本发明专利技术属于生物医学检测领域，具体涉及一种Ficolin-3电化学免疫传感器及其制备与应用。本发明专利技术所述电化学免疫传感器，包括工作电极，所示工作电极包括基底电极和捕获分子，所述基底电极选用玻碳电极，所述捕获分子选用Ficolin-3单克隆抗体。与传统的Ficolin-3检测手段相比，本发明专利技术的电化学免疫传感器具有如下优点：（1）灵敏度高，检测限低至100 ng/mL；（2）检测时间缩短三分之一，准确性强；（3）本发明专利技术所构建的电化学免疫传感器不需要对工作电极中的基底电极做修饰，制作及操作更简单，成本低，应用前景广阔。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学检测领域，具体涉及一种Ficolin-3电化学免疫传感器及其制备与应用。
技术介绍
近年来，糖尿病发病率逐年增加，已经成为全世界严重的公共健康问题。II型糖尿病是代谢性疾病，多见于中、老年人，占糖尿病患者的90％以上。生物标志物是用来表达某种生物学状态或过程的物质，能够反映机体内存在某种微生物或生物学过程，特殊疾病状态，或者具有特殊DNA序列片段或特殊遗传信息。生物标志物可以是蛋白质，肽段，核酸，糖化合物，脂类化合物及小分子物质等。临床上，生物标志物常常用于疾病筛查和诊断(包括临床疗效判断)。分子诊断学是新发展的临床诊断方法，主要是对DNA、RNA和蛋白质的检测。分子诊断学主要是利用分子生物学的技术和方法研究人体内源性或外源性生物大分子的存在、结构或表达调控的变化，为疾病的预防、预测、诊断、治疗和转归提供信息和决策依据。分子诊断技术的发展方向是特异性好、灵敏度高、针对性强、诊断快速。固然，到目前为止，分子杂交、聚合酶链式反应(PCR)和DNA序列测定仍然是检测DNA和RNA的基本技术和主流技术，蛋白质印迹(Westernblot)、酶联免疫吸附法(ELISA)、蛋白截短测试和质谱法仍然是分析测定蛋白质的主要手段。传统的检测生物标志物的方法有PCR、ELISA和电泳等，这些方法基本上是医院检测的“金标准”，结果比较准确可靠，但是存在一些缺点，如检测灵敏度低、检测时间长、需要贵重的仪器，不利于生物标志物含量低的疾病的早期检测。已有很多研究发现了很多与II糖尿病发生发展和早期诊断相关的生物标记物，其中有蛋白质、DNA和microRNA等。Ficolin-3是一种补体系统模式识别蛋白，参与机体天然免疫，激活补体凝集素途径，调理炎症，清除晚期凋亡细胞等。2008年发现Ficolin-3在II型糖尿病人血清中表达异常，有望作为检测II型糖尿病的生物标记物，并应用大量的临床样本证明了Ficolin-3可以作为II型糖尿病预测新标记物。Ficolin-3在糖尿病领域的重要发现为糖尿病的早期发现、及时干预提供了必要手段，也为未来糖尿病的有效治疗提出进一步探索的方向。目前针对血清Ficolins的检测方法有WesternBlotting和ELISA，WesternBlot所需要的设备方便，使用灵活，但是缺点是定量结果不准确、操作复杂、重现性不理想，稳定性差；ELISA法则操作步骤繁琐且成本高。因此，有必要寻找更好的Ficolins的检测方法。
技术实现思路
为了克服现有技术中所存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种Ficolin-3电化学免疫传感器及其制备与应用。为了实现上述目的以及其他相关目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面，提供了一种Ficolin-3电化学免疫传感器，包括工作电极，所示工作电极包括基底电极和捕获分子，所述基底电极选用玻碳电极，所述捕获分子选用Ficolin-3单克隆抗体。优选地，所述捕获分子固定于所述基底电极上。进一步优选地，所述捕获分子通过静电引力吸附于所述基底电极上。优选地，所示基底电极上捕获分子的密度范围是56.62～106.16ng/mm2。更优选地，所示基底电极上捕获分子的密度范围是56.62～70.77ng/mm2。优选地，所述捕获分子选用鼠抗人Ficolin-3单克隆抗体。优选地，所示电化学免疫传感器中还含有参比电极和对电极。优选地，所示参比电极选用银/氯化银。所示对电极选用铂电极。本专利技术的第二方面，提供了前述电化学免疫传感器中工作电极的制备方法，包括步骤：在基底电极表面添加捕获分子，孵育，获得工作电极。本专利技术的第三方面，提供了一种电化学免疫检测系统，包括前述电化学免疫传感器。优选地，电化学免疫检测系统，还包括生物素标记Ficolin-3多克隆抗体、亲和素修饰的辣根过氧化物酶(Avidin-HRP)、含有过氧化氢的TMB底物溶液。优选地，所述生物素标记Ficolin-3多克隆抗体为生物素标记羊抗人Ficolin-3多克隆抗体。