对溶血磷脂酸特异性识别的多肽探针及其制备与应用制造技术

技术编号:14887864 阅读:145 留言:0更新日期:2017-03-28 17:56
本发明专利技术提供了一种卵巢癌早期血清标志物溶血磷脂酸(LPA)和一种对其特异性识别的多肽探针及多肽探针的制备与应用,所述多肽探针由多肽Peptide、连接基团Linker、荧光基团Dye通过酰胺键连接而成。所述多肽探针可以在卵巢癌发生的早期从临床血清样品中准确地检测到LPA的存在,并且结合近红外成像仪进行成像,可用于卵巢癌的早期诊断。因此,基于LPA在卵巢癌早期诊断中的高灵敏度、特异性,本发明专利技术对卵巢癌标志物LPA特异性识别,为实现卵巢癌的早期诊断提供了重要的临床判断依据。该探针使用操作简单、成本低,为癌症生物标志物检测、近红外荧光成像等领域提供了良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及肿瘤诊断的药物领域,具体涉及的是卵巢癌早期血清标志物溶血磷脂酸(LPA)和对其特异性识别的多肽探针及多肽探针的制备与应用,该LPA多肽探针为新型多肽探针,通过特异性结合细胞、血清或者活体中的LPA来检测LPA含量,并可进一步用于检测卵巢癌。
技术介绍
卵巢恶性肿瘤(卵巢癌)由于发病隐匿,被形容为最致命的癌症之一。卵巢癌的早期症状很不明显,初期症状只是腹部疼痛或膨胀、肠胃消化不良,而未引起足够的重视。仅2004年,美国约有24,000名妇女患卵巢癌,而有14,000名妇女死于卵巢癌。全世界范围内,估计每年有190,000新增病例,有114,000例死亡病例。如果能在早期诊断将会提高治愈率,不幸的是,卵巢癌患者发现时往往已经到了晚期,四例卵巢癌病人中三例在晚期才被诊断,延误了病情。传统的治疗方法,包括手术、化学药物治疗、放射治疗及综合治疗等,仍难以治愈卵巢癌,其存活率小于20%,并容易旧病复发。因此,提高卵巢癌的早期诊断水平、监测其治疗效果是新近妇科肿瘤研究关注的热点。目前使用CA125标志物的检测方法能够诊断出末期的卵巢癌,但不能够非常有效地诊断出初期的卵巢癌,且有时还会呈现“误导性”的结果。CA125是一种肿瘤表面抗原。上皮组织产生病变,体内就会产生CA125,因此上皮组织的癌症一般会使血液中的CA125上升。但与其他多数肿瘤标记物一样,CA125没有百分百的“标准值”,即不是只有癌症才会使CA125上升,子宫内膜异位症、骨盆腔发炎时,也会导致CA125上升,所以利用CA125来诊断是否患有癌症,并不是那么准确。此外,不是每一种卵巢癌都是属于上皮细胞肿瘤,有些是胚胎组织或腺体细胞的肿瘤,因此CA125不会出现变化。使用CA125标志物的检测方法不可避免的存在一些缺陷。因此,迫切需要一个特异性和敏感性较强的标志物来提高卵巢癌的诊断水平。溶血磷脂酸(LPA)这一新的标志物在良性肿瘤及正常组织中含量较低,但在卵巢癌中含量很高。之前研究结果也显示,LPA用于卵巢癌的早期诊断优于CA125。更多的实验可以证明LPA是一个非常有诊断意义的肿瘤标记物,也有报道称LPA在卵巢癌中高表达,而在其他癌症中未见表达。目前世界上对于卵巢癌的诊断用的最多的还是检测CA125,已建立的方法主要包括酶联免疫吸附法(ELISA),免疫荧光法(FAT)和化学发光(CLIA)。其中,ELISA方法和FAT方法由于受其灵敏度和特异性的限制,无论是检测抗原还是抗体,都很难满足早期诊断的需要。
技术实现思路
针对上述现有技术存在的问题和实际需求,本专利技术的目的在于提供一种卵巢癌早期血清标志物溶血磷脂酸(LPA)和一种对其特异性识别的多肽探针及多肽探针的制备与应用,该多肽探针是一类新型的用于制备具有卵巢癌早期诊断作用的多肽探针,该多肽探针具有对卵巢癌早期血清标志物LPA特异性识别,在体外对细胞、血清中LPA特异性识别发出增强的荧光,在体内对LPA特异性识别特异性结合浓聚到肿瘤部位,利用近红外活体成像技术检测体内卵巢癌早期血清标志物LPA,为实现卵巢癌的早期诊断提供了重要的临床判断依据。本专利技术的技术方案如下:本专利技术提供一种对溶血磷脂酸(LPA)特异性识别的多肽探针由多肽Peptide、连接基团Linker、近荧光基团Dye通过酰胺基连接而成。专利技术提供一种对卵巢癌早期血清标志物溶血磷脂酸(LPA)特异性识别的多肽探针的结构为:Peptide-Linker-Dye。所述多肽Peptide为靶向肿瘤的RGD、NGR多肽,所述多肽Peptide序列中含有RGD或NGR多肽,多肽序列可以是一条或多条,优选一条或两条。进一步,所述多肽Peptide的单条多肽的氨基酸数目为3-15个氨基酸。本专利技术所述的对卵巢癌早期血清标志物溶血磷脂酸(LPA)特异性识别的多肽探针,多肽Peptide优选自,如下表格:表1:多肽序列:多肽序列氨基酸数,名称受体靶向组织RGD3,RGD整合素肿瘤KRGDK5,KRGD整合素肿瘤CDCRGDCFC9,RGD-4C整合素肿瘤CRGDK/RGPD/EC5,iRGD整合素肿瘤cyclo-RGDf/k/y5,cRGD整合素肿瘤NGR3,NGRCD13受体肿瘤新生血管CNGRC5,NGRCD13受体肿瘤新生血管CNGRCVSGCAGRC13,NGRCD13受体肿瘤新生血管本专利技术所述的对卵巢癌早期血清标志物溶血磷脂酸(LPA)特异性识别的多肽探针,多肽Peptide优选KRGDK和CNGRC多肽序列。一是为了增强肽链的水溶性,二是为了增强卵巢癌细胞对LPA多肽探针的摄入,增强LPA多肽探针在肿瘤组织中的积累。根据本专利技术所述的对溶血磷脂酸特异性识别的多肽探针,所述连接基团Linker为一个或多个肽核酸单体、一个或多个聚乙二醇单体、一个或多个氨基酸。进一步,所述连接基团Linker为1-4个肽核酸单体、1-4个聚乙二醇单体、1-4个氨基酸。本专利技术所述的对卵巢癌早期血清标志物溶血磷脂酸(LPA)特异性识别的多肽探针,连接基团Linker优选的是鸟嘌呤肽核酸单体GB,甘氨酸G和聚乙二醇PEG2,其中鸟嘌呤肽核酸单体GB通过其氢键相互作用增强荧光猝灭效果,降低起始荧光强度。具体地说,本专利技术所述连接基团Linker优选的是:其中:R1为氢、碱基;R2为Fmoc保护基团。本专利技术所述的对LPA特异性识别的多肽探针,所述荧光基团Dye为任意一种荧光基团。所述的对LPA特异性识别的多肽探针选取荧光染料Dye的目的是在特定波长激发下能发出荧光便于检测,只要能实现该功能的其他染料都可以。进一步,所述荧光基团Dye优选的是近红外方酸菁染料,成本低、荧光穿透组织能力强,降低组织背景荧光干扰;在600-700nm激发下,在700-800nm发出强烈的荧光,实现近红外荧光检测。更进一步具体地说,本专利技术所述荧光基团Dye优选自R1,R2=(CH2)n,n=1-15;R3=H,OH,OMe,SO3Na,SO3K;R4=CH,COOH其中:R1、R2为C2-C15的烷基链;R3为氢、-OH、-OMe、-SO3Na或-SO3K;R4为CN或COOH。本专利技术提供的对LPA特异性识别的多肽探针,优选的多肽探针K(RGDK-GBGB-Dye)2,CDCRGDCFC-ABTB-Dye,K(RGDK-GG-Dye)2,CRGDKGBCBDye,cyclo-KRGDf-PEG2-Dye,K(CNGRC-PEG2-Dye)2,CNGRCNGRC-GG-Dye,CNGRCVSGCAGRC-PEG2-Dye,KRGDKGBGBDye,KRGDKGGDye,KRGDK-PEG2-Dye,CNGRC-GG-Dye,CNGRC-PEG2-Dye。本专利技术所述的对LPA特异性识别的多肽探针的制备,包括以下步骤:(1)将Rink酰胺树脂和Fmoc起始氨基酸置于反应瓶中,加入有机碱和缩合剂,在DMF溶液中,室温条件下反应3小时后,再脱除Fmoc保护基团,得到与赖氨酸偶联的树脂;(2)依次重复步骤(1),其中原料氨基酸依次替换为其他氨基酸,最终得到与上述氨基酸依次偶联的树脂;(3)将步骤(2)得到与上述氨基酸依次偶联的树脂与连本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种对溶血磷脂酸特异性识别的多肽探针,其特征在于:所述多肽探针由多肽Peptide、连接基团Linker、荧光基团Dye通过酰胺键连接而成。

