神经生长因子缓释微球制剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及神经生长因子缓释微球制剂及其制备方法，属于药物制剂领域。神经生长因子缓释微球制剂，由以下重量百分比含量的成份组成：神经生长因子0.01～2％，两嵌段两亲性聚合物40～99.88％，稳定剂0～40％，冻干保护剂0.1～50％；本发明专利技术的优点是：采用冻干保护剂单独或与稳定剂协同作用，保持冻干、储存和释放过程中神经生长因子的二聚体形式，并进一步增强神经生长因子在冻干、储存和释放过程中的稳定性。本发明专利技术显著降低了稳定剂的含量，避免稳定剂过多对药物释放产生的不利影响，降低了突释，使释放更稳定，特别在释放后期极大提高了药物的活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及神经生长因子缓释微球制剂及其制备方法，属于药物制剂领域。
技术介绍
神经生长因子(NerveGrowthFactor，NGF)是一种具有神经元营养和促进突起生长双重生物学功能的小分子多肽类神经营养因子，具有较强的促细胞分裂功能，对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。目前，神经生长因子可用于视神经损伤、脑、脊髓损伤、脊髓移植、骨科四肢神经损伤、坐骨神经损伤、多发性神经炎、椎间盘痛、神经断裂及退行性病变。但在实际应用中，由于神经生长因子的半衰期较短，在水溶液中易失活，且易受湿度、酸碱度等多种因素的影响，在神经再生及治疗疾病的漫长过程中，神经生长因子不能长时间持续发挥促再生作用，需要频繁给药才能实现良好的治疗效果，制备神经生长因子的长效缓释微球制剂是改善上述问题的有效途径。现有常用的制备微球方法是复乳法(W/O/W)，虽然操作简单，但针对制备神经生长因子的缓释微球制剂还存在如下的问题：一、研究报道，神经生长因子主要是以二聚体的形式发挥药效，而单体的形式虽然活性没有完全丧失，但药效显著降低。现有制备微球的方法中，采用了添加药物稳定剂的方法保护药物的活性，但微球在冻干、储存和释放时，特别是冻干与存储过程中，由于蛋白药物受到强烈的外界应力作用(包括低温应力，pH的改变，离子强度增加等)，蛋白药物的结构和活性遭到破坏。蛋白二聚体容易发生解聚，影响蛋白活性。二、药物稳定剂的含量不仅影响药物活性也会影响药物释放，而现有方法常常为了保护药物活性加入浓度过大、含量较高的药物稳定剂(大部分在内水相的浓度超过0.1g/ml)。虽然药物的活性得到一定的保护，但较高的内水相渗透压，会进一步影响药物释放行为，可能引起高突释(突释率大于15％)、释放过快或过慢、释放不完全(在理论释放期内积累释放率低于80％)等，降低药物的治疗效果。
技术实现思路
本专利技术要解决的第一个技术问题是提供一种突释率低、缓释性好、蛋白活性持久的神经生长因子长效缓释微球制剂。本专利技术要解决的第二个技术问题是提供上述神经生长因子长效缓释微球制剂的制备方法。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：神经生长因子缓释微球制剂，由以下重量百分比含量的成份组成：神经生长因子0.01～2.00％，两嵌段两亲性聚合物40.00～99.88％，稳定剂0～40.00％，冻干保护剂0.10～50.00％；稳定剂选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白、羧甲基葡聚糖、环糊精或聚乙二醇中的一种或多种；冻干保护剂选自蔗糖、甘露醇、海藻糖、泊洛沙姆或乳糖中的一种或多种。所述两嵌段两亲性聚合物选自聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乳酸-聚乙二醇共聚物中的一种或多种，分子量为5,000～80,000道尔顿；神经生长因子是以二聚体形式起药效，因此二聚体的解聚降低了药物的活性。本发明研究发现冻干保护剂能够单独或与稳定剂协同保护NGF二聚体，抵抗其在冻干过程中受到的应力作用(包括低温应力，pH的改变，离子强度增加等)，保护神经生长因子在冻干和储存过程中的结构和活性。而且协同作用使得稳定剂在极低含量条件下，提高了神经生长因子在释放过程中的稳定性。本专利技术中神经生长因子在冻干、储存和释放过程中二聚体形式得到很好的保护，极大的提高药物的活性。本专利技术所用的两嵌段两亲性聚合物的种类及分子量的选择，综合考虑了聚合物的降解率、物理性质、神经生长因子的释放周期等多种因素。优选的神经生长因子缓释微球制剂，由以下重量百分比含量的成份组成：神经生长因子0.01～1.26％，两嵌段两亲性聚合物70.00～99.00％，稳定剂0.005～3.14％，冻干保护剂0.23～42.73％；两嵌段两亲性聚合物的分子量为10,000～40,000道尔顿。所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中聚乳酸和羟基乙酸的比例为50∶50～85∶15，聚乳酸-聚乙二醇共聚物中，聚乳酸和聚乙二醇的比例为5∶1～20∶1。所述稳定剂聚乙二醇为聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇800、聚乙二醇1000、聚乙二醇2000或聚乙二醇4000。更优选的神经生长因子缓释微球制剂，由以下重量百分比含量的成份组成：神经生长因子0.02～1.26％，两嵌段两亲性聚合物90.00～98.00％，稳定剂0.015～3.14％，冻干保护剂1.21～9.05％。