本专利技术的第四方面，提供了一种使用前述电化学免疫传感器检测Ficolin-3的方法，包括步骤：(1)封闭电化学免疫传感器中工作电极上的非特异性结合位点；(2)在步骤(1)所得已经封闭其他非特异性结合位点的工作电极上添加待测样本，孵育；(3)再在步骤(2)所得工作电极上添加生物素标记Ficolin-3多克隆抗体，孵育；(4)再在步骤(3)所得工作电极上添加亲和素修饰的辣根过氧化物酶(Avidin-HRP)；(5)将步骤(4)所得工作电极放在含有过氧化氢的TMB底物溶液中，进行检测。优选地，所述方法为非疾病诊断目的的方法。优选地，步骤(1)中，采用BSA封闭电化学免疫传感器中工作电极上的非特异性结合位点。优选地，步骤(2)中，孵育温度为4～25℃，孵育时间为45～75min。更优选地，孵育时间为60min。优选地，步骤(3)中，所述生物素标记Ficolin-3多克隆抗体为生物素标记羊抗人Ficolin-3多克隆抗体。优选地，步骤(3)中，孵育温度为4～25℃，孵育时间为60～90min。更优选地，孵育时间为60min。优选地，步骤(3)中，生物素标记Ficolin-3多克隆抗体的浓度为25～30μg/ml。更优选地，生物素标记Ficolin-3多克隆抗体的浓度为25μg/ml。优选地，步骤(4)中，检测时采用三电极系统，除了工作电极以外，还包括对电极和参比电极。优选地，采用铂电极为对电极，银/氯化银为参比电极。本专利技术第四方面提供了前述电化学免疫传感器在制备Ficolin-3检测产品中的用途。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：与传统的Ficolin-3检测手段相比，本专利技术的电化学免疫传感器具有如下优点：(1)灵敏度高，检测限低至100ng/mL；(2)检测时间缩短三分之一，准确性强；(3)本专利技术所构建的电化学免疫传感器不需要对工作电极中的基底电极做修饰，制作及操作更简单，成本低，应用前景广阔。附图说明图1：本专利技术电化学免疫传感器检测原理图。图2：电化学阻抗图谱法的尼奎斯特图。图3：(A)构建的电化学免疫传感器检测0μg/ml(实线)、25μg/ml(长虚线)和50μg/ml(短虚线)的Ficolin-3时响应的循环伏安曲线；(B)电化学免疫传感器对0μg/ml(实线)、25μg/ml(长虚线)和50μg/ml(短虚线)Ficol本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种Ficolin‑3电化学免疫传感器，包括工作电极，所示工作电极包括基底电极和捕获分子，所述基底电极选用玻碳电极，所述捕获分子选用Ficolin‑3单克隆抗体。
【技术特征摘要】
1.一种Ficolin-3电化学免疫传感器，包括工作电极，所示工作电极包括基底电极和捕获
分子，所述基底电极选用玻碳电极，所述捕获分子选用Ficolin-3单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的电化学免疫传感器，其特征在于，所述捕获分子固定于所述基底
电极上。
3.根据权利要求1所述的电化学免疫传感器，其特征在于，所述捕获分子通过静电引力吸
附于所述基底电极上。
4.根据权利要求1所述的电化学免疫传感器，其特征在于，所示基底电极上捕获分子的密
度范围是56.62～106.16ng/mm2。
5.根据权利要求1所述的电化学免疫传感器，其特征在于，所述捕获分子选用鼠抗人
Ficolin-3单克隆抗体。
6.根据权利要求1所述的电化学免疫传感器，其特征在于，所示电化学免疫传感器中还含
有参比电极和对电极。
7.如权利要求1～6任一权利要求所述电化学免疫传感器中工作电极的制备方法，包括步
骤：在基底电极表面添加捕获分子，孵育，获得工作电极。
8.一种电化学免疫检测系统，包括如权利要求1～6任一权利要求所述电化学免疫传感器。
9.根据权利要求8所述的电化学免疫检测系统，其特征在于，还包括生物素标记Ficolin-3
多克隆抗体、亲和素修饰的辣根过氧化物酶、含有过氧化氢的TMB底物溶液。
10.根据权利要求9所述的电化学免疫检测系统，其特征在于，所述生物素标记Ficolin-3
多克隆抗体为生物素标记羊抗人Ficolin-3多克隆抗体。
11.一种使用如权利要求1～6任一权利要求所述电化学免疫传感器检测Ficolin-3的方法，
包括步骤：
(1)封闭电化学免疫传感器中工作电极上的...
【专利技术属性】
技术研发人员：宓现强，散丽黎，吴家睿，曾冬冬，
申请(专利权)人：中国科学院上海高等研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。