本发明专利技术公开了一种孤独症血清多肽标志物PF4-A及其应用，其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。该分子称为PF4-A，是血小板因子4(PF4)的一个片段，其精确分子量为7775道尔顿PF4-A在孤独症患儿血清检测中呈现显著高表达，用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)检测PF4-A或ELISA方法测检测PF4的表达水平，可作为孤独症血清的检测方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于孤独症检测
，涉及一种孤独症血清多肽标志物PF4-A及其应用。
技术介绍
孤独症，也称为孤独症谱系障碍(AutismSpectrumDisorders，ASD)，是一种以社会功能缺失、言语和非言语沟通异常，以及行为和兴趣刻板局限为主要特征的广泛神经发育障碍，患病率约1％。一般发病于3岁前的幼儿期，并持续终生，男孩发病率是女孩的4～6倍。研究表明，ASD的早期诊断和筛查有助于增加孤独症儿童从早期干预中获益的机会。然而由于缺乏生物标志物，目前对ASD的筛查诊断主要以儿童的行为特征及发育史为基础，因此存在争议，亟需筛选可量化生物学诊断指标。ASD发病率逐年增加，已经引起了学术界的广泛关注。该病的诊断最初起源于对一组病人临床症状的观察，从有孤独症诊断至今，由于缺乏可量化的指标，诊断标准修改过多次。孤独症诊断标准的主要内容均为症状描述，并且其症状存在多样性，学界对其以症状表述为主的诊断标准存在争议。因此，筛查ASD可量化的生物学指标、生物标志物的鉴定、不仅有利于其早期筛查及诊断，对该病发病机制的探讨、诊断标准的制定及治疗药物的研制亦具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种孤独症血清多肽标志物PF4-A及其应用，该分子多肽为血小板因子4(PF4)的一个片段，是孤独症血清多肽标志物。本专利技术是通过以下技术方案来实现：一种孤独症血清多肽标志物PF4-A，其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。该多肽标志物PF4-A为血小板因子PF4的一个片段，分子量为7775道尔顿。所述的孤独症血清多肽标志物PF4-A，其血清中的检测参数为6.80～12.52ng/mL。本专利技术还公开了所述的孤独症血清多肽标志物PF4-A作为孤独症血清诊断药物的靶点的应用。本专利技术还公开了所述的孤独症血清多肽标志物PF4-A在制备孤独症血清诊断药物中的应用。所述孤独症血清诊断药物为ELISA检测孤独症血清多肽分子的药物。与上述的孤独症血清多肽标志物PF4-A相结合的分子在制备孤独症血清诊断药物中的应用。PF4蛋白作为孤独症血清诊断药物的靶点的应用。与PF4蛋白相结合的分子在制备孤独症血清诊断药物中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：本专利技术公开了一种孤独症血清多肽标志物PF4-A及其应用，其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。该分子称为PF4-A,为血小板因子4(PF4)的一个片段。其精确分子量为7775道尔顿，在孤独症患儿血清中呈现显著高表达：而在正常对照人群中血清中表达范围为：3.88～7.26ng/mL；在孤独症患儿血清中表达范围为：6.80～12.52ng/mL，且组间具有极显著差异(p<0.001)。鉴于PF4-A在孤独症血清中显著高表达，那么PF4-A就可以作为孤独症血清诊断标志物；且其母本蛋白PF4在孤独症患儿血清中呈现特异性的高表达，因此，PF4可应用于孤独症患儿血清诊断：用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)检测PF4-A或ELISA方法测检测PF4的表达水平，可作为孤独症患儿检测的方法。而针对ELISA检测孤独症血清诊断，PF4就可以作为ELISA检测药物的新的靶点。附图说明图1为同一孤独症患儿血清样本的三次重复的蛋白多肽图谱(1KDa～10KDa)；图2为蛋白多肽峰m/z:7775在孤独症患儿和正常对照组中的蛋白多肽表达差异；图3为PF4-A的MS/MS质谱鉴定图谱；图4为孤独症儿童及正常对照儿童血清中PF4蛋白的表达水平。