疫苗组合物制造技术

描述了用于在哺乳动物中诱导免疫应答的试剂盒，该试剂盒包括第一病毒，所述第一病毒表达MAGEA3、人乳头瘤病毒E6/E7融合蛋白、前列腺蛋白的人6次跨膜上皮抗原或癌睾丸抗原1，或它们的变体作为抗原蛋白，并且所述第一病毒被配制成在哺乳动物中产生对上述蛋白或其变体的免疫力。该试剂盒还包括编码相同抗原或相同抗原的变体的马拉巴MG1病毒。该马拉巴MG1病毒被配置成诱导哺乳动物中的免疫应答。该第一病毒与该马拉巴MG1病毒免疫原性相异。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求于2013年2月21日提交的美国临时专利申请第61/767,776号的优先权，并将其结合于本文作为参考。
本文披露内容涉及用于诱导免疫应答的溶瘤病毒。
技术介绍
溶瘤病毒(OVs)特异性感染恶性细胞、在恶性细胞中复制并杀死恶性细胞，以使得正常组织不被感染。若干种OV已达到了针对多种肿瘤治疗的临床评价的高级阶段(RussellSJ.等人,(2012)NatBiotechnol30:658-670)。一旦获得批准，这样的病毒试剂就能够替代标准癌症治疗或与其组合并提供减少的毒性和改善的治疗效力。除了水疱性口腔炎病毒(VSV)之外(StojdlDF.等人,(2000)NatMed6:821-825；StojdlDF.等人,(2003)CancerCell4:263-275)，最近已经描述了显示出溶瘤细胞活性的其他弹状病毒(BrunJ.等人,(2010)MolTher18:1440-1449；MahoneyDJ.等人,(2011)CancerCell20:443-456)。除了它们之外，非-VSV马拉巴病毒在体外显示出最广泛趋癌性(oncotropism)(WO2009/016433)。对在正常细胞中具有改进的肿瘤选择性和毒性减少的突变马拉巴病毒进行工程化改造。减毒株为含有G蛋白(Q242R)和M蛋白(L123W)突变的双重突变体株。在体内，这种减毒株被称作MG1或马拉巴MG1，证明了在小鼠中异种移植物和同基因肿瘤模型中的强抗肿瘤活性，其比减毒VSV、VSVAM51具有更好的治疗效力(WO2011/070440)。在过去数年间积累的数据已经揭示了溶瘤病毒的抗肿瘤活性不仅取决于其直接溶瘤作用，而且还取决于其刺激抗肿瘤免疫力的能力(BridleBW.等人,(2010)MolTher184:4269-4275)。这种免疫介导的肿瘤控制似乎在OV治疗的总体效力方面起到了决定性作用。事实上，肿瘤特异性适应性免疫细胞能够追踪(patrol)该组织并破坏被OV遗漏的肿瘤细胞。而且，其记忆间隔(memorycompartment)能够防止肿瘤复发。已经开发了多种策略来改善OV-诱导的抗肿瘤免疫力(PolJ.等人,(2012)病毒AdaptationandTreatment4:1-21)。一些小组已对表达免疫刺激的细胞因子的OV进行了基因改造。表达粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的单纯疱疹病毒和牛痘病毒已分别达到针对癌症治疗的III和MB期临床评价，而表达IFN-β的VSV刚刚进入I期。另一种策略被定义为溶瘤细胞疫苗，其由表达来自OV的肿瘤抗原组成(RussellSJ.等人,(2012)NatBiotechnol30:658-670)。之前，已经证明了VSV也能够被用作癌症疫苗载体(BridleBW.等人,(2010)MolTher184:4269-4275)。当应用于设置为用于治疗鼠黑素瘤模型的异种免疫加强时，VSV-人多巴色素互变异构酶(hDCT)溶瘤疫苗不仅诱导对于DCT的肿瘤特异性免疫力增加，而且还伴随抗病毒适应性免疫力下降。因此，随着中期和长期存活的增加，治疗效力得到了明显改善(WO2010/105347)。尽管在利用hDCT作为肿瘤相关抗原时显示VSV是有效的，但并不能预测什么样的抗原相关的抗原在异种免疫加强设定中是有效的。提供一种能够用于激活患者的免疫系统以杀死肿瘤细胞并且对正常组织具有减小的毒性的疫苗载体是合乎需要的，例如通过针对肿瘤上的抗原相关的抗原激活抗体和/或淋巴细胞。如果这样的疫苗载体既显示出溶瘤细胞活性又显示出加强适应性细胞免疫力，则是合乎需要的。
技术实现思路
