分子制造技术

技术编号:15078786 阅读:78 留言:0更新日期:2017-04-07 11:41
本发明专利技术提供了双特异性分子,该双特异性分子包含:(i)第一域,其结合B细胞成熟抗原(BCMA),并且包含增殖诱导性配体(APRIL)的至少一部分;和(ii)能够活化T细胞的第二域。本发明专利技术还提供了此类分子在治疗浆细胞介导的疾病,诸如多发性骨髓瘤中的用途。

molecule

The present invention provides bispecific molecules, the bispecific molecules comprising: (I) the first domain, the combination of B cell maturation antigen (BCMA), and contains a proliferation inducing ligand (APRIL) at least a portion; and (II) second to T cell activation domain. The present invention also provides the use of such molecules in the treatment of plasma cell mediated diseases, such as multiple myeloma.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术涉及结合B细胞成熟抗原(BCMA)并且活化T细胞的双特异性分子。分子可用于治疗浆细胞疾病,诸如多发性骨髓瘤。专利技术背景多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤(骨髓瘤)是一种浆细胞骨髓恶性。异常浆细胞的集合积累于骨髓中,在那里它们干扰正常血细胞的生成。骨髓瘤是美国的第二常见的血液学恶性(在非何杰金淋巴瘤后),并且构成血液学恶性的13%和所有癌症的1%。由于该疾病在死亡前引起病理性骨折、对感染的易感性、肾衰竭及然后骨髓衰竭,它就痛苦及医学费用而言是沉重的。与许多淋巴瘤不一样,骨髓瘤目前是不能治愈的。淋巴瘤中使用的标准化学疗法药剂在很大程度上对骨髓瘤无效。另外,由于浆细胞中丧失CD20表达,不能针对此疾病使用利妥昔单抗(Rituximab)。新药剂,诸如硼替佐米(Bortezamib)和雷利度胺(Lenolidomide)是部分有效的,但是不能导致长效消退。如此,需要具有增加的效力和改善的长效效果的用于治疗骨髓瘤的备选药剂。双特异性抗体已经开发出极其多种分子,其基于具有两种抗体样结合域的基本构思。双特异性T细胞结合(engaging)分子是已经开发出的一类双特异性抗体类型分子,主要用作抗癌药物。它们指导宿主的免疫系统(更具体是T细胞的细胞毒性活性)针对靶细胞,诸如癌细胞。在这些分子中,一种结合域经由CD3受体结合T细胞,而另一种结合靶细胞,诸如肿瘤细胞(经由肿瘤特异性分子)。由于双特异性分子结合靶细胞和T细胞两者,它使靶细胞与T细胞接近,从而T细胞能对癌细胞施加其效应,例如细胞毒性效应。T细胞:双特异性Ab:癌细胞复合物的形成诱导T细胞中的信号传导,从而导致例如细胞毒性介质的释放。理想上,药剂仅在存在靶细胞的情况下诱导期望的信号传导,从而导致选择性杀伤。已经以许多不同形式开发出双特异性T细胞结合分子,但是最常见之一是由不同抗体的两种单链可变片段(scFvs)组成的融合物。这些有时称为BiTE(Bi双特异性T细胞结合剂)。WO2012/066058和WO2013/072415都描述了包含结合B细胞成熟抗原(BCMA)的scFv的BiTE。BCMA是一种在成熟淋巴细胞(即记忆B细胞、浆母细胞和骨髓浆细胞)中优先表达的跨膜蛋白。多发性骨髓瘤细胞上也表达BCMA。虽然BCMA是一种用于治疗多发性骨髓瘤的有希望的靶抗原,但是骨髓瘤细胞上BCMA的低密度表达阻碍了传统的靶向方法。因此,不可能的是,传统治疗性抗体会在骨髓瘤细胞表面上实现足够的密度,从而触发有效的ADCC/CDC。类似地,考虑到靶向性摄取和非特异性摄取之间较小的差别,mAb与毒素或化疗剂的缀合物不可能导致有用的治疗窗。如此,需要能将低BCMA密度分辨到有效的治疗作用中的备选药剂。附图简述图1:BAFF和APRIL的配体特异性和功能分配BAFF与BAFF-R、BCMA和TACI相互作用,而APRIL与BCMA、TACI和蛋白聚糖相互作用。BAFF-R活化影响外周B细胞存活,而BCMA可以影响浆细胞存活。APRIL与蛋白聚糖的相互作用牵涉APRIL的酸性硫酸化的0糖胺聚糖(glycol-saminoglycan)侧链氨基端。图2A:设计和构建的不同形式(1)通过IgG1铰链与截短的APRIL连接的OKT3scFv;(2)经由(SGGGGS)3接头与截短的APRIL连接的OKT3scFv;(3)经由CD8茎与截短的APRIL连接的OKT3scFv;(4)经由IgG1铰链与OKT3scFv连接的截短的APRIL;(5)经由(SGGGGS)3接头与OKT3scFv连接的截短的APRIL;(6)经由CD8间隔物与OKT3scFv连接的截短的APRIL。