【技术特征摘要】
1.一种对溶血磷脂酸特异性识别的多肽探针,其特征在于:所述多肽探针由多肽Peptide、连接基团Linker、荧光基团Dye通过酰胺键连接而成。2.根据权利要求1所述的对溶血磷脂酸特异性识别的多肽探针,其特征在于:所述多肽探针的结构为:Peptide-Linker-Dye。3.根据权利要求1所述的对溶血磷脂酸特异性识别的多肽探针,其特征在于:所述多肽Peptide为靶向肿瘤的RGD、NGR多肽,所述多肽Peptide序列中含有RGD或NGR多肽,多肽序列可以是一条或两条。4.根据权利要求3所述的对溶血磷脂酸特异性识别的多肽探针,其特征在于:所述多肽Peptide的单条多肽的氨基酸数目为3-15个氨基酸。5.根据权利要求1所述的对溶血磷脂酸特异性识别的多肽探针,其特征在于:所述连接基团Linker为一个或多个肽核酸单体、一个或多个聚乙二醇单体、一个或多个氨基酸。6.根据权利要求1所述的对溶血磷脂酸特异性识别的多肽探针,其特征在于:所述连接基团Linker为1-4个肽核酸单体、1-4个聚乙二醇单体、1-4个氨基酸。7.根据权利要求1所述的对溶血磷脂酸特异性识别的多肽探针,其特征在于:所述荧光基团Dye为任意...

【专利技术属性】
技术研发人员:吴君臣姚德帆林之张文旭赖燕华李尚田禾
申请(专利权)人:华东理工大学
类型:发明
国别省市:上海;31

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