【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
,具体涉及一种高危型人乳头状瘤病毒检测方法及其采用的寡核苷酸序列和寡核苷酸探针。
技术介绍
人乳头状瘤病毒(HumanPapillomaVirus,HPV)是一种嗜上皮性病毒,具有高度的特异性,属于双链闭环的小DNA病毒,包含约8000个碱基对。迄今为止,已发现的HPV有100多个型别,各型别与体内特定感染部位和病变有关,其中有40多个型别与人类生殖道疾病有关。HPV感染主要是通过性生活传播,感染后通常没有明显的临床症状,感染的高峰年龄在18~28岁。然而大部分妇女的HPV感染为一过性,经2~3年内一般可自行消失,大约只有10%~15%的35岁以上的妇女有持续感染的情况,HPV持续感染将有患宫颈癌的风险。在临床上,根据HPV亚型致病力大小或致癌危险性大小不同,将HPV分为低危型和高危型两大类。低危型主要导致尖锐湿疣和低度宫颈上皮内瘤变CINⅠ,如HPV6、HPV11、HPV30、HPV39、HPV42、HPV43、HPV44亚型。高危型除可引起生殖器疣病外,更重要的是引起外生殖器癌、宫颈癌和CINⅡ、CINⅢ,如HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV66等。有报道称99.8%的子宫颈癌活检标本中可以检测到HPV-DNA,其中,HPV16和HPV18型致病率最强,约占70%。HPV16型感染多见于宫颈鳞癌,而HPV18型感染多见于宫颈腺癌。在妇女的一生中,可反复感染HPV,也可同时感染多种不同型别的H ...
【技术保护点】
一种高危型人乳头状瘤病毒检测方法,其特征在于具有以下步骤:S1:设计并合成特异性寡核苷酸序列;所述特异性寡核苷酸序列为下述Seq1和Seq3、或者为下述Seq2和Seq4;Seq1:5'‑CATCTGCAAAAAAATA‑Biotin‑3';Seq2:5'‑TCAACATCCCAAAA‑Biotin‑3';Seq3:5'‑NH2‑GTCACTAGGCCGCCA‑Biotin‑3';Seq4:5'‑NH2‑AAAACTTTTCCTTTA‑Biotin‑3';上述Seq1和Seq2为捕获DNA序列;上述Seq3和Seq4为显示DNA序列;S2:分别制备CdTe量子点、硅纳米粒子以及磁性纳米粒子;S3:将步骤S1中的显示DNA序列分别与CdTe量子点和硅纳米粒子结合得到显示探针;将步骤S1中的捕获DNA序列与磁性纳米粒子结合得到捕获探针;将待测样品先后与捕获探针以及显示探针混合,根据混合液的荧光强度判断待测样品中是否含有高危型人乳头状瘤病毒。
【技术特征摘要】
1.一种高危型人乳头状瘤病毒检测方法,其特征在于具有以下步骤:
S1:设计并合成特异性寡核苷酸序列;所述特异性寡核苷酸序列为下述Seq1和Seq3、或者为下述Seq2和Seq4;
Seq1:5'-CATCTGCAAAAAAATA-Biotin-3';
Seq2:5'-TCAACATCCCAAAA-Biotin-3';
Seq3:5'-NH2-GTCACTAGGCCGCCA-Biotin-3';
Seq4:5'-NH2-AAAACTTTTCCTTTA-Biotin-3';
上述Seq1和Seq2为捕获DNA序列;上述Seq3和Seq4为显示DNA序列;
S2:分别制备CdTe量子点、硅纳米粒子以及磁性纳米粒子;
S3:将步骤S1中的显示DNA序列分别与CdTe量子点和硅纳米粒子结合得到显示探针;将步骤S1中的捕获DNA序列与磁性纳米粒子结合得到捕获探针;将待测样品先后与捕获探针以及显示探针混合,根据混合液的荧光强度判断待测样品中是否含有高危型人乳头状瘤病毒。
2.根据权利要求1所述的高危型人乳头状瘤病毒检测方法,其特征在于:上述步骤S2中所述的CdTe量子点为亲和素化的CdTe量子点;上述步骤S2中所述的CdTe量子点的平均粒径为3~5nm;上述步骤S2中所述的硅纳米粒子为戊二醛交联的氨基化硅纳米粒子;上述步骤S3中所述的硅纳米粒子的平均粒径为90~110nm;上述步骤S2中所述的磁性纳米粒子为亲和素化的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子;上述步骤S2中所述的磁性纳米粒子的平均粒径为45~50nm。
3.根据权利要求1或2所述的高危型人乳头状瘤病毒检测方法,其特征在于:上述步骤S3中显示DNA序列的生物素化端与CdTe量子点结合,氨基化端通过戊二醛交联剂与硅纳米粒子结合。
4.根据权利要求1所述的高危型人乳头状瘤病毒检测方法,其特征在于:上述步骤S3中硅纳米粒子的浓度为1mg/mL~10mg/mL。
5.根据权利要求1所述的高危型人乳头状瘤病毒检测方法,其特征在于:上述步骤S3中捕获探针的浓度为0.1m...
【专利技术属性】
技术研发人员:缪婷婷,江华,王周平,虞斌,董一善,
申请(专利权)人:常州市妇幼保健院,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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