The invention discloses a human lung adenocarcinoma cell line HA109 and its establishment method, the accession number of the human lung adenocarcinoma cell line HA109 CCTCCNo:C201617, which is added to the pleural effusion of human peripheral blood lymphocyte separating medium, by tumor cells and some epithelial cells, endothelial cells, and two resistant culture medium cultured with pleural effusion, double density gradient centrifugation to get high activity of tumor cells, repeated attachment removed endothelial and epithelial cells, gradually reduce the proportion of pleural effusion were cultured in culture medium, and the fifth generation directly with fetal bovine serum medium, cultured cells injected mice, mice were killed and tumors were digested primary tumor cell viability good. The patients with advanced lung cancer were generally difficult to obtain high differentiation of tumor cells is difficult to mature in vitro, the invention brings the pain in the pleural effusion of separation and purification of high differentiated tumor cells and successfully built from relatively easy access and not for the patient, makes the establishment of a new model of lung cancer and the success rate is more simple and convenient greatly improve.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞生物学
,具体地说,本专利技术涉及一种新的人肺腺癌细胞株HA109及其建立方法。
技术介绍
体外建立肺癌细胞系为研究肿瘤的基础和临床研究提供了极其重要的细胞实验模型。但是随着实验的不断开展,常需要对细胞系进行不断的体外传代,于是一些生物学特征会渐渐的改变或消失,所以不断建立新的细胞系已经成为研究肺癌的发病机理和探寻新的治疗方法的重要环节。原代细胞的培养难易程度与取材时的组织类型、分化程度、年龄等密切相关,一般来讲,胚胎组织较成熟个体组织容易培养,分化低的较分化高的组织容易生长,肿瘤组织较正常组织容易培养。现有技术大多采用手术中切除的早中期病人肿瘤组织进行原代培养,包括直接将组织进行消化培养或是将病人肿瘤组织移植至小鼠体内,待成瘤后,再取出小鼠肿瘤组织进行消化培养。胸水细胞的主要成分为淋巴细胞、粒细胞、树突状细胞、少量脱落的上皮细胞、成纤维细胞及肿瘤细胞等,成分相对较为复杂,胸腔积液中的肿瘤细胞属于高分化的成熟细胞,比较脆弱,一般而言比较难培养。但是相对于原发肿瘤灶,胸水取材容易,如果能建立稳定的培养体系,对肺癌原代细胞的建立有很大的推广意义。
技术实现思路
基于此,为了克服上述现有技术的缺陷,本专利技术提供了一种新的人肺腺癌细胞株HA109及其建立方法。为了实现上述专利技术目的,本专利技术采取了以下技术方案:一种人肺腺癌细胞株HA109的建立方法,包括以下步骤:(1)、去除中晚期肺癌病人胸腔积液中的血块,离心后得到上清液和沉淀;(2)、将步 ...
【技术保护点】
一种人肺腺癌细胞株HA109,其特征在于,所述细胞株HA109的保藏编号为CCTCC No:C201617。
【技术特征摘要】
1.一种人肺腺癌细胞株HA109,其特征在于,所述细胞株HA109的保藏编号为CCTCCNo:C201617。
2.权利要求1所述的人肺腺癌细胞株HA109的建立方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)、去除中晚期肺癌病人胸腔积液中的血块,离心后得到上清液和沉淀;
(2)、将步骤(1)的沉淀用两倍体积的PBS重悬,再按1:1的体积比缓慢贴壁加入到人外周血淋巴分离液的液面上;
(3)、小心吸取分离液面交界处的液体,得到肿瘤细胞和部分上皮细胞、内皮细胞,无菌PBS清洗,离心弃上清;
(4)、使用含0.5~2wt%的青-链双抗的步骤(1)的上清液作为条件培养基培养步骤(3)的细胞;
(5)、待细胞长满时,用0.25~0.5wt%的胰酶消化,离心后,用PBS将沉淀重悬成细胞悬液;所述PBS与沉淀的体积比为2~3:1;
(6)、预先在干净离心管中依次缓慢贴壁加入40%的比重为1.056的percoll液和20%的比重为1.031的percoll液;
(7)、将步骤(5)的细胞悬液缓慢贴壁加入到步骤(6)的离心管中,离心;
(8)、吸取40%的percoll液面处的液体,无菌PBS清洗,离心弃上清,得到肿瘤细胞,使用步骤(4)中的条件培养基进行培养;
(9)、重复步骤(4)-(8)一次,...
【专利技术属性】
技术研发人员:何建行,王雯珺,列璞怡,
申请(专利权)人:广州医科大学附属第一医院,
类型:发明
国别省市:广东;44
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