将从间充质干细胞诱导的多能干细胞分化为脂肪细胞的方法技术

本发明专利技术涉及包含腔昆布提取物(Ecklonia cava)的诱导性多能干细胞脱分化用培养基组合物。并且，本发明专利技术涉及将利用上述培养基组合物制备的诱导性多能干细胞分化为脂肪细胞的方法。若利用本发明专利技术的培养基组合物，则可有效地将间充质干细胞制备成诱导性多能干细胞，并且由于所制备的多能干细胞可转化为脂肪细胞，因而可有效地用作细胞治疗剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及利用间充质干细胞的多能干细胞诱导培养基组合物，制备诱导性多能干细胞，并将诱导性多能干细胞分化为脂肪细胞的方法。
技术介绍
干细胞是能够在各组织中获取的分化之前步骤的未分化细胞的统称。干细胞具有在未分化状态下，规定期间内能够持续地制造出与自身相同的细胞的性质，以及在适当的条件下，能够分化为组成生物组织的多种细胞的性质。根据分化能力和生成时期，干细胞大致可以分为胚胎干细胞(embryonicstemcell)和成体干细胞(adultstemcell)。并且，根据干细胞的分化能力，还可以分为多能性(pluripotency)、多潜能性(multipotency)及单能性(unipotency)干细胞。成体干细胞可以分为多潜能性或单能性干细胞。作为典型的成体干细胞有间充质干细胞(mesenchymalstemcells；MSCs)和造血干细胞(hematopoieticstemcells；HSCs)。间充质干细胞分化为软骨细胞(chondrocyte)、成骨细胞(osteoblast)、脂肪细胞(adipocyte)、肌细胞(myocyte)、神经细胞(neuron)，造血干细胞主要分化为红细胞、白细胞、血小板等血液中的血球细胞。相反，由于多能干细胞可以分化为构成生物体的3种全部胚叶(germlayer)，因而指称具有可以分化为人体的全部细胞或脏器组织的多功能性的干细胞，通常，胚胎干细胞属于多功能性干细胞。由于人体胚胎干细胞由可以成长为人类生命体的胚胎形成，因而存在诸多伦理性问题，但相对于成体干细胞，细胞增殖及分化能力优秀。虽然可以在骨髓、血液、大脑、皮肤等中获取成体干细胞而少存在伦理性问题，但相对于胚胎干细胞，具有有限的分化能力。作为用于克服如上所述的问题的方案，尝试了用于使来源于成体的细胞脱分化，来制备与胚胎干细胞相似的定制型多能干细胞的各种方法。作为典型的方法有细胞融合法(fusionwithEScell)、体细胞核移植法(somaticcellnucleartransfer)、特定因子注入法(reprogrammingbygenefactor)等。由于诱导的细胞还具有2对基因，因而细胞融合法存在细胞的安全性方面的问题，而体细胞核移植法存在需要大量的卵子且效率非常低的问题。并且，特定因子注入法作为为了插入特异性基因来诱导脱分化而利用包含致癌基因的病毒的方法，由于引发癌症的危险性高、效率低、方法操作方面上的难度，因而在细胞治疗剂的开发可能性方面上存在问题。为了成功地、大量地获得多能干细胞，在培养分离的脐带来源单核细胞的步骤中的培养组合物极其重要，需要进行通过更多量、高效率的诱导方法制备多能干细胞的研究。作为如上所述的
技术介绍
所说明的事项仅用于促进对本专利技术的背景的理解，不可以被认定为属于本领域所属的普通技术人员公知的以往的技术。
技术实现思路
技术问题本专利技术人努力寻找高效率地诱导用于使安全性和生产效率高的细胞治疗剂的开发迈向实用化的多能干细胞的方法。结果，确认了在将作为安全的天然提取物的腔昆布提取物放入细胞培养基时，可以从间充质干细胞制备出诱导性多能干细胞，并能够以既安全又高的效率，使诱导性多能干细胞分化为脂肪细胞，从而完成了本专利技术。因此，本专利技术的目的在于，提供用于使包含腔昆布提取物的间充质干细胞脱分化为诱导性多能干细胞的培养基组合物。本专利技术的另一目的在于，提供在包含腔昆布提取物的培养基中，使间充质干细胞脱分化为诱导性多能干细胞，再次将上述诱导性多能干细胞分化为脂肪细胞的方法。本专利技术的还有一目的在于，提供通过上述制备方法制备而成的脂肪细胞。本专利技术的又一目的在于，提供包含上述脂肪细胞的细胞治疗用组合物。通过以下的具体实施方式、专利技术要求保护范围及附图更加明确地说明本专利技术的目的及优点。