氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗、制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗、制备方法和应用，该氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗包括西妥昔单抗和氧化石墨烯，西妥昔单抗和氧化石墨烯通过非共价键连接，氧化石墨烯为二维纳米氧化石墨烯，且粒径小于0.22μm。上述氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗，西妥昔单抗和氧化石墨烯通过非共价键连接，形成复合抗体，可大幅度的增强生物学反应。相比西妥昔单抗在体外只有轻微抑制作用，上述氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗可直接抑制或杀伤胶质瘤细胞。同时采用粒径小于0.22μm的二维纳米氧化石墨烯，可使得氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗性质稳定，同时降低对外周血管的刺激。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗体领域，特别地，涉及一种氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗。此外，本专利技术还涉及一种包括上述氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗的制备方法及应用。
技术介绍
靶向治疗是指作用于专门分子从而阻止肿瘤生长、增殖、扩散的药物或者小分子物质，也被称为分子靶向治疗，分子靶向药物和精准医学。靶向治疗与化疗不同：(1)靶向治疗只专门作用于肿瘤相关的分子，而化疗抑制细胞代谢，影响细胞周期，作用于所有快速分裂的细胞既包括肿瘤，也包括正常细胞，换而言之，化疗的特异性相对较差；(2)靶向治疗是瞄准靶细胞或者靶点精心设计和选择的，而化疗的选择仅仅是因为可以抑制或杀伤肿瘤细胞；(3)靶向治疗是抑制细胞的增殖分化，与细胞周期无关，而化疗药物是利用细胞周期的敏感阶段引起细胞中毒而杀伤细胞。西妥昔单抗是一种已经使用12年的EGFR抗体的靶向治疗药物，疗效肯定但是微弱。随着化疗对免疫系统的损害，耐药复发，先天性反应低等情况的出现，亟需更加高效的EGFR抗体。
技术实现思路
本专利技术提供了一种氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗，以解决现有的西妥昔单抗疗效弱的技术问题。本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术一方面提供了一种氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗，氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗包括西妥昔单抗和氧化石墨烯，西妥昔单抗和氧化石墨烯通过非共价键连接，氧化石墨烯为二维纳米氧化石墨烯，且粒径小于0.22μm。进一步地，西妥昔单抗和氧化石墨烯的质量比为50～5:1。本专利技术另一方面提供了一种氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗的制备方法，包括以下步骤：将西妥昔单抗、氧化石墨烯加入体积百分数为10～50％的磷酸盐缓冲液中，在4～40℃下震荡摇匀，反应2～24小时得到氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗。进一步地，磷酸盐缓冲液的体积百分数为10％，磷酸盐缓冲液的用量为1mg氧化石墨烯加入0.5～1.5ml所述磷酸盐缓冲液，优选为1ml磷酸盐缓冲液。进一步地，反应温度为37℃。进一步地，反应时间为12～24小时，优选为12小时。进一步地，氧化石墨烯的制备包括以下步骤：将氧化石墨烯原材料在0～4℃的条件下，通过超声波破碎，经过孔径0.22μm的滤网过滤，得到氧化石墨烯。进一步地，超声波破碎的操作包括以下步骤：将氧化石墨烯原材料配置为1～2mg/ml，在超声波的强度为3.5的条件下，超声2小时，超声模式为工作10s，休息5s。本专利技术还提供了一种氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗在制备治疗胶质瘤药物中的应用。本专利技术具有以下有益效果：上述氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗，西妥昔单抗和氧化石墨烯通过非共价键连接，形成复合抗体，可大幅度的增强生物学反应。相比西妥昔单抗在体外只有轻微抑制作用，上述氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗可直接抑制或杀伤胶质瘤细胞。同时采用粒径小于0.22μm的二维纳米氧化石墨烯，可使得氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗性质稳定，同时降低对外周血管的刺激。除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本专利技术还有其它的目的、特征和优点。下面将参照图，对本专利技术作进一步详细的说明。附图说明构成本申请的一部分的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1是氧化石墨烯原料和二维纳米氧化石墨烯的对比图；图2是氧化石墨烯原料和二维纳米氧化石墨烯在10×10×＝100×倍数下的对比图；图3是CTX/GO和PANI/GO的对比图；图4是PBS、GO、CTX、CTX/GO溶液处理的胶质瘤细胞在10×10×＝100×倍数下的观测图；图5是PANI、PANI/GO溶液处理的胶质瘤细胞在10×10×＝100×倍数下的观测图；图6是PBS和CTX/GO溶液处理的胶质瘤细胞在10×40×＝400×倍数下的观测图；图7是各组溶液不同梯度下处理的胶质瘤细胞存活数目吸光值分布图；图8是各组溶液不同梯度下处理的胶质瘤细胞存活数目吸光值柱状图；图9是CTX-FITC处理的不同细胞株的荧光强度图。