当前位置: 首页 > 专利查询>遵义医学院专利>正文

一种精子电镜标本的制片方法技术

技术编号:14854837 阅读:105 留言:0更新日期:2017-03-18 22:14
本发明专利技术公开了显微镜载物片制备领域的一种精子电镜标本的制片方法,a、将实验鼠处死,用浓度为75%的酒精浸泡灭菌后,在实验鼠的腹部剪开一道切口,使附睾暴露;分离附睾,并将附睾从实验鼠的腹部取出,使用PBS液清洗,至液体清澈,无血液残留,将附睾剪短,保留附睾尾,将其置于浓度为2.5%的戊二醛中浸泡(固定);b、将步骤a处理后的附睾尾置于3~5℃的环境下放置20~26h后,制作电镜标本即可。本方案避免精子直接接触到制片过程中使用的试剂,进而避免精子被试剂冲散,提高了制片的成功率,避免制片过程中使用到的各种原料的浪费,还提高了工作效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及显微镜载物片的制备领域,具体涉及一种精子电镜标本的制片方法
技术介绍
由于电镜产生的电子束穿透能力很弱,必须把标本切成厚度小于0.1μm以下的薄片才适用,这样的薄片称为超薄切片,常用的超薄切片厚度是50-70nm。而超薄切片技术是制备超薄切片最常用、最基本的制备技术。其制作过程基本需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片和染色等步骤。实验室实验时,为了降低不可控因素的干扰,通常是针对性的对观察目标进行处理,避免夹杂其它干扰因素。例如,在雄性生殖能力的实验研究中,经常需要制作精子的电镜标本,也需要使用超薄切片技术,目前常规的制作方法是将精子从附睾中取出,然后用PBS液冲洗,离心,弃掉上清液,然后将离心后的精子用戊二醛固定,最后于电镜室制作标本,用于超微机构的观察。但是该法存在较大缺陷,因为实验将观察目标精子直接从附睾中取出,精子暴露在外,且电镜标本制作过程中需要多种液体对固定好的样本进行冲洗,这必然导致精子样本被冲散,则会使得精子样本量不足够多,最后将不能成功制作电镜标本,这样的情况出现时,需要重新制片,加大了工作量,还导致制片过程中使用到的原料的浪费。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种精子电镜标本的制片方法,以解决现有技术制备精子标本过程中,精子暴露在外容易被试剂冲散,导致制片失败的技术问题。为了解决上述技术问题,本专利技术提供如下基础技术方案:一种精子电镜标本的制片方法,包括以下步骤:a、从经过灭菌处理的实验鼠中分离附睾,并将附睾从实验鼠的腹部取出,使用PBS液清洗,至液体清澈,无血液残留,将附睾剪短,保留附睾尾,将其置于浓度为2.5%的戊二醛中浸泡;b、将步骤c处理后的附睾尾置于3~5℃的环境下放置20~26h后,制作电镜标本即可。本专利技术的有益效果为:本专利技术突破现有常规技术操作方法,直接采用附睾组织来观察精子,这样一来省去了使用离心将精子从附睾中取出的步骤,最终制备的标本是附睾尾和精子的结合,精子不直接暴露在附睾外,附睾尾对精子的移动进行限制,在使用PBS液清洗时,PBS液更多的是接触到附睾,最终经过戊二醛浸泡固定,这样避免精子直接接触到制片过程中使用的试剂,进而大大降低了精子被试剂冲散的可能,提高了制片的成功率,避免制片过程中使用到的各种原料的浪费,还提高了工作效率。本方案和现有技术相比,还无需将精子从附睾中取出,进而也就不需要离心操作,减少了工作环节,操作简单易行。进一步,作为对基础方案的优化方案一:步骤a中附睾尾在戊二醛中浸泡的时间为1~2h。