具体实施方式本专利技术提供的孤独症血清多肽分子，是一种新筛选的孤独症血清诊断标志物，其表达具有特异性，可应用于孤独症诊断。下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。具体的该孤独症血清诊断标志物的筛选为：首先应用液体蛋白芯片技术分离提取孤独症患儿和正常对照儿童血清蛋白多肽，应用MALDI-TOF-MS捕获孤独症患儿和正常对照人群蛋白多肽图谱，并且采用ClinProTools2.1软件对比分析孤独症患儿和正常人群血清蛋白多肽谱图差异，找出组间显著差异表达的蛋白多肽分值，在孤独症患儿血清中显著高表达的蛋白多肽峰值中筛出孤独症血清肿瘤标志物。对于所筛选的孤独症血清诊断标志物的验证为：应用HPLC将孤独症患儿血清分离的蛋白多肽混合物分为20～30个组分，在对其进行二级质谱的鉴定，并且对鉴定出的蛋白多肽采用酶联免疫法进行血清回归分析，结果血清回归验证证明其在孤独症患儿血清中显著高表达，具有特异性，可以作为孤独症患儿血清筛查的生物标志物。1、样本的采集与处理：采集自西安交通大学附属儿童医院(2013年1月至2015年12月)的150例(男性130例；女性20例；平均年龄3.5岁)临床确诊的孤独症患儿和150例正常健康对照儿童(男性130例；女性20例；平均年龄3.5岁)。样本考虑年龄、性别、采集时间、储存条件是否一致、有无基础疾病等因素。被采集者晨起空腹采血，用真空采血管(黄帽、有隔离胶)采集全血5mL，室温静置30min；室温离心5min(3000g)，将上层血清分装成100μL/管，立即保存于-80℃，避免反复冻融。1.1、试剂与仪器血清蛋白的提取采用德国布鲁克公司的磁珠试剂盒“弱阳离子型”(MB-WCX)，以及光谱纯(HPLC级)乙腈、三氟乙酸(德国Merck公司)、α-氰基-4-羟基肉桂酸(HCCA)(美国Sigma公司)。磁珠分离器、600/384AnchorChip靶板和AutoFlexIII基质辅助激光解析电离飞行时间质谱MALDI-TOF-MS(德国BrukerDaltonics公司)。2、血清蛋白样本的制备运用弱阳离子(MB-WCX)磁珠捕获血清蛋白多肽，具体操作步骤如下：①用混匀器完全混匀磁珠悬浮液1min；②加10μLMB-WCX结合液以及10μLMB-WCX磁珠至PCR管，混匀后加5μL血清，混匀至少5次，静置5min；③将PCR管放入磁柱分离器，使磁珠贴壁1min，液体清澈后弃上清液；④加100μLMB-WCX冲洗液，在磁柱分离器上前后移动10次PCR管，磁珠贴壁后弃上清液，重复步骤③、④两次；⑤加5μLMB-WCX洗脱液洗涤贴壁的磁珠，并反复吹打10次，磁珠贴壁2min，将上清液移入干净的离心管；⑥加5μLMB-WCX稳定液至离心管并混匀，提取的蛋白多肽可以用于直接MALDI-TOF-MS检测或者冻存于-20℃冰箱24h之内质谱分析。2.1质谱分析将分离收集得到的蛋白样本1μL与10μL的基质α-氰基-4-羟基肉桂酸混匀，取1μL点在Anchorchip靶板上(德国Bruker公司)，每个样本分别点三个靶点以作三次重复。待室温干燥后将靶板放入质谱仪进行分析，采用FlexControl2.0软件进行标准品校正后本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种孤独症血清多肽标志物PF4‑A，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种孤独症血清多肽标志物PF4-A，其特征在于，其氨基酸序列如
SEQ.ID.NO.1所示。
2.如权利要求1所述的孤独症血清多肽标志物PF4-A，其特征在于，该
多肽标志物PF4-A为血小板因子PF4的一个片段，分子量为7775道尔顿。
3.如权利要求1所述的孤独症血清多肽标志物PF4-A，其特征在于，其
血清中的检测参数为6.80～12.52ng/mL。
4.权利要求1所述的孤独症血清多肽标志物PF4-A作为孤独症血清诊
断药物...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄辰，杨娟，宋土生，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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