一种金鱼藻组织培养与快速繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种金鱼藻组织培养与快速繁殖方法。A、外植体选择：选择生长健壮，颜色鲜绿，无病虫害的植物茎段作为外植体。B、外植体灭菌：用酒精和植物组织抗菌剂处理外植体，制备无菌外植体。C、芽诱导：选择激素种类和浓度配比组合诱导芽生长。D、增殖培养：调整激素配比进行增殖培养 E、炼苗和移栽：在培养箱中打开瓶口培养两天，在转入自然水体中培养。该方法可以不受季节环境限制，培养出大量无菌苗，供水生生态系统恢复之用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养
，具体涉及沉水植物金鱼藻的组培和快速繁殖方法，该方法是利用完全无菌和严格的控温措施，实现了沉水植物金鱼藻在实验室大量生产，并可以推广到生态环境修复。
技术介绍
金鱼藻属于金鱼藻科金鱼藻属，在湖泊生态修复工程中作为净水工具种和植被恢复先锋物种、鱼虾蟹塘养殖过程中作为饵料、避难和产卵场所，以及室内观赏水族养殖过程中作为布景材料。目前尚缺乏成熟技术，可以大规模扩繁金鱼藻优质工程苗，同时克服该物种在自然环境中种源有限且污染严重的问题。
技术实现思路
本专利技术提供了一种金鱼藻组织培养与快速繁殖方法，该方法是在无菌条件下，采取控温措施，给予固定光照，培养无菌苗体系，可常年提供大量无菌幼苗。方法易行，操作方便，产量高。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种金鱼藻组织培养与快速繁殖方法，包括以下步骤：A、外植体选择与预处理：选择生长健壮，颜色鲜绿，无病虫害的可萌发腋芽的金鱼藻茎段作为外植体，然后用洗涤剂浸泡，无菌水清洗进行预处理；B、外植体灭菌：用酒精和植物组织抗菌剂处理外植体，制备无菌外植体；C、芽诱导：选择0.50mg/L6-BA和1.30mg/LIAA的MS固体培养基，蔗糖质量体积浓度为3%，pH调至5.8-6.0，固体培养基装于50毫升三角瓶中，每瓶20毫升；固体培养基经过120℃灭菌处理20min，冷却后，接入灭菌处理后的1-1.5cm的金鱼藻外植体，于光照培养箱中静置培养，待幼芽长至1.0-1.5cm进行增殖培养；D、增殖培养：选择蔗糖质量体积浓度1.5%的1/2MS液体培养基，添加0.5-2.00mg/L6-BA和0.01-1.00mg/LIAA的激素；液体培养基分装于200毫升三角瓶中，每瓶100毫升，培养基灭菌方式与芽诱导相同，接入长1.0-1.5cm的幼芽置于光照培养箱中静置，进行增殖培养；E、炼苗和移栽：待金鱼藻无菌苗长至4.0cm即可炼苗，打开瓶盖，室温下炼苗1-2d后洗净培养基，取出试管苗，移栽至自然水体中；所述的步骤C，D，E均采用无菌环境，光照60-70μE/（m2·s），光照周期为12h/d，室内温度（25±2）℃。所述步骤A中，预处理的具体步骤如下：用碱性洗涤剂浸泡30min，再用自来水冲洗1小时，用蒸馏水反复冲洗4-5次，用无菌水再反复清洗4-5次，置于无菌操作台。所述步骤B中，在无菌操作台上首先用75%乙醇浸泡15秒，用无菌水冲洗4-5次，再用5%植物组培抗菌剂PPM进行表面消毒5min，无菌水冲洗4-5次，在无菌滤纸上将水吸干，待用。本专利技术具有以下优点：目前关于金鱼藻组织培养的技术未见报道，也没有系统的对金鱼藻作出研究。但是金鱼藻是污染水体中最后坚守的水生植物，水体污染的后期，几乎只剩下金鱼藻，可见金鱼藻的耐污能力较强，因此获得足够的金鱼藻可以为水环境修复提供源源不断的种苗。该技术能直接诱导金鱼藻幼芽的生长，不断产生丛生芽，而且在液体环境中才能更好实现金鱼藻无菌苗的增殖培养。金鱼藻一年四季均可生长，但是冬季生长会变得迟缓，高温也会导致生长缓慢，利用本专利技术可以不受季节、温度、地域影响，获得大量的无菌苗。一个为长1.5cm的外植体经过一个月的培养可以繁殖出3-9cm长的幼苗，30d的增殖系数最高可达到18倍，一年一个芽理论上可繁殖十亿棵以上幼苗，远远优越于自然水体植物的繁殖速度。以一个芽30d继代一次，每次的繁殖系数为18计算，预期结果如下表1所示。表1天数/d306090120150180210240270300330360苗数/棵18182183184185186187188189181018111812具体实施方式本专利技术实施例所使用的试剂，如未特别说明，市售的均可实现本专利技术，所述技术方案，如未特别说明，均可采用本领域的常规技术。实施例1A、外植体选择与预处理：选择生长健壮，颜色鲜绿，无病虫害的可萌发腋芽的茎段作为外植体，用碱性洗涤剂浸泡30min，再在自来水下冲洗两小时，用蒸馏水反复冲洗4-5次，用无菌水再反复清洗4-5次，置于无菌操作台；B、外植体灭菌：在无菌操作台上首先用75%乙醇浸泡15秒，用无菌水冲洗4-5次，再用5%植物组培抗菌剂（PPM）进行表面消毒5分钟，无菌水冲洗4-5次，在无菌滤纸上将水吸干，待用；C、芽诱导：选择0.50mg/L6-BA和1.30mg/LIAA的MS固体培养基，蔗糖浓度为3%（质量体积比），pH调至5.8，培养基装于50毫升三角瓶中，每瓶20毫升。