一种含有狗尾草的镰刀菌培养基及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种含有狗尾草的镰刀菌培养基及其制备方法。配制1000ml培养基的配方如下：狗尾草50-200g，玉米淀粉3g，七水硫酸镁1.0g，磷酸二氢钾1.0g，琼脂15-20g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为6.0-8.0。该培养基以田间常见杂草狗尾草为主要材料，添加少量玉米淀粉、七水硫酸镁和磷酸二氢钾，作为辅助碳源和无机盐成分。本发明专利技术所提供培养基配方简单，不需要特殊设备，极易制备；采用该培养基可以对多种类型镰刀菌进行快速产孢培养，且生长迅速，产孢量极大。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物培养
，具体涉及一种含有狗尾草的镰刀菌培养基及其制备方法。
技术介绍
目前对田间杂草的回收利用的研究较少，造成了大量生物质资源的浪费。如，狗尾草是旱地作物常见的一种杂草，广泛分布于我国多个省市玉米种植区。狗尾草生育期与相应作物生育期较为一致，且根系发达，吸收水分和养分能力强，易与田间农作物争夺水分、养分、光照和空间等条件，其生长能力十分强。目前对于农田杂草多事采用化学防除的方法，缺乏回收利用方法。镰刀菌是我国较为常见的一类丝状真菌。镰刀菌有分生孢子（无性孢子）和子囊孢子（有性孢子）2种孢子，田间存在的为分生孢子形态，分生孢子呈镰刀形，顶端钝圆或略微收缩，有2-7个隔膜。微生物复杂多样，不同个体间的代谢过程往往有所差异，对于相应培养基也有特殊的要求。不同培养基内所含物质的不同，对相应菌株的生长产生很大的影响。目前以真菌进行植物病害控制和杂草生物防治的工作越来越普遍，生防真菌的研究已经得到越来越广泛的关注。而一种优质、低廉和易制备的培养基对于生防真菌的研究无疑至关重要，也是限制生防菌株低成本利用的重要限制条件。
技术实现思路
本专利技术目的是针对现有培养基的缺点，提供了一种镰刀菌培养基，以杂草狗尾草为主要的培养基碳、氮源和无机盐类物质提供者，并辅助以玉米淀粉、七水硫酸镁和磷酸二氢钾等物质，成本便宜，产孢迅速且产孢量极大。本专利技术采用了如下技术方案：一种含有狗尾草的镰刀菌培养基，配制1000ml培养基的配方如下：狗尾草50-200g，玉米淀粉3g，七水硫酸镁1.0g，磷酸二氢钾1.0g，琼脂15-20g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为6.0-8.0。优选的，狗尾草50g。优选的，pH为6.0-7.0。更优选的，pH为7.0。一种含有狗尾草的镰刀菌培养基的制备方法为：将狗尾草去除根部，洗净，进行人工切碎，茎叶片段小于5厘米，加入蒸馏水，煮沸30分钟，纱布过滤，收集过滤后所获得狗尾草汁液；加入玉米淀粉，七水硫酸镁，磷酸二氢钾，琼脂；加蒸馏水，调节pH为6.0-8.0，定容；将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。一种含有狗尾草的镰刀菌培养基的应用：将该培养基灭菌后倒入培养皿内，待培养基凝固后，接入相应镰刀菌菌株；培养温度为21-29℃，培养时间为为7天。优选的，培养温度为25-29℃。更优选的，培养温度为25℃。一种含有狗尾草的镰刀菌培养基的应用：适用于禾谷镰刀菌、串珠镰刀菌、尖孢镰刀菌、厚垣孢镰刀菌等各种镰刀菌。本专利技术的主要特点是：1.以杂草为基础材料，原材料极易获得，达到了废物利用的目的；2.配方简单，成本便宜；3.配制方法简便，操作简便，不需要特殊设备要求；4.本培养基可被广泛应用于多种镰刀菌的培养；5.镰刀菌培养效果优良，采用该培养基能够快速和大量的培养制备镰刀菌分生孢子；6.该培养基可被广泛应用于生防菌的培养，真菌营养生理、生化特征和遗传功能基因方面的研究。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术做进一步说明，但本专利技术不应解释为局限于这些实施例。实施例1不同杂草培养基的配制和培养效果比较取50g狗尾草，对狗尾草进行人工切碎，切碎至茎叶片段小于5厘米，沸水煮狗尾草茎叶30分钟，纱布过滤掉杂草茎叶。在过滤获得的狗尾草汁液中加入玉米淀粉3g，七水硫酸镁1.0g，磷酸二氢钾1.0g，琼脂18g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为7.0。并定容至1000ml。将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。