构建体(3)和(6)应当经由CD8间隔物中的二硫键而形成同二聚体。B:在结合APRILiTE后依靠细胞与细胞相互作用进行细胞聚簇的示意图。图3:来自用不同APRILiTE构建体转染的293T细胞的上清液的Western印迹。用抗APRIL完成印迹法。图4(a):APRILiTES1、3和6对野生型SupT1细胞和工程化改造为表达BCMA和TACI的SupT1细胞的结合。用抗APRIL生物素/链霉亲合素APC染色。Aprilites没有显示对WTSupT1细胞的结合,但是结合BCMA表达细胞,并且在较小程度上结合TACI表达细胞。图4(b):APRILiTE对野生型Jurkats,而不对没有T细胞受体的Jurkats的结合。这证明了APRILiTES结合T细胞受体。图5:在存在空白培养基或3APRILiTES的情况下共培养T细胞1:1非转导或工程化SupT1细胞。图6:在存在APRILiTE1、3和6的情况下共培养3天后观察到BCMA表达性SupT1细胞的完全消除。图7:原发性骨髓瘤上的BCMA表达的例子。显示了用大鼠抗人BCMAmAbVicky1染色的骨髓瘤样品的4个例子。第一幅小图显示了浆细胞白血病(骨髓瘤的不常见、晚期和攻击性形式)患者中的鲜明BCMA染色。其它3例病例是临床和形态学上典型的骨髓瘤。它们显示通常看到的中间或暗淡染色。重叠用同种型对照的染色(灰色)。图8:APRILiTE的氨基酸序列A:APRILiTE#01;B:APRILiTE#03;C:APRILiTE#06图9:在同种型对照上覆盖的对骨髓瘤样品的BCMA染色。这些骨髓瘤细胞表达BCMA,但是以低水平表达。图10:在第1天时共培养物和对照的低放大率显微术。当在存在APRILiTE的情况下与骨髓瘤细胞一起培养时可以看到T细胞的清楚凝聚/活化。图11:在单独的,与外周血T细胞共培养的骨髓瘤细胞的情况下的干扰素-gamma释放,两者一起都在缺乏和存在APRILiTES#3和#6的情况下。图12:培养中的骨髓瘤细胞共培养物在第6天的存活。测试的这两种APRILiTES在存在PBMC的情况下导致原发性骨髓瘤细胞的有效杀伤。专利技术概述B细胞膜抗原(BCMA)是一种在几乎所有多发性骨髓瘤(MM)上表达的表面蛋白。BCMA在其它情况下仅在浆细胞上表达,因此靶向此抗原可以证明骨髓瘤的有效治疗。然而,BCMA的低水平表达是在靶向此抗原时的考虑因素。令人惊讶地,本专利技术人已经发现了如果在双特异性T细胞活化性(BTA)分子中使用基于增殖诱导性配体(APRIL),而不是BCMA结合抗体的结合域,分子能够在存在骨髓瘤细胞的情况本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双特异性分子,其包含:(i)第一域,其结合B细胞成熟抗原(BCMA),并且包含增殖诱导性配体(APRIL)的至少一部分;和(ii)能够活化T细胞的第二域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.10 GB 1317928.81.一种双特异性分子,其包含:
(i)第一域,其结合B细胞成熟抗原(BCMA),并且包含增殖诱导性配体
(APRIL)的至少一部分;和
(ii)能够活化T细胞的第二域。
2.根据权利要求1的双特异性分子,其中所述第二域通过结合T细胞表
面上的CD3活化T细胞。
3.根据权利要求2的双特异性分子,其中所述第二域包含CD3特异性抗
体或其部分。
4.根据权利要求3的双特异性分子,其中所述第二域包含来自以SEQID
No.9所示的scFv序列的互补决定区(CDR)。
5.根据权利要求3的双特异性分子,其中所述第二域包含以SEQIDNo.
9所示的scFv序列或其具有至少80%序列同一性并且结合CD3的变体。
6.根据前述权利要求中任一项的双特异性分子,其中所述第一域包含截
短的APRIL,其包含BCMA结合位点,但是缺乏负责蛋白聚糖结合的APRIL
的氨基端部分。
7.根据权利要求2的双特异性分子,其包含以SEQIDNo.2所示的序列
或其具有至少80%序列同一性并且结合BCMA的变体。
8.根据前述权利要求中任一项的双特异性分子,其中所述第一和第二结
合域由间隔物连接。
9.根据权利要求8的双特异性分子,其中所述间隔物包含IgG1铰链或
CD8茎。
10.根据前述权利要求中任一项的双特异性分子,其包含以SEQIDNo.
10、11或12所示的序列或其具有至少80%序列同一性但是保留i)结合BCMA
并且ii)活化T细胞的能力的变体。
11.根据前述权利要求中任一项的双特异性分子,其以三聚体结合
BCMA。
12.一种核酸序列,其编码根据前述权利要求中任一项的双特异性分子。
13.根据权利要求12的核酸序列,其包含以SEQIDNo19、20或21所示
的序列或其具有至少80%序列同一性的变体。
14.一种载体,其包含根据权利要求12或13的核酸序列。
15.一种宿主细胞,其包含根据权利要求12或13的核酸序列,并且生成
根据权利要求1至11中任...

【专利技术属性】
技术研发人员:M普尔K龙L李N查普林
申请(专利权)人:UCL商务股份有限公司
类型:发明
国别省市:英国;GB

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