本专利技术所述神经生长因子包括但不限于鼠源性神经生长因子(mNGF)、人源性神经生长因子(hNGF)或重组人神经生长因子(rhNGF)。所述神经生长因子缓释微球制剂的平均粒径为1～100微米，优选20～80微米。神经生长因子缓释微球制剂的制备方法，包括以下步骤：1)将含神经生长因子和稳定剂的水相作为内水相W1，将两嵌段两亲性聚合物材料溶于有机溶剂中，形成油相O；将这两相混合均质乳化制备W1/O初乳液；2)将步骤1)所得W1/O初乳液加入到含有表面活性剂的外水相W2中，再用一定的转速均质体系形成W1/O/W2复乳液；3)将步骤2)所得W1/O/W2复乳液通过室温搅拌挥发或将其倒入含有NaCl的萃取液去除有机溶剂，再将微球离心、洗涤；4)将步骤3)所得的微球悬浮于含有冻干保护剂的水溶液中，经过冷冻干燥后，得到神经生长因子缓释微球制剂。所述步骤1)中的内水相选自去离子水、柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液、磷酸缓冲液中的一种，有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、二甲苯、甲苯、乙酸乙酯、丙酮中的任意一种或至少2种的混合物，有机溶剂中含有的两嵌段两亲性聚合物的浓度为0.010～0.500g/ml，两嵌段两亲性聚合物与神经生长因子的重量含量比为4500∶1～50∶1，稳定剂浓度为0～0.200g/ml，内水相W1与油相O的体积比为1∶1～1∶15；步骤2)中的表面活性剂选自聚乙烯醇(PVA)、聚山梨酯(Tween80)、聚山梨酯(Tween20)、或十二烷基磺酸钠(SDS)，表面活性剂浓度为0.001～0.100g/ml，油相O与外水相W2的体积比1∶2～1∶25；步骤4)中冻干保护剂浓度为0.001～0.150g/ml。优选的，所述步骤1)中有机溶剂中含有的两嵌段两亲性聚合物的浓度0.050～0.300g/ml，聚合物与NGF重量含量比为4500∶1～50∶1，稳定剂浓度为0.0005～0.050g/ml，所述内水相W1和油相O的体积比为1∶2～1∶10；步骤2)中表面活性剂的浓度为0.002～0.050g/ml，油相O与外水相W2的体积比1∶5～1∶本文档来自技高网...

【技术保护点】
神经生长因子缓释微球制剂，其特征在于：由以下重量百分比含量的成份组成：神经生长因子0.01～2.00％，两嵌段两亲性聚合物40.00～99.88％，稳定剂0～40.00％，冻干保护剂0.10～50.00％；稳定剂选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白、羧甲基葡聚糖、环糊精或聚乙二醇中的一种或多种；冻干保护剂选自蔗糖、甘露醇、海藻糖、泊洛沙姆或乳糖中的一种或多种。

【技术特征摘要】
1.神经生长因子缓释微球制剂，其特征在于：由以下重量百分比含量的成份组成：
神经生长因子0.01～2.00％，两嵌段两亲性聚合物40.00～99.88％，稳定剂0～40.00％，冻
干保护剂0.10～50.00％；稳定剂选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白、羧甲基葡聚糖、环
糊精或聚乙二醇中的一种或多种；冻干保护剂选自蔗糖、甘露醇、海藻糖、泊洛沙姆或
乳糖中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的神经生长因子缓释微球制剂，其特征在于：所述两嵌段
两亲性聚合物选自聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乳酸-聚乙二醇共聚物中的一种
或多种，分子量为5,000～80,000道尔顿。
3.根据权利要求1或2所述的神经生长因子缓释微球制剂，其特征在于：所述神
经生长因子缓释微球制剂由以下重量百分比含量的成份组成：神经生长因子
0.01～1.26％，两嵌段两亲性聚合物70.00～99.00％，稳定剂0.005～3.14％，冻干保护剂
0.23～42.73％；所述两嵌段两亲性聚合物的分子量为10,000～40,000道尔顿。
4.根据权利要求1或2所述的神经生长因子缓释微球制剂，其特征在于：所述神
经生长因子缓释微球制剂由以下重量百分比含量的成份组成：神经生长因子
0.02～1.26％，两嵌段两亲性聚合物90.00～98.00％，稳定剂0.015～3.14％，冻干保护剂
1.21～9.05％。
5.根据权利要求2～4中任何一项所述的神经生长因子缓释微球制剂，其特征在于：
所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中聚乳酸和羟基乙酸的比例为50∶50～85∶15；聚乳酸-聚
乙二醇共聚物中，聚乳酸和聚乙二醇的比例为5∶1～20∶1。
6.根据权利要求1～5中任何一项所述的神经生长因子缓释微球制剂，其特征在于：
所述稳定剂聚乙二醇为聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇800、聚乙二醇1000、
聚乙二醇2000或聚乙二醇4000。
7.根据权利要求1～6中任何一项所述的神经生长因子缓释微球制剂，其特征在于：
所述神经生长因子为鼠源性神经生长因子、人源性神经生长因子或...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐峰，谭剑平，
申请(专利权)人：舒泰神北京生物制药股份有限公司，北京舒泰神新药研究有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11