斑马鱼测定农药水分散粒剂毒性的方法技术

本发明专利技术公开了一种斑马鱼测定农药水分散粒剂毒性的方法，包括以下步骤：将农药水分散粒剂溶解，制成农药储备液；将农药储备液与水混合配制成梯度浓度的混合液，将混合液做为斑马鱼的生活用水，持续培养96h，培养过程中，每隔24h时记录斑马鱼的生物效应参数和混合液的理化参数；根据斑马鱼的生物效应参数计算农药对斑马鱼的半数致死浓度LC50值，判断农药水分散粒剂的毒性，具有操作简便、实用性强、检测速度快，精确度高等优势。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及养殖
，尤其涉及一种斑马鱼测定农药水分散粒剂毒性的方法。
技术介绍
斑马鱼(Brachydoniorerio)属于脊索动物门辐鳍鱼纲鲤形目鲤科短丹尼鱼属，具有易饲养、产卵量大、性成熟周期短、个体小易操作等特点，同时斑马鱼基因与人类基因的相似度高，具有重要的科学研究意义。因此，斑马鱼已成为科学研究中常用的模式生物，广泛应用于生命科学、毒理学、环境科学和农业科学等领域。斑马鱼胚胎和幼鱼常被用于新化学物质登记中的急性、亚慢性、慢性毒性试验研究，而斑马鱼成鱼通常被用于农药登记急性毒性试验研究。目前，已经广泛采用斑马鱼进行农药环境安全性评价的研究，但是采用斑马鱼作为农药水分散粒剂毒性筛选模型的研究较少，缺乏相关的研究数据评估模型的实用性和可靠性。因此，提供一种易操作、实用性强的斑马鱼筛选农药水分散粒剂毒性的方法尤其重要。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种斑马鱼测定农药水分散粒剂毒性的方法，具有操作简便、实用性强、检测速度快，精确度高等优势。为解决上述技术问题，提供了一种斑马鱼测定农药水分散粒剂毒性的方法，包括以下步骤：(1)将农药水分散粒剂溶解，制成农药储备液；(2)将所述农药储备液与水混合配制成梯度浓度的混合液，将所述混合液做为斑马鱼的生活用水，持续培养96h，培养过程中，每隔24h时记录斑马鱼的生物效应参数和所述混合液的理化参数；(3)根据斑马鱼的生物效应参数计算农药对斑马鱼的半数致死浓度LC50值，判断农药水分散粒剂的毒性。上述的方法，优选的，所述步骤(1)具体为：将所述农药分散粒剂加入水中，进行搅拌或超生得到所述农药储备液。上述的方法，优选的，所述步骤(2)中所述斑马鱼选择体长为1～3cm、健康活泼的斑马鱼。上述的方法，优选的，在采用斑马鱼测定农药水分散粒剂毒性之前24h内，所述斑马鱼不喂食，在所述步骤(2)进行的过程中，所述斑马鱼不喂食。上述的方法，优选的，所述步骤(2)中所述水为曝气水，所述曝气水的硬度为10～240mg/L，pH为6.0～8.5，溶解氧含量高于空气饱和值的80％。上述的方法，优选的，所述步骤(2)中，所述生物效应参数为鱼的死亡率和中毒症状；所述理化参数为混合液的水温、pH值、溶解氧含量。上述的方法，优选的，所述步骤(2)中，所述培养过程控制水温为21～25℃、每日光照12～16h、溶解氧含量高于空气饱和值的60％。上述的方法，优选的，所述农药水分散粒剂的毒性的判断标准为：LC50＞10.0mga.i./L表示低毒，1.00mga.i./L＜LC50≤10.0mga.i./L表示中毒，0.100mga.i./L＜LC50≤1.00mga.i./L表示高毒，LC50≤0.100mga.i./L表示剧毒。上述的方法，优选的，所述一种斑马鱼测定农药水分散剂毒性的方法还设有空白对照组；所述空白对照组以曝气水为斑马鱼的生活用水。所述空白对照组中斑马鱼的死亡率为0则证明实验结果可信。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：(1)本专利技术提供了一种操作简便、实用性强的模式生物斑马鱼筛选农药水分散粒剂毒性的方法，将农药水分散粒剂有效成分充分溶解出来，评价其对斑马鱼的毒性，具有速度快，精确度高的优点。(2)本专利技术提供了一种模式生物斑马鱼筛选农药水分散粒剂毒性的方法，将斑马鱼幼鱼暴露在农药溶液中，通过观察比较斑马鱼的中毒症状和死亡率，判断农药的毒性。死亡率最终是通过LC50表征的，而中毒症状可以作为辅助判断措施，准确性更高。具体实施方式以下结合具体优选的实施例对本专利技术作进一步描述，但并不因此而限制本专利技术的保护范围。实施例以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。以下实施例中采用的曝气水为采用空气曝气泵曝气处理24h以上的自来水。实施例1：(1)农药储备液的配制：称取50％啶酰菌胺水分散粒剂1.2500g，用蒸馏水溶解并定容至25mL容量瓶中，得到浓度为2.50×104mga.i./L的储备液。