一种免疫细胞冻存液及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种免疫细胞冻存液及其应用，所述免疫细胞冻存液包括重组人白介素-2、聚乙二醇、1,2-丙二醇，以及基础培养基或注射用氯化钠；具体的，所述免疫细胞冻存液包括：重组人白介素-250-200U/mL；聚乙二醇0.1-0.4g/mL；1,2-丙二醇0.2-0.4g/mL；基础培养基或注射用氯化钠90-99体积％。通过将本发明专利技术所述的免疫细胞冻存液用于免疫细胞冻存，可使复苏细胞存活率达到93％以上，细胞生物学特性不发生变化，保证了免疫细胞的生物学活性；另外，由于免疫细胞冻存液中不含动物血清，因此不会引入外源蛋白，降低了动物病原污染的可能性，而且有效解决了免疫细胞无法存储、长时间运输的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞冻存领域，特别是免疫细胞冻存领域，尤其涉及一种免疫细胞冻存液及其应用。
技术介绍
细胞冷冻技术作为一种保存细胞的有效方法在生物学领域已有深入广泛的应用。对供体的免疫细胞深低温保存可保持其活力和功能，无论对临床还是基础研究均具有重要意义，尤其是免疫细胞用于回顾性研究时更为重要。冷冻保存免疫细胞不仅可以解决现有免疫细胞诱导时间较长，需要多次诱导和患者多次采血的问题，还可以把人健康状态最好或战斗力最强时期的免疫细胞保存下来，用于肿瘤治疗以及抗衰老保健治疗。正常情况下，液体冻结时会造成细胞损伤，其中，一种情况是由于不适当的降温和复温导致细胞内形成冰晶和重结晶；另一种情况是由于冷冻使得电解质和溶质浓度升高所导致的溶质损伤。通常，免疫细胞在-70℃～-80℃冻存，细胞活性会随着冷冻时间的延长迅速下降，在-196℃时细胞生物学过程几乎停止，因此要长期保存免疫细胞，液氮温度是最佳的储存温度。选择合适的冷冻保护剂可以避免细胞在冷冻时细胞内冰晶的形成，保护细胞膜和细胞器免受损伤。细胞冻存经常采用渗透性保护剂，例如甘油和二甲基亚砜(DMSO)两种，而甘油作为冷冻保护剂冻存的免疫细胞存活率较低，但DMSO却可以迅速透入细胞，提高细胞膜对水的通透性，使水分在细胞冻结前透出细胞外形成冰晶，成为免疫细胞冻存最理想的冷冻保护剂。目前国内冻存方法多采用的是DMSO、动物血清和细胞培养液按不同比例搭配成的冻存液，例如CN102301992A公开的用于冻存单个核细胞的冻存液，其包含血浆和二甲基亚砜，但不仅限于此，还可以包含动物血清和培养基等成分。采用该冻存液的优点是细胞保存时间长，然而该冻存液中含有的动物血清引入了外源蛋白，同时增加了动物病原污染的可能性，会对人体过继免疫治疗产生一定影响。目前也有一些采用冻存液中不含动物血清的文献，例如，CN104026118A公开的免疫细胞冻存液，其包含二甲基亚砜、人供体血浆和免疫细胞基础培养基。采用该冷冻液的优点在于不会引入外源蛋白，降低了动物病原污染的可能性，然而该冷冻液冻存细胞的存活率以及细胞活性仍较低。因此，寻找一种如何保持细胞高活性并可实现长期存储、即时复苏的免疫细胞冻存液及冻存方法是目前亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种免疫细胞冻存液及其应用，特别提供了一种用于免疫细胞长期保存，并能够在复苏后保持其细胞特性的冻存液及其应用。为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：在第一方面，本专利技术提供了一种免疫细胞冻存液，其包括以下组分：重组人白介素-2、聚乙二醇、1,2-丙二醇，以及基础培养基或注射用氯化钠。通常，外周血的T细胞、B细胞和NK细胞膜表面均存在白介素-2(IL-2)受体，IL-2与其受体结合后可以调节该细胞的增生，调节免疫球蛋白的生成；促进T细胞、B细胞和NK细胞的增殖、分化并能提高NK细胞的杀伤活性。然而，目前主要是将IL-2作为体外刺激培养物用于免疫细胞的扩增培养，而本发明采用将重组人白介素-2(IL-2)添加到免疫细胞冻存液中，可大幅度提高所述免疫细胞的活性稳定性，使其保持原有细胞高活性，从而使免疫细胞很好地保持了细胞复苏后的生理功能和生物学特性，可有效解决细胞复苏后直接应用和进一步扩展的关键问题。本专利技术在免疫细胞冻存液中添加聚乙二醇和1,2-丙二醇，可以替代现用的二甲基亚砜(DMSO)为基础的冻存液，有效降低其对细胞毒性，维持细胞稳定性，提高复苏后直接应用的安全性，适合用于细胞冻存复苏后直接应用。本专利技术的免疫细胞冻存液并不排除其它成分的存在，比如生理盐水等，然而，本专利技术的免疫细胞冻存液不含有DMSO等应用过程存在安全风险的物质。