使用戊二醛浸泡附睾尾的目的是尽可能使细胞中的各种细胞器以及大分子结构保持生活状态,并且牢固地固定在它们原来所在的位置上,有助于电镜观察。而为了达到更好的固定效果,本方案通过实践证明将附睾尾浸泡1~2h的固定效果最佳,基本无细胞离散和失活的现象发生。进一步,作为对基础方案和优化方案一的优化:步骤b中将保留下的附睾尾修成1mm×1mm×2mm大小长条形。因为戊二醛的渗透能力较弱,如果修整后的附睾尾太大,则附睾尾的内部将不能得到良好的浸泡固定。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术技术方案进一步说明,但并不因此将本专利技术限制在所述实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件和步骤的实验方法,按照本领域的常规方法和条件操作。实施例1:一种精子电镜标本的制片方法,包括以下步骤:a、通过实验手段使实验鼠窒息,将实验鼠用浓度为75%的酒精浸泡灭菌后,在实验鼠的腹部剪开一道V形切口,使附睾暴露;分离附睾,并将附睾从实验鼠的腹部取出,使用PBS液清洗,至液体清澈,无血液残留,将附睾剪短,保留附睾尾,将其置于浓度为2.5%的戊二醛中浸泡2h;b、将步骤a处理后的附睾尾置于5℃的环境下放置26h后,修成1mm×1mm×2mm大小长条形电镜标本即可进行电镜观察。实施例2:一种精子电镜标本的制片方法,包括以下步骤:a、通过实验手段使实验鼠窒息,将实验鼠用浓度为75%的酒精浸泡灭菌后,在实验鼠的腹部剪开一道V形切口,使附睾暴露;分离附睾,并将附睾从实验鼠的腹部取出,使用PBS液清洗,至液体清澈,无血液残留,将附睾剪短,保留附睾尾,将其置于浓度为2.5%的戊二醛中浸泡1.5h;b、将步骤a处理后的附睾尾置于4℃的环境下放置24h后,修成1mm×1mm×2mm大小长条形电镜标本即可进行电镜观察。实施例3:一种精子电镜标本的制片方法,包括以下步骤:a、通过实验手段使实验鼠窒息,将实验鼠用浓度为75%的酒精浸泡灭菌后,在实验鼠的腹部剪开一道V形切口,使附睾暴露;分离附睾,并将附睾从实验鼠的腹部取出,使用PBS液清洗,至液体清澈,无血液残留,将附睾剪短,保留附睾尾,将其置于浓度为2.5%的戊二醛中浸泡1h;b、将步骤a处理后的附睾尾置于3℃的环境下放置20h后,修成1mm×1mm×2mm大小长条形电镜标本即可进行电镜观察。对于本领域的技术人员来说,在不脱离本专利技术结构的前提下,还可以作出若干变形和改进,这些也应该视为本专利技术的保护范围,这些都不会影响本专利技术实施的效果和专利的实用性。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种精子电镜标本的制片方法,其特征在于,包括以下步骤:a、从经过灭菌处理的实验鼠中分离附睾,并将附睾从实验鼠的腹部取出,使用PBS液清洗,至液体清澈,无血液残留,将附睾剪短,保留附睾尾,将其置于浓度为2.5%的戊二醛中浸泡;b、将步骤a处理后的附睾尾置于3~5℃的环境下放置20~26h后,制作电镜标本即可。

【技术特征摘要】
1.一种精子电镜标本的制片方法,其特征在于,包括以下步骤:a、从经过灭菌处理的实验鼠中分离附睾,并将附睾从实验鼠的腹部取出,使用PBS液清洗,至液体清澈,无血液残留,将附睾剪短,保留附睾尾,将其置于浓度为2.5%的戊二醛中浸泡;b、将步骤a处理后的附睾尾置于3~5℃的环...

【专利技术属性】
技术研发人员:孔德营张继东张仕斌刘福慧
申请(专利权)人:遵义医学院
类型:发明
国别省市:贵州;52

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1