂选自：腺苷酸环化酶激活剂、cAMP或其类似物、或者
磷酸二酯酶抑制剂。
14.如权利要求13所述的神经分化培养基，其中所述腺苷酸环化
酶激活剂选自：毛喉素、N,N-二甲基-(3R,4aR,5S,6aS,10S,10a-
R,10bS)-5-(乙酰氧基)-3-乙烯基十二氢-10,10b-二羟基-3,4a,7,7,10a-五
甲基-1-氧代-1H-萘并[2,1-b]吡喃-6-基酯β-丙氨酸盐酸盐、垂体腺苷酸
环化酶激活多肽1-27、1,9-双脱氧毛喉素、5-[[2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-
基)乙基]氨基]-1-戊醇、或考福新达普酸盐酸盐。
15.如权利要求13所述的神经分化培养基，其中所述cAMP类似
物选自：联丁酰基-cAMP、8-(4-氯苯基硫代)-2'-O-甲基腺苷-3',5'-环单
磷酸乙酰氧甲酯、8-溴-cAMP或(S)-腺苷、环3',...
【专利技术属性】
技术研发人员：保罗·凯姆普，尼古拉斯·艾伦，
申请(专利权)人：加的夫大学学院咨询有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB
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