下述总结意在向读者介绍本文中描述的一项或多项专利技术，而不是意在限定它们中的任一项。本文披露内容的目的在于消除或缓解之前的抗癌疫苗的至少一种缺点。本文的作者已经出人意料地确定了MAGEA3、人乳头瘤病毒E6/E7融合蛋白、前列腺蛋白的人6次跨膜上皮抗原和癌睾丸抗原1能够用于致力于在哺乳动物中诱导免疫应答的异种免疫加强(heterologousprime-boost)中。这些结果是无法预料的且不可预期的，因为并不是所有的抗原相关的抗原都能够经由异种免疫加强来诱导免疫应答。例如，本文的作者还确定了胎盘特异性蛋白1(PLAC-1)和Epstein-Barr核抗原1能够经由异种免疫加强刺激免疫应答。在第一方面，本文提供了用于在哺乳动物中诱导免疫应答的试剂盒。该试剂盒包括：第一病毒，其表达作为抗原蛋白的包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的蛋白或其变体，并且被配制成在哺乳动物中产生对该蛋白或其变体的免疫力。该试剂盒还包括编码作为抗原蛋白的包含氨基酸序列SEQIDNO:1的蛋白或其变体的马拉巴MG1病毒，该马拉巴MG1病毒被配制成在所述哺乳动物中诱导免疫应答；该第一病毒与该马拉巴MG1病毒免疫原性相异。由第一病毒表达的抗原蛋白和由马拉巴MG1病毒表达的抗原蛋白可以是完全相同的。第一病毒、马拉巴MG1病毒或二者可以被配制成用于作为分离的病毒施用。马拉巴MG1病毒可以包括包含SEQIDNO:2的核苷酸序列的转基因的反向互补和RNA形式。该马拉巴MG1病毒可以包括包含SEQIDNO:3的核苷酸序列的反向互补和RNA形式的密码子优化的转基因。第一病毒可以包括包含SEQIDNO:2或3的核苷酸序列的转基因，或可以包括包含SEQIDNO:2或3的核苷酸序列的转基因的反向互补和RNA形式，这取决于该第一病毒为正义RNA病毒、DNA病毒还是反义RNA病毒。这两种病毒可以能够表达包含SEQIDNO:1序列的蛋白的不同变体。由第一病毒、马拉巴MG1病毒或二者表达的包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的蛋白的变体可以包括由FLWGPRALV、KVAELVHFL、EGDCAPEEK、KKLLTQHFVQENYLEY、RKVAELVHFLLLKYR和KKLLTQHFVQENYLEY组成的组中的至少一个肿瘤相关的表位，并且与SEQIDNO:1具有至少70％同一性。优选地，该变体与SEQIDNO:1具有至少80％同一性。更优选地，该变体与SEQIDNO:1具有至少90％同一性。甚至更优选地，该变体与SEQIDNO:1具有至少95％同一性。由第一病毒、马拉巴MG1病毒或二者表达的包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的蛋白的变体可以具有SEQIDNO:4的氨基酸序列。编码该变体的核苷酸序列可以包括SEQIDNO:5的核苷酸序列。马拉巴M本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于在哺乳动物中诱导免疫应答的试剂盒，所述试剂盒包含：第一病毒，其表达作为抗原蛋白的包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的蛋白或其变体，并且被配制成在所述哺乳动物中产生对所述蛋白或其变体的免疫力；以及马拉巴MG1病毒，其编码作为抗原蛋白的包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的蛋白或其变体，所述马拉巴MG1病毒被配制成在所述哺乳动物中诱导免疫应答；所述第一病毒与所述马拉巴MG1病毒免疫原性相异。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.02.21 US 61/767,7761.用于在哺乳动物中诱导免疫应答的试剂盒，所述试剂盒包含：
第一病毒，其表达作为抗原蛋白的包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的蛋白或其变
体，并且被配制成在所述哺乳动物中产生对所述蛋白或其变体的免疫力；以及
马拉巴MG1病毒，其编码作为抗原蛋白的包含氨基酸序列SEQIDNO:1的蛋白
或其变体，所述马拉巴MG1病毒被配制成在所述哺乳动物中诱导免疫应答；
