树莓中酚类化合物的分离方法技术

一种树莓中酚类化合物的分离方法，所述方法包括以下步骤：1)使用酮类溶剂溶解树莓样品并混匀；2)过滤后取滤液，浓缩滤液后使用有机酸稀释滤液；3)使用固相萃取柱纯化稀释后的滤液，加入酸化的醇类溶剂；4)采用HPLC检测并分离样品混合物。本发明专利技术的分离方法中，预处理树莓样品的方法简便有效；本发明专利技术的分离方法通过高效液相色谱进行，过程易于控制，方法稳定可靠；5)本发明专利技术的方法可以得到树莓中的八种酚类物质，为酚类化合物的检测提供有力指导。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及天然药物化学领域，具体而言，涉及一种树莓中酚类化合物的分离方法。
技术介绍
树莓(学名：RubuscorchorifoliusL.f.)，又名山莓、山抛子、牛奶泡、撒秧泡，三月泡、四月泡、龙船泡，大麦泡、泡儿刺，刺葫芦、馒头菠、高脚波，直立灌木，高1-3米；枝具皮刺，幼时为柔毛。单叶，卵形至卵状披针形，多生在向阳山坡、山谷、荒地、溪边和疏密灌丛中潮湿处，目前尚未由人工引种栽培。花期2-3月，果期4-6月。具有涩精益肾助阳明目、醒酒止渴、化痰解毒之功效，主治肾虚、遗精、醉酒、丹毒等症。叶性微苦，解毒、消肿、敛疮等、咽喉肿痛、多发性脓肿、乳腺炎等症。除东北、甘肃、青海、新疆、西藏外，中国其余省份、朝鲜、日本、缅甸、越南均有分布。树莓中含有八种酚类物质，分别为，即花青素(cyanidin3-sophoroside,cyaniding3-glucoside和pelargonidin3-glucoside)，原花青素(表儿茶素和儿茶素)，黄酮醇(quercetin3-glucoside)，鞣花酸和白藜芦醇。以上酚类物质具有生物活性，有着抗肿瘤等多方面的作用，然而测定其含量以及对其进行分离的难度较高，未见有相关报道。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种树莓中酚类化合物的分离方法，所述方法通过合理的预处理以及配套的后续处理，最终使用HPLC将树莓中的八种酚类物质分离出来。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：本专利技术的一个方面涉及一种树莓中分类化合物的分离方法，所述方法包括以下步骤：1)使用酮类溶剂溶解树莓样品并混匀；2)过滤后取滤液，浓缩滤液后使用有机酸稀释滤液；3)使用固相萃取柱纯化稀释后的滤液，加入醇-酸溶剂；4)采用HPLC检测并分离样品混合物。本专利技术通过预处理树莓样品，使得样品中的酚类物质较好地溶出并稳定地保藏在溶剂中，使用酸化醇类溶剂保持树莓中酚类物质的稳定。最终通过HPLC的手段实现样品中各酚类物质的分离。优选地，所述步骤1)中的有机溶剂为酮类有机溶剂，优选地，所述酮类溶剂是丙酮。优选地，所述混匀具体为，在匀浆机搅拌，其中搅拌的转速为15000-20000rpm，搅拌时间为40-80秒。转速过快很会使一些酚类物质降解损失，预处理时间过短不能充分提取酚类物质，过长使一些酚类物质容易氧化。优选地，所述步骤2)中在真空条件下过滤，滤渣使用步骤1)中的有机溶剂清洗，收集清洗液，优选地，清洗进行3-5次。优选地，所述步骤2)中的浓缩在温度30-40℃，压力小于1MPa的条件下进行，优选地，浓缩至出线黄色小颗粒时停止。优选地，所述步骤2)中的有机酸被水稀释至体积百分含量为2-5％，优选地，所述有机酸为为含有1-3个碳原子的有机酸，更优选地，所述有机酸是甲酸。优选地，所述步骤3)中的醇-酸溶剂中，醇为含有1-3个碳原子的醇类，酸为含有1-3个碳原子的有机酸，优选地，所述醇-酸溶剂中，酸的体积百分含量为2-5％。优选地，所述步骤3)中使用固相萃取柱纯化前，对固相萃取柱进行激活，优选地，激活的具体过程为，依次使用相当于柱容量1-2倍的甲醇、相当于柱容量1-2倍的去离子水和相当于柱容量1-2倍的3％甲酸水溶液处理所述固相萃取柱。优选地，所述步骤4)中的HPLC采用梯度洗脱的方式进行，所述梯度洗脱的流动相由甲醇和重水组成，洗脱过程中，甲醇在所述流动相中的体积百分比在45-55分钟内由15％逐步递增至100％，优选地，所述流动相中还含有体积百分比计2-3％的甲酸。优选地，所述步骤4)中HPLC的柱温为38-42℃，流动相的流速为0.8-1.2ml/min。本专利技术的另一方面涉及所述方法在其他空心莓中酚类化合物的分离中的应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术的分离方法中，预处理树莓样品的方法简便有效；(2)本专利技术的分离方法通过高效液相色谱进行，过程易于控制，方法稳定可靠；(3)本专利技术的方法可以得到树莓中的八种酚类物质，为酚类化合物的检测提供有力指导。