一种鸡球虫病疫苗免疫方法技术

本发明专利技术涉及生物免疫领域，具体公开了一种鸡球虫病疫苗的免疫方法，具体为对1日龄雏鸡经口免疫球虫病疫苗，1～3天后，再次经口免疫相同的球虫病疫苗。按照本发明专利技术所述方法进行鸡球虫病疫苗免疫，既可有效避免初次免疫后大量排出卵囊被鸡群食入爆发球虫病的风险，又可提高球虫病疫苗免疫的整齐度至90％以上，还可迅速建立免疫保护力，对球虫再次感染实现更好的保护，减缓因疫苗免疫引起的生产性能下降，增加养殖效益。同时，可降低或杜绝抗球虫药物的使用量，提供更加安全、绿色的禽肉和蛋产品。不仅如此，还节约了现有免疫方法的成本，经济效益巨大。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物免疫领域，具体地说，涉及鸡球虫病疫苗免疫。
技术介绍
鸡球虫病(CoccidiosisinChicken)是鸡常见且危害十分严重的寄生虫病，是由一种或多种球虫引起的急性流行性寄生虫病。它造成的经济损失是惊人的。10～30日龄的雏鸡或35～60日龄的青年鸡的发病率和致死率可高达80％。病愈的雏鸡生长受阻，增重缓慢；成年鸡一般不发病，但为带虫者，增重和产蛋能力降低，是传播球虫病的重要病源。目前，鸡球虫病疫苗的免疫程序均采用雏鸡一次免疫法。其是利用鸡摄入自身疫苗接种后排出的卵囊进行加强免疫，进而建立抵抗球虫感染的完全保护性免疫力，然而这一过程需要至少4周的时间(球虫完成2-3次生活史)。因此，在疫苗免疫建立保护力之前的时间，机体不能抵抗大剂量球虫的感染。生产中为解决此问题，常常采取疫苗免疫结合药物防治的策略来控制球虫病疫苗免疫后可能导致的球虫病的爆发，这无疑增加了养殖成本，降低了养殖业的经济效益。
技术实现思路
为了解决现有球虫病疫苗免疫中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种新的鸡球虫病疫苗免疫方法，改变现有的球虫病疫苗免疫策略或免疫程序，缩短疫苗免疫建立保护力的时间，进而降低鸡摄入自身疫苗接种后排出的卵囊后的负作用，同时能够为鸡群提供良好的抗球虫感染的免疫保护。为了实现本专利技术目的，本专利技术提供一种鸡球虫病疫苗免疫方法，具体为：对1日龄雏鸡经口免疫球虫病疫苗；1～3天后，再次经口免疫相同的球虫病疫苗。所述雏鸡包括但不限于肉鸡、蛋鸡或种鸡。所述球虫病疫苗可为市售可得的商品化疫苗，也可优选为后文提供的转基因球虫疫苗。受免鸡在首次免疫后，排出球虫卵囊的时间约为5～14天。按照本专利技术所述的免疫方法，在首次免疫后的1～3天，再次经口进行二次免疫，可使受免鸡在摄入自身所排出的卵囊之前，进行二次免疫应答，避免机体在未建立免疫保护力前，摄入过量卵囊对肠道造成严重损伤。经试验研究发现，若在首免2天后进行二免，能达到最佳的免疫保护效果，具体表现为攻虫感染后卵囊排出更少、病变更轻、体增重更优。进一步地，所述疫苗的免疫剂量为商品化疫苗推荐剂量的1/2。例如，鸡球虫病四价活疫苗疫苗(佛山市正典生物技术有限公司，兽药生字(2008)190462139)的推荐剂量为1100±10％(275±10％卵囊/种)，将其应用于本专利技术中，分为两次免疫，每次剂量为550±10％。本专利技术对现有技术的贡献主要在于提供了两次免疫的免疫策略与二免时间与剂量的选择。但为了避免商品化疫苗推荐剂量差异较大，本专利技术进一步提供更加明确的剂量标准，即两次疫苗免疫的剂量各为100～800卵囊/种/羽，优选为两次疫苗免疫的剂量相同，优选为125～175卵囊/种/羽。使用时，可同时参考商品化疫苗推荐剂量和本专利技术所述剂量进行。更进一步地，为了使球虫病的免疫防控更加安全、有效，本专利技术提供了一种改进的球虫病疫苗，所述球虫病疫苗包含引起保护性免疫响应的免疫原，所述免疫原为可表达调节宿主免疫应答强度相关因子的转基因球虫。其中，所述调节宿主免疫应答强度相关因子包括细胞因子、免疫受体的配体及不同虫种间能够调控免疫应答的虫体抗原。所述细胞因子选自Th1类细胞因子，优选为IFN-γ。所述免疫受体的配体选自活化T细胞的协同作用因子，即第二信号因子，优选为抗体Fc片段或CD40L。所述不同虫种间能够调控免疫应答的虫体抗原选自与树突状细胞表面受体结合的抗原因子，优选为Profilin。所述转基因球虫的构建方法如下：1)构建含有上述细胞因子基因的球虫转染载体，利用球虫自身调控原件如启动子等，大量制备后利用限制性内切酶线性化；2)利用限制性内切酶介导的核转染技术(转染仪器：NucleofectorII,AMAXA,程序U-033)将线性化载体转染至球虫子孢子；3)转染后的子孢子经泄殖腔接种雏鸡，获得转基因球虫卵囊，经连续筛选与单克隆分选获得稳定遗传群体。