(2)生活用水的配制：取7个10L的方形玻璃缸，每缸注入5L的曝气水。该曝气水的水温为23.7℃，pH值为7.62，水质硬度为16.2mg/L(以CaCO3计)，溶解氧为空气饱和值的99.6％。实验组：分别向5个装有曝气水的方形玻璃缸中注入3.000mL、3.600mL、4.320mL、5.18mL、6.22mL步骤(1)中的农药储备液得到浓度分别为15.0mga.i./L、18.0mga.i./L、21.6mga.i./L、25.9mga.i./L、31.1mga.i./L的斑马鱼生活用水。空白对照组(CK)：以曝气水作为斑马鱼的生活用水。(3)染毒挑选体长为1～3cm(平均体长2.13±0.25cm)的野生型AB品系斑马鱼幼鱼，随机放入到方形玻璃缸中，每个缸中加入10尾鱼进行培养，每日光照12h。斑马鱼在染毒前24h不喂食，染毒过程中亦不喂食。在染毒开始后，于第24h、48h、72h和96h测定并记录玻璃缸中试验液的温度、pH值、溶氧量等，具体检测结果见表2。于染毒后6h、24h、48h、72h和96h观察并记录斑马鱼的中毒症状和死亡数。发现鱼死亡时即刻将死鱼捞出。判断斑马鱼死亡的标准为鱼没有可见的运动，如鳃煽动、触碰尾部无反应。判断斑马鱼中毒的标准为：斑马鱼出现了侧游、侧卧缸底或身体明显弯曲等生物现象。表1为50％啶酰菌胺水分散粒剂对斑马鱼急性毒性试验数据中死亡率的统计结果。表2为试验期间各浓度组的水温，pH值，溶解氧的检测结果。表1：50％啶酰菌胺水分散粒剂对斑马鱼急性毒性试验数据记录表同时，表1中，实验组1～5，培养6～96h，斑马鱼出现了侧游、侧卧缸底、身体明显弯曲、死亡等生物效应。表2：水缸中生活用水的水温、pH值、溶解氧的检测结果表(4)数据处理采用统计软件SPSS12.0，以处理浓度的对数值为自变量x，以(校正)死亡率的机率值为因变量y，建立毒力回归方程。计算50％啶酰菌胺水分散粒剂对斑马鱼的半数致死浓度LC50和95％置信限，具体计算结果参见表3。表3：50％啶酰菌胺水分散粒剂对斑马鱼急性毒性试验结果表(5)结果评价根据LC50值判断农药毒级。毒性分级标准为：低毒(LC50＞10.0mga.i./L)，中毒(1.00mga.i./L＜LC50≤10.0mga.i./L)，高毒(0.100mga.i./L＜LC50≤1.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种斑马鱼测定农药水分散粒剂毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将农药水分散粒剂在水中溶解，制成农药储备液；(2)将所述农药储备液与水混合配制成梯度浓度的混合液，将所述混合液做为斑马鱼的生活用水，持续培养96h，培养过程中，每隔24h时记录斑马鱼的生物效应参数和所述混合液的理化参数；(3)根据斑马鱼的生物效应参数计算农药对斑马鱼的半数致死浓度LC50值，判断农药水分散粒剂的毒性。

【技术特征摘要】
1.一种斑马鱼测定农药水分散粒剂毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将农药水分散粒剂在水中溶解，制成农药储备液；
(2)将所述农药储备液与水混合配制成梯度浓度的混合液，将所述混合液做为斑马鱼的
生活用水，持续培养96h，培养过程中，每隔24h时记录斑马鱼的生物效应参数和所述混合
液的理化参数；
(3)根据斑马鱼的生物效应参数计算农药对斑马鱼的半数致死浓度LC50值，判断农药
水分散粒剂的毒性。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)具体为：将所述农药水分
散粒剂加入水中，进行搅拌或超声得到所述农药储备液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述斑马鱼选择体长为
1～3cm、健康活泼的斑马鱼。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在采用斑马鱼测定农药水分散粒剂毒性之
前24h内，所述斑马鱼不喂食，在所述步骤(2)进行的过程中，所述斑马鱼不喂食。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述水为曝气水，所述
曝气水的硬度为10～240mg/...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘勇，陈昂，张德咏，罗香文，严清平，刘建宇，罗源华，
申请(专利权)人：湖南省植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：湖南;43