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1按照以下步骤进行树莓中各种酚类化合物的分离前预处理1)3g树莓样品与15mL丙酮放在50mL的离心管中使用匀浆机搅拌，在15000rpm下搅拌80秒，获得样品和丙酮的混合物；2)并将步骤1)中获得的混合物在真空下过滤，并用5mL丙酮洗涤残留物3次，并将3次过滤液合并，其中过滤操作采用漏斗滤纸进行，并且，漏斗滤纸上覆盖一层玻璃棉；3)使用旋转冷凝蒸发仪在35℃蒸发过滤液，直至出现黄色的小颗粒停止蒸发；4)蒸发后将浓缩的样品溶解在5mL的2％乙酸中，并通过C18Sep-Pak柱，其中，C18Sep-Pak柱使用前，依次采用5ml的甲醇、6ml的去离子水、3％的甲酸激活。；5)用2mL含有2％乙酸的酸化甲醇复活花色素苷及其他酚类化合物并回收，所有的回收样品均通过0.45μm针头式过滤器过滤，每个样品10μL的提取液用于高效液相色谱测定分析；6)使用高效液相色谱仪分别在波长280nm、365nm和520nm下同时检测不同酚类化合物，获得8个不同树莓酚类物质，并将其归为5组，即花青素(cyanidin-3sophoroside,cyanidin-3glucoside和pelargonidin-3glucoside)，原花青素(表儿茶素和儿茶素)，黄酮醇(quercetin-3glucoside)，鞣花酸和白藜芦醇。实施例2按照以下步骤进行树莓中各种酚类化合物的分离前预处理1)3g树莓样品与15mL丙酮放在50mL的离心管中使用匀浆机搅拌，在17500rpm下搅拌1分钟，获得样品和丙酮的混合物；2)并将步骤1)中获得的混合物在真空下过滤，并用5mL丙酮洗涤残留物5次，并将5次过滤液合并，其中过滤操作采用漏斗滤纸进行，并且，漏斗滤纸上覆盖一层玻璃棉；3)使用旋转冷凝蒸发仪在30℃蒸发过滤液，直至出现黄色的小颗粒停止蒸发；4)蒸发后将浓缩的样品溶解在5mL的3％甲酸中，并通过C18Sep-Pak柱，其中C18Sep-Pak柱使用前，依次采用5ml的甲醇、6ml的去离子水、3％的甲酸激活；5)用2mL含有3％甲酸的酸化甲醇复活花色素苷及其他酚类化合物并回收，所有的回收样品均通过0.45μm针头式过滤器过滤，每个样品10μL的提取液用于高效液相色谱测定分析；6)使用高效液相色谱仪分别在波长280nm、365nm和520nm下同时检测不同酚类化合物，获得8个不同树莓酚类物质，并将其归为5组，即花青素(cyanidin3-sophoroside,cyaniding3-glucoside和pelargonidin3-glucoside)，原花青素(表儿茶素和儿茶素)，黄酮醇(quercetin3-glucoside)，鞣花酸和白藜芦醇。实施例3按照以下步骤进行树莓中各种酚类化合物的分离前预处理1)3g树莓样品与15mL丙酮放在50mL的离心管中使用匀浆机搅本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种树莓中酚类化合物的分离方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)使用酮类溶剂溶解树莓样品并混匀；2)过滤后取滤液，浓缩滤液后使用有机酸稀释滤液；3)使用固相萃取柱纯化稀释后的滤液，加入酸化的醇类溶剂；4)采用HPLC检测并分离样品混合物。

【技术特征摘要】
1.一种树莓中酚类化合物的分离方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)使用酮类溶剂溶解树莓样品并混匀；2)过滤后取滤液，浓缩滤液后使用有机酸稀释滤液；3)使用固相萃取柱纯化稀释后的滤液，加入酸化的醇类溶剂；4)采用HPLC检测并分离样品混合物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中的酮类溶剂是丙酮。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混匀具体为，在匀浆机搅拌，其中搅拌的转速为15000-20000rpm，搅拌时间为40-80秒。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中在真空条件下过滤，滤渣使用步骤1)中的有机溶剂清洗，收集清洗液，优选地，清洗进行3-5次。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的浓缩在温度30-40℃，压力小于1MPa的条件下进行，优选地，浓缩至出现黄色小颗粒时停止。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的有机酸为体积百分含量为2-5％的水溶液，优选地，所述有机酸为含有1-3个碳原子的有机酸，更优选地，所述有机酸是甲酸。7.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：张志敏，朱祥，丁新泉，王锐，姚琦馥，李建新，
申请(专利权)人：铜仁学院，
类型：发明
国别省市：贵州;52