所述第一病毒与所述马拉巴MG1病毒免疫原性相异。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，由所述第一病毒表达的抗原蛋白和由所
述马拉巴MG1病毒表达的抗原蛋白完全相同。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其中，所述第一病毒、所述马拉巴MG1
病毒，或二者被配制成用于作为分离的病毒施用。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中，
所述马拉巴MG1病毒包括包含SEQIDNO:2的核苷酸序列的转基因的反向互补
和RNA形式；
所述第一病毒为负链RNA病毒并且包括包含SEQIDNO:2的核苷酸序列的转基
因的反向互补和RNA形式；
所述第一病毒为DNA病毒或正义RNA病毒并且包括包含SEQIDNO:2的核苷
酸序列的转基因；或
所述马拉巴MG1病毒包括包含SEQIDNO:2的核苷酸序列的转基因的反向互补
和RNA形式，并且
a)所述第一病毒为负链RNA病毒并且包括包含SEQIDNO:2的核苷酸序列的
转基因的反向互补和RNA形式，或
b)所述第一病毒为DNA病毒或正义RNA病毒并且包括包含SEQIDNO:2的
核苷酸序列的转基因。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中，
所述马拉巴MG1病毒包括包含SEQIDNO:3的核苷酸序列的转基因的反向互补
和RNA形式；
所述第一病毒为负链RNA病毒并且包括包含SEQIDNO:3的核苷酸序列的转基
因的反向互补和RNA形式；或
所述第一病毒为DNA病毒或正义RNA病毒并且包括包含SEQIDNO:3的核苷
酸序列的转基因；或
所述马拉巴MG1病毒包括包含SEQIDNO:3的核苷酸序列的转基因的反向互补
和RNA形式，且
a)所述第一病毒为负链RNA病毒并且包括包含SEQIDNO:3的核苷酸序列的
转基因的反向互补和RNA形式，或
b)所述第一病毒为DNA病毒或正义RNA病毒并且包括包含SEQIDNO:3的
核苷酸序列的转基因。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中，由所述第一病毒、所述马拉
巴MG1病毒，或二者表达的所述蛋白的变体包括选自由FLWGPRALV、KVAELVHFL、
EGDCAPEEK、KKLLTQHFVQENYLEY、RKVAELVHFLLLKYR和
KKLLTQHFVQENYLEY组成的组中的至少一种肿瘤相关的表位，并且与SEQIDNO:
1具有至少70％同一性。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，所述变体与SEQIDNO:1具有至少80％
同一性。
8.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，所述变体与SEQIDNO:1具有至少90％
同一性。
9.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，所述变体与SEQIDNO:1具有至少95％
同一性。
10.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，由所述第一病毒、所述马拉巴MG1
病毒，或二者表达的所述蛋白的变体具有SEQIDNO:4的氨基酸序列。
11.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，所述蛋白的变体由SEQIDNO:5的核
苷酸序列编码。
12.根据权利要求1-3和6-11中任一项所述的试剂盒，其中，所述马拉巴MG1
病毒和所述第一病毒表达包含SEQIDNO:1的序列的蛋白的不同变体。
13.根据权利要求12所述的试剂盒，其中，
所述马拉巴MG1病毒包括SEQIDNO:2或3的核苷酸序列的反向互补和RNA
形式，而所述第一病毒为反义RNA病毒并且包括SEQIDNO:5的反向互补和RNA
形式；
所述马拉巴MG1病毒包括SEQIDNO:5的核苷酸序列的反向互补和RNA形式，
而所述第一病毒为反义RNA病毒并且包括SEQIDNO:2或3的反向互补和RNA形
式；
所述马拉巴MG1病毒包括SEQIDNO:2或3的核苷酸序列的反向互补和RNA