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的实施例进行详细说明，但是本专利技术可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。本专利技术的优选实施例提供了本专利技术一方面提供了一种氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗(CTX/GO)，氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗包括西妥昔单抗(CTX)和氧化石墨烯(GO)，西妥昔单抗和氧化石墨烯通过非共价键连接。氧化石墨烯含有sp2杂化带羟基和羧基的苯环，不仅性质稳定、生物相容性好，还可以通过π键、疏水作用、氢键和离子键与抗体、药物分子、金属离子、荧光基团或者细胞非共价结合。其次，二维结构的GO的表面比任何其他纳米材料都高出至少4个量级，它的每个原子都暴露在表面，适合于运载药物。GO是其他石墨材料的基本构建块，可以裹成零维的球体，滚成一维的碳纳米管，层叠成三维结构的石墨。石墨烯虽然是公认的纳米材料，但是并不一定适合作为静脉用的药物。因为纳米材料的概念是指，任何三维结构中，只要有一维达到纳米级就可以称为纳米材料。比如未经改良的石墨烯(可购买于Sigma)，虽然厚度符合纳米级，但是直径较大，不符合纳米级要求。申请人认为作为静脉用的药物，必须达到所有维度的纳米级才能减小毒性，最大发挥纳米材料的优势。石墨烯为二维结构，选择或制备厚度及直径均符合纳米级的二维纳米石墨烯作为原料，使得氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗更加适合体外实验和体内试验，尤其是体内试验。氧化石墨烯的粒径小于0.22μm。颗粒较大的氧化石墨烯在生理盐溶液下容易发生聚集，生成沉淀，性质不稳定。采用粒径小于0.22μm的氧化石墨烯可在人血清中稳定均匀分散。粒径小于0.22μm的氧化石墨烯可直接购买或将大颗粒的氧化石墨烯破碎制取，如通过超声波破碎制取。此外，尽管GO可分散于水中，如生理盐水，然而由于盐的电荷屏蔽作用使得GO易发生聚集。良好的药物载体具有优良的表面化学性质，不仅生物相容性好，而且生物变化可控。因此，GO的表面修饰势在必行，目前主要分两种：共价和非共价，前者通常是通过氧化石墨烯的非饱和结构破坏而形成的原子掺杂或反应的技术；后者不改变GO的自然结构，只通过非共价键，范德华力，电荷吸引，结合更加灵活。本申请中的氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗中，西妥昔单抗和氧化石墨烯通过非共价键连接，结合灵活，并且杀伤淋巴瘤细胞的效果强。本专利技术具有以下有益效果：上述氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗，西妥昔单抗和氧化石墨烯通过非共价键连接，形成复合抗体，可大幅度的增强生物学反应。相比西妥昔单抗在体外只有抑制作用，上述氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗可直接抑制或杀伤胶质瘤细胞。同时采用粒径小于0.22μm的二维纳米氧化石墨烯，可使得氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗性质稳定，同时降低对外周血管的刺激。可选地，妥昔单抗和所述氧化石墨烯的质量比为50～5:1。本专利技术另一方面提供了一种氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗的制备方法，包括以下步骤：将西妥昔单抗、氧化石墨烯加入体积百分数为10～50％的磷酸盐缓冲液中，在4～40℃下震荡摇匀，反应2～24小时得到所述氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗。磷酸盐缓冲液(PBS)为本领域常用试剂，其pH值范围为7.35～7.45。体积百分数为10～50％的磷酸盐缓冲液即PBS溶液在原配方的基础上调整水的加入量，将其稀释。西妥昔单抗、氧化石墨烯在振荡摇匀的条件本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗，其特征在于，所述氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗包括西妥昔单抗和氧化石墨烯，所述西妥昔单抗和所述氧化石墨烯通过非共价键连接，所述氧化石墨烯为二维纳米氧化石墨烯，且粒径小于0.22μm。

【技术特征摘要】
1.一种氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗，其特征在于，所述氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗包括西妥昔单抗和氧化石墨烯，所述西妥昔单抗和所述氧化石墨烯通过非共价键连接，所述氧化石墨烯为二维纳米氧化石墨烯，且粒径小于0.22μm。2.根据权利要求1所述的氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗，其特征在于，所述西妥昔单抗和所述氧化石墨烯的质量比为50～5:1。3.一种权利要求1或2所述的氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将西妥昔单抗、氧化石墨烯加入体积百分数为10～50％的磷酸盐缓冲液中，在4～40℃下震荡摇匀，反应2～24小时得到所述氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗。4.根据权利要求3所述的氧化石墨烯修饰的西妥昔单抗的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的体积百分数为10％，所述磷酸盐缓冲液的用量为1mg所述氧化石墨烯加入0.5～1.5ml所述磷酸盐缓冲液，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志雄，罗承科，杨魁，李春涛，曾瑜，陈新建，王锡阳，黄正，龚璇，李臻琰，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：湖南;43