培养基经过120℃灭菌处理20min，冷却后，接入长约1.5cm的金鱼藻外植体。置于光照培养箱中静置培养，待芽长至1.5cm可进行增殖培养；D、增殖培养：选择1.5%蔗糖浓度（质量体积比）的1/2MS液体培养基，添加0.50mg/L6-BA和0.01mg/LIAA激素。液体培养基装于200毫升三角瓶中，每瓶100毫升，培养基灭菌方式与芽诱导相同，每瓶接入6棵，放入光照培养箱中进行增殖培养；E、炼苗和移栽：金鱼藻为不定根水生植物，不需根也可以生长，待无菌苗长至4.0cm即可炼苗，打开瓶盖，室温下炼苗1-2d后（打开瓶盖，静置在培养箱内即可），洗净培养基，取出试管苗，移栽至自然水体中。步骤C，D，E均为无菌环境，光照60-70μE/（m2·s），光照周期为12h/d，室内温度（25±2）℃。所述MS培养基配方如下：单位mg/LKNO31900NH4NO31650MgSO4·7H2O370KH2PO4170CaCl2·2H2O440MnSO4·4H2O22.3ZnSO4·7H2O8.6H3BO36.2KI0.83Na2MoO4·7H2O0.25CuSO4.5H2O0.025CoCL2.6H2O0.025Na2-EDTA37.3FeSO4·7H2O27.8甘氨酸2.0盐酸吡哆醇0.5盐酸硫铵素0.1烟酸0.5肌酸100。MS固体培养基为上述培养配方中加入6g/L琼脂。本方法可以由一个外植体直接诱导出幼芽，再不断繁殖得到更多的丛芽，30d的增殖系数达到18，且获得幼苗和自然环境中的金鱼藻没有差别。存活率大于90%。实施例2A、外植体选择与预处理：选择生长健壮，颜色鲜绿，无病虫害本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种金鱼藻组织培养与快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：A、外植体选择与预处理：选择生长健壮，颜色鲜绿，无病虫害的可萌发腋芽的金鱼藻茎段作为外植体，然后用洗涤剂浸泡，无菌水清洗进行预处理；B、外植体灭菌：用酒精和植物组织抗菌剂处理外植体，制备无菌外植体；C、芽诱导：选择0.50 mg/L 6‑BA和1.30mg/L IAA的MS固体培养基，蔗糖质量体积浓度为3%，pH调至5.8‑6.0，固体培养基装于50毫升三角瓶中，每瓶20毫升；固体培养基经过120℃灭菌处理20min，冷却后，接入灭菌处理后的1‑1.5cm的金鱼藻外植体，于光照培养箱中静置培养，待幼芽长至1.0‑1.5cm进行增殖培养；D、增殖培养：选择蔗糖质量体积浓度1.5%的1/2 MS液体培养基，添加0.5‑2.00 mg/L 6‑BA和0.01‑1.00 mg/L IAA的激素；液体培养基分装于200毫升三角瓶中，每瓶100毫升，培养基灭菌方式与芽诱导相同，接入长1.0‑1.5cm的幼芽置于光照培养箱中静置，进行增殖培养；E、炼苗和移栽：待金鱼藻无菌苗长至4.0cm即可炼苗，打开瓶盖，室温下炼苗1‑2d后洗净培养基，取出试管苗，移栽至自然水体中；所述的步骤C，D，E均采用无菌环境，光照60‑70μE/（m2·s），光照周期为12h/d，室内温度（25±2）℃。...

【技术特征摘要】
1.一种金鱼藻组织培养与快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、外植体选择与预处理：选择生长健壮，颜色鲜绿，无病虫害的可萌发腋芽的金鱼藻茎
段作为外植体，然后用洗涤剂浸泡，无菌水清洗进行预处理；
B、外植体灭菌：
用酒精和植物组织抗菌剂处理外植体，制备无菌外植体；
C、芽诱导：选择0.50mg/L6-BA和1.30mg/LIAA的MS固体培养基，蔗糖质量体积浓度
为3%，pH调至5.8-6.0，固体培养基装于50毫升三角瓶中，每瓶20毫升；固体培养基经过120
℃灭菌处理20min，冷却后，接入灭菌处理后的1-1.5cm的金鱼藻外植体，于光照培养箱中静
置培养，待幼芽长至1.0-1.5cm进行增殖培养；
D、增殖培养：选择蔗糖质量体积浓度1.5%的1/2MS液体培养基，添加0.5-2.00mg/L
6-BA和0.01-1.00mg/LIAA的激素；液体培养基分装于200毫升三角瓶中，每...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：水生藻安生物科技武汉有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42