根据组成成分，将该培养基定名为狗尾草玉米淀粉培养基（SCA）。将上述培养中的狗尾草替换为其它杂草，其他步骤不变，制作培养基。本实施例中同时采用稗草、马唐、牛筋草、看麦娘、播娘蒿和反枝苋作为添加杂草，与添加狗尾草的培养基进行横向比较。配制好的培养基用于培养禾谷镰刀菌菌株。PDA培养基活化保存的镰刀菌菌株，5天后，在菌落的边缘打取直径为5mm的菌饼，接种到各供试培养基上。将接种菌块的培养基放置到培养箱内，并将培养条件设定为25℃，黑暗培养。7天后测量菌落直径；3mL无菌水清洗菌落表面孢子，收集后血球计数板计数，计算产孢量。表1添加不同杂草培养基的培养试验注：表中数值为平均值±标准误（n=3），同行数据后的字母不同表示在0.05水平上差异显著。由表1提供的数据可以看出，通过在基础培养基（CK，玉米淀粉3g，七水硫酸镁1.0g，磷酸二氢钾1.0g，琼脂15-20g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为6.0-8.0）内添加相同含量的7种田间最常见杂草，根据实施例3中提到的方法，进行统计，发现添加狗尾草的培养基，无论是在菌落生长，还是在分生孢子产孢量方面都有显著优于添加其它杂草的培养基。实施例2镰刀菌培养常规培养基的配制和培养效果比较马铃薯葡萄糖培养基（PDA）：土豆200g，人工切成约2×2厘米的土豆块，沸水煮30分钟，纱布过滤，留取汁液。在过滤获得汁液中加入20g葡萄糖和20g琼脂，并定容至1000ml。将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。马铃薯蔗糖培养基（PSA）：土豆200g，人工切成约2×2厘米的土豆块，沸水煮30分钟，纱布过滤，留取汁液。在过滤获得汁液中加入20g蔗糖和20g琼脂，并定容至1000ml。将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。胡萝卜培养基（CA）：胡萝卜200g，人工切成约2×2厘米的胡萝卜块，沸水煮30分钟，纱布过滤，留取汁液。在过滤获得汁液中加入20g琼脂，并定容至1000ml。将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。玉米淀粉培养基（CS）：玉米淀粉3g、七水硫酸镁1.0g，磷酸二氢钾1.0g，琼脂15-20g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为6.0-8.0。将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。真菌培养基（ZJ）：蛋白胨5g，酵母粉2g，葡糖糖2g，KH2PO41g，MgSO40.5g，琼脂20g，水1000ml；将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。水琼脂培养基（WA）：琼脂20g，水定容至1000mL，将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有狗尾草的镰刀菌培养基，配制1000ml培养基的配方如下：狗尾草50‑200g，玉米淀粉3g，七水硫酸镁 1.0g，磷酸二氢钾 1.0g，琼脂15‑20g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为6.0‑8.0。

【技术特征摘要】
1.一种含有狗尾草的镰刀菌培养基，配制1000ml培养基的配方如下：狗尾草50-200g，
玉米淀粉3g，七水硫酸镁1.0g，磷酸二氢钾1.0g，琼脂15-20g，蒸馏水加至1000ml，调节pH
为6.0-8.0。
2.根据权利要求1所述的一种含有狗尾草的镰刀菌培养基，其特征在于：所述的狗尾草
为50g。
3.根据权利要求1所述的一种含有狗尾草的镰刀菌培养基，其特征在于：所述的pH为
6.0-7.0。
4.根据权利要求3所述的一种含有狗尾草的镰刀菌培养基，其特征在于：所述的pH为
7.0。
5.根据权利要求1-3所述的一种含有狗尾草的镰刀菌培养基的制备方法为，其特征在
于：
将狗尾草去除根部，洗净，进行人工切碎，茎叶片段小于5厘米，加入蒸馏水1000ml，煮
沸30分钟，纱布过滤，收集过滤后所获得狗尾草汁液；
加入玉...

【专利技术属性】
技术研发人员：李健，李美，高兴祥，房锋，
申请(专利权)人：山东省农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37