本专利技术中，所述免疫细胞冻存液包括：重组人白介素-250-200U/mL；聚乙二醇0.1-0.4g/mL；1,2-丙二醇0.2-0.4g/mL；基础培养基或注射用氯化钠90-99体积％，总量为100％。本专利技术所述免疫细胞冻存液中的重组人白介素-2的含量为50-200U/mL，例如可以是50U/mL、60U/mL、80U/mL、100U/mL、120U/mL、150U/mL、1600U/mL、180U/mL、200U/mL。本专利技术所述免疫细胞冻存液中的聚乙二醇含量为0.1-0.4g/mL，例如可以是0.1g/mL、0.12g/mL、0.15g/mL、0.2g/mL、0.22g/mL、0.25g/mL、0.3g/mL、0.32g/mL、0.35g/mL、0.38g/mL、0.4g/mL。本专利技术所述免疫细胞冻存液中的1,2-丙二醇含量为0.2-0.4g/mL，例如可以是0.2g/mL、0.22g/mL、0.25g/mL、0.3g/mL、0.32g/mL、0.35g/mL、0.38g/mL、0.4g/mL。本专利技术所述免疫细胞冻存液中的基础培养基或注射用氯化钠的体积百分含量为90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％。如果在免疫细胞冻存液中还含有除重组人白介素-2、聚乙二醇、1,2-丙二醇组分以外的其它组分时，所述基础培养基或注射用氯化钠的含量会进行适当的下调，比如降低为80％-95％，例如所述基础培养的含量还可以是80％、80.5％、81％、81.5％、82％、82.5％、83％、83.5％、84％、84.5％、85％、85.5％、86％、86.5％、87％、87.5％、88％、88.5％、89％、89.5％，以满足所述免疫细胞冻存液中各组分含量之和为100％。本专利技术所述免疫细胞冻存液中的重组人白介素-2、聚乙二醇、1,2-丙二醇，以及基础培养基或注射用氯化钠可以采用上述各组分所选择的含量进行任意配合，各组分的体积百分含量之和为100％。优选地，所述免疫细胞冻存液包括：重组人白介素-280-180U/mL；聚乙二醇0.2-0.4g/mL；1,2-丙二醇0.25-0.4g/mL；基础培养基或注射用氯化钠95-99体积％。本专利技术所述免疫细胞冻存液中，所述基础培养基为RPMI-1640培养基(THERMO-HyClone)或淋巴细胞培养基[GT551/GT561(TAKARA)、TBD-DCNK1640(天津灏阳)、X-VIVOTM15(LONZA)]。优选地本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫细胞冻存液，其特征在于，其包括以下组分：重组人白介素‑2、聚乙二醇、1,2‑丙二醇，以及基础培养基或注射用氯化钠。

【技术特征摘要】
1.一种免疫细胞冻存液，其特征在于，其包括以下组分：重组人白介素-2、
聚乙二醇、1,2-丙二醇，以及基础培养基或注射用氯化钠。
2.如权利要求1所述的免疫细胞冻存液，其特征在于，所述免疫细胞冻存
液包括：重组人白介素-250-200U/mL；聚乙二醇0.1-0.4g/mL；1,2-丙二醇
0.2-0.4g/mL；基础培养基或注射用氯化钠90-99体积％；
优选地，所述免疫细胞冻存液包括：重组人白介素-280-180U/mL；聚乙二
醇0.2-0.4g/mL；1,2-丙二醇0.25-0.4g/mL；基础培养基或注射用氯化钠95-99体
积％。
3.如权利要求1或2所述的免疫细胞冻存液，其特征在于，所述基础培养
基为RPMI-1640培养基或淋巴细胞培养基；
优选地，所述淋巴细胞培养基为GT-T551培养基或GT-T561培养基。
4.如权利要求1-3任一项所述的免疫细胞冻存液，其特征在于，所述免疫
细胞冻存液还含有UltroserG、自体血浆或胎牛血清中的任意一种；
优选地，所述UltroserG的含量为0.2-1.8g/mL；
优选地，所述自体血浆的含量为10-90体积％；
优选地，所述胎牛血清的含量为10-90体积％。
5.如权利要求1-4任一项所述的免疫细胞冻存液，其特征在于，所述免疫
细胞冻存液进一步含有人血白蛋白或丙三醇；
优选地，所述人血白蛋白的含量为0.05-10.1g/mL；
优选地，所述丙三醇的含量为10-20体积％。
6.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘军，唐欢，
申请(专利权)人：上海润泉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31