可选地，鸡IFN-γ、鸡IgYFc、鸡CD40L、和巨型艾美耳球虫Profilin的核苷酸序列如SEQIDNO.1～4所示。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了一种鸡球虫病疫苗免疫方法，既可有效避免初次免疫后大量排出卵囊被鸡群食入爆发球虫病的风险，又可提高球虫病疫苗免疫的整齐度至90％以上，还可迅速建立免疫保护力，对球虫再次感染实现更好的保护，减缓因疫苗免疫引起的生产性能下降，增加养殖效益。同时，可降低或杜绝抗球虫药物的使用量，提供更加安全、绿色的禽肉和蛋产品。不仅如此，还节约了现有免疫方法的成本，经济效益巨大。此外，本专利技术还利用转基因技术，构建表达调节宿主免疫应答强度的相关因子(包括细胞因子、免疫受体的配体及不同虫种间能够调控免疫应答的虫体抗原)的转基因球虫，该类转基因球虫和野生型球虫相比，具备更强的免疫原性，作为新型球虫病的疫苗组分更安全、有效，能够迅速建立免疫保护力。以该类转基因球虫为疫苗组分可进一步提升现有球虫病疫苗的免疫效果，降低球虫病疫苗免疫产生的副作用，具备良好的经济效益和广阔的应用前景。附图说明图1为本专利技术实施例1的免疫策略。图2为本专利技术实验例1的实验分组。图3为本专利技术实验例1中的卵囊排出量比较。图4为本专利技术实验例1中的平均肠道病变计分比较。图5为本专利技术实验例1中的体重比较。图6为本专利技术构建的表达细胞因子(Interferon-γ，IFN-γ)的转基因柔嫩艾美耳球虫(Trans1)与传统疫苗组分即野生型球虫(WT)免疫原性及保护力的比较。其中：(A)免疫后各组鸡群的卵囊排出动态规律；(B)免疫后14天攻虫的卵囊排出量；(C)免疫后14天攻虫前后鸡群体增重；(D)免疫后14天攻虫，盲肠病变计分；(E)免疫后28天攻虫的卵囊排出量；(F)免疫后28天攻虫前后鸡群体增重；(G)免疫后28天攻虫，盲肠病变计分。图7为本专利技术构建的免疫受体的配体(抗体Fc片段)的转基因柔嫩艾美耳球虫(Trans2)与传统疫苗组分即野生型球虫(WT)免疫原性及保护力的比较。其中：(A)免疫后各组鸡群的卵囊排出动态规律；(B)免疫后14天攻虫的卵囊排出量；(C)免疫后14天攻虫前后鸡群体增重；(D)免疫后14天攻虫，盲肠病变计分；(E)免疫后28天攻虫的卵囊排出量；(F)免疫后28天攻虫前后鸡群体增重；(G)免疫后28天攻虫，盲肠病变计分。图8为本专利技术构建的免疫受体的配体(CD40L)的转基因柔嫩艾美耳球虫(Trans3)与传统疫苗组分即野生型球虫(WT)免疫原性及保护力的比较。其中：(A)免疫后各组鸡群的卵囊排出动态规律；(B)免疫后14天攻虫的卵囊排出量；(C)免疫后14天攻虫前后鸡群体增重；(D)免疫后14天攻虫，盲肠病变计分；(E)免疫后28天攻虫的卵囊排出量；(F)免疫后28天攻虫前后鸡群体增重；(G)免疫后28天攻虫，盲肠病变计分。图9为本专利技术构建的不同虫种间差异的免疫调节抗原(巨型艾美耳球虫Profilin)的转基因柔嫩艾美耳球虫(Trans4)与传统疫苗组分即野生型球虫(WT)免疫原性及保护力的比较。其中：(A)免疫后各组鸡群的卵囊排出动态规律；(B)免疫后14天攻虫的卵囊排出量；(C)免疫后14天攻虫前后鸡群体增重；(D)免疫后14天攻虫，盲肠病变计分；(E)免疫后28天攻虫的卵囊排出量；(F)免疫后28天攻虫前后鸡本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸡球虫病疫苗免疫方法，其特征在于，对1日龄雏鸡经口免疫球虫病疫苗；1～3天后，再次经口免疫相同的球虫病疫苗。

【技术特征摘要】
1.一种鸡球虫病疫苗免疫方法，其特征在于，对1日龄雏鸡经口免疫球虫病疫苗；1～3天后，再次经口免疫相同的球虫病疫苗。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，2天后，再次经口免疫球虫病疫苗。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，两次疫苗免疫的剂量各为100～800卵囊/种/羽。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，两次疫苗免疫的剂量相同，为125～175卵囊/种/羽。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述球虫病疫苗包含引起保护性免疫响应的免疫原，所述免...

【专利技术属性】
技术研发人员：索勋，索静霞，汤新明，刘贤勇，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11