形式，而所述第一病毒为DNA或RNA病毒并且包括SEQIDNO:5的序列；或
所述马拉巴MG1病毒包括SEQIDNO:5的核苷酸序列的反向互补和RNA形式，
而所述第一病毒为DNA或RNA病毒并且包括SEQIDNO:2或3的序列。
14.根据权利要求12所述的试剂盒，其中，所述马拉巴MG1病毒或所述第一病
毒之一能够表达包含SEQIDNO:1或4的序列的蛋白，而所述马拉巴MG1病毒和所
述第一病毒中的另一个能够表达包含其他序列的蛋白。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的试剂盒，其中，所述第一病毒为腺病毒。
16.分离的马拉巴MG1病毒颗粒，其具有编码包含SEQIDNO:1的氨基酸序列
或其变体的蛋白的基因组。
17.根据权利要求16所述的分离的马拉巴MG1病毒颗粒，其中，包含SEQIDNO:
1的氨基酸序列的所述蛋白的变体的具有选自由FLWGPRALV、KVAELVHFL、
EGDCAPEEK、KKLLTQHFVQENYLEY、RKVAELVHFLLLKYR和
KKLLTQHFVQENYLEY组成的组中的至少一个肿瘤相关的表位，并且与SEQIDNO:
1具有至少70％同一性。
18.根据权利要求17所述的分离的马拉巴MG1病毒颗粒，其中，所述变体与SEQ
IDNO:1具有至少80％同一性。
19.根据权利要求17所述的分离的马拉巴MG1病毒颗粒，其中，所述变体与SEQ
IDNO:1具有至少90％同一性。
20.根据权利要求17所述的分离的马拉巴MG1病毒颗粒，其中，所述变体与SEQ
IDNO:1具有至少95％同一性。
21.根据权利要求16所述的分离的马拉巴MG1病毒颗粒，其中，包含SEQIDNO:
1的氨基酸序列的所述蛋白的变体具有SEQIDNO:4的氨基酸序列。
22.根据权利要求16所述的分离的马拉巴MG1病毒颗粒，其中，所述基因组包
括SEQIDNO:2、3或5的核苷酸序列的反向互补和RNA形式。
23.根据权利要求16所述的分离的马拉巴MG1病毒颗粒，其中，所述基因组包
括SEQIDNO:6的核苷酸序列的反向互补和RNA形式。
24.用于在哺乳动物中诱导免疫应答的试剂盒，所述试剂盒包含：
第一病毒，其表达作为抗原蛋白的包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的蛋白或其变
体，并且被配制成在所述哺乳动物中产生对所述蛋白或其变体的免疫力；以及
马拉巴MG1病毒，其编码作为抗原蛋白的包含氨基酸序列SEQIDNO:7的蛋白
或其变体，所述马拉巴MG1病毒被配制成在所述哺乳动物中诱导免疫应答；
所述第一病毒与该马拉巴MG1病毒免疫原性相异。
25.根据权利要求24所述的试剂盒，其中，由所述第一病毒表达的抗原蛋白和由

\t所述马拉巴MG1病毒表达的抗原蛋白完全相同。
26.根据权利要求24或25所述的试剂盒，其中，所述第一病毒、所述马拉巴MG1
病毒，或二者被配制成用于作为分离的病毒施用。
27.根据权利要求24至26中任一项所述的试剂盒，其中
所述马拉巴MG1病毒包括包含SEQIDNO:8的核苷酸序列的反向互补和RNA
形式的密码子优化的转基因；
所述第一病毒为反义RNA病毒并且包括包含SEQIDNO:8的核苷酸序列的反向
互补和RNA形式的密码子优化的转基因；
所述第一病毒为DNA病毒或正义RNA病毒并且包括包含SEQIDNO:8的核苷
酸序列的密码子优化的转基因；或
所述马拉巴MG1病毒包括包含SEQIDNO:8的核苷酸序列的反向互补和RNA
形式的密码子优化的转基因，且
a)所述第一病毒为反义RNA病毒并且包括包含SEQIDNO:8的核苷酸序列的
反向互补和RNA形式的密码子优化的转基因，或
b)所述第一病毒为DNA病毒或正义RNA病毒并且包括包含SEQIDNO:8的
核苷酸序列的密码子优化的转基因。
28.根据权利要求24至26中任一项所述的试剂盒，其中，由第一病毒、所述马
拉巴MG1病毒，或二者表达的所述蛋白的变体包括SEQIDNO:7的至少一种肿瘤相
关的表位并...

【专利技术属性】
技术研发人员：大卫·F·斯托多，约翰·卡梅伦·贝尔，布莱恩·里克蒂，乔纳森·波尔，
申请(专利权)人：东安大略研究所儿童医院有限公司，渥太华医院研究所，麦克马斯特大学，
类型：发明
国别省市：加拿大;CA