解决问题的手段根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供培养基组合物，包括腔昆布(Eckloniacava)提取物，用于使间充质干细胞(mesenchymalstemcell)脱分化为诱导性多能干细胞(inducedpluripotencystemcell)，其特征在于，上述诱导性多能干细胞分化为脂肪细胞。根据本专利技术的另一方面，本专利技术提供使间充质干细胞分化为脂肪细胞(adipocyte)的方法，包括：步骤(a)，将腔昆布提取物放入细胞培养基；步骤(b)，在上述培养基使间充质干细胞脱分化为诱导性多能干细胞；以及步骤(c)，使上述诱导性多能干细胞分化为脂肪细胞。本专利技术人努力寻找在不存在迫害胚胎的伦理性问题的状态下，高效率地诱导用于使安全性和生产效率高的细胞治疗剂的开发迈向实用化的多能干细胞的方法。结果，在将作为安全的天然提取物的腔昆布提取物放入细胞培养基时，惊奇地发现能够以高效率制备出诱导性多能干细胞，再次将上述诱导性多能干细胞分化为脂肪细胞。在本专利技术中使用的术语“胚胎干细胞”作为在受精后的发生初期的胚泡(blastocyst)的内细胞团(innercellmass)中分离来进行培养的细胞，是指称具有多能性(pluripotency)的细胞。在本专利技术中使用的术语“多能干细胞”指称具有分化为构成生物体的3种胚叶的多能性的干细胞，上述3种胚叶即为内胚叶(endoderm)、中胚叶(mesoderm)、外胚叶(ectoderm)。在本专利技术中使用的术语“分化(differentiation)”是指在细胞通过分裂增殖生长的期间，互不相同的结构或功能被特异化的现象，即，为了执行生物的细胞、组织等应做的工作，而改变形态或功能。在本专利技术中使用的术语“细胞治疗剂”作为通过从人体中分离、培养及特异的操作制备的细胞及组织，以治疗、诊断及预防的目的而所使用的医药品，指称如下医药品，即，为了恢复细胞或组织的功能而在体外增殖、筛选出同种细胞或异种细胞，或者通过其他方法改变细胞的生物学特性等的一系列行为，以治疗、诊断及预防的目的使用的医药品。根据细胞的分化程度，细胞治疗剂大致分为体细胞治疗剂、干细胞治疗剂，尤其，本专利技术涉及干细胞治疗剂。本专利技术的间充质干细胞作为从哺乳动物来源胚胎干细胞或成体干细胞中分离出的细胞，优选地，上述间充质干细胞为脐带间充质干细胞，更优选地，上述间充质干细胞为人体脐带间充质干细胞。上述干细胞可以从用于连接人体的胎盘和胎儿的脐带中采集。从脐带中采集间充质干细胞的方法可以利用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种使间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，包括：步骤(a)，将腔昆布提取物放入细胞培养基；步骤(b)，在上述培养基使间充质干细胞脱分化为诱导性多能干细胞；以及步骤(c)，使上述诱导性多能干细胞分化为脂肪细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.11.01 KR 10-2013-01320591.一种使间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，包
括：
步骤(a)，将腔昆布提取物放入细胞培养基；
步骤(b)，在上述培养基使间充质干细胞脱分化为诱导性多能干
细胞；以及
步骤(c)，使上述诱导性多能干细胞分化为脂肪细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，上述腔昆布提取物
包含于选自由达尔伯克改良伊格尔培养基、最小必需培养基、伊格尔
基本培养基、洛斯维帕克培养基1640、F-10、F-12、达尔伯克改良伊
格尔培养基-F12、α-最小必需培养基、G-最小必需培养基、伊斯科夫氏
改良杜尔贝科氏培养基、麦科伊5A培养基、羊水培养基、新型二代羊
水培养基及张氏培养基、间充质干细胞无血清培养基组成的组中的培
养基。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以培养基组合物为
基准，包含100～400μg/ml的上述腔昆布提取物。
4.根据权利要求1所述的方法，上述培养基组合物还包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：李尚燃，郑元珠，金浩彬，吴珉善，李桂浩，
申请(专利权)人：株式会社美合康生，
类型：发明
国别省市：韩国;KR