本发明专利技术公开了一株具有高效净化养殖污水的解淀粉芽孢杆菌及其应用，属于微生物技术和养殖水环境改良技术领域。解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)Am11已于2016年2月1日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”(简称CGMCC)，其保藏编号为CGMCC NO.12123。本发明专利技术的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)Am11具有强的胞外蛋白酶活性，该菌株具有明显的净化水体的作用，可广泛应用于水产养殖行业，减少抗生素的使用，从而减轻水体污染，增加养殖户的效益。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物技术和养殖水环境改良
，具体涉及一种高效净化养殖污水的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)Am11及其应用。
技术介绍
近年来，中国的水产养殖朝着高密度、集约化、规模化和名优化的方向发展，形成了高生物负载量和高投入量的养殖模式。在高投入高产出的模式下，养殖密度超过了水体容量，大量的残剩饵料、肥料和生物代谢产物累积，使得水体自净能力下降，水体富养化显著，养殖水体的自身污染日益严重。剩余的饵料、养殖生物的排泄物加上浮游生物的尸体残骸等的积累超过了水体的自净能力，使得有机物不能彻底分解而沉淀在底部，水体中厌氧分解层不断增厚，导致水体富营养化，氨氮、亚硝酸盐等有害物质的积累，从而毒害养殖生物，诱发各类水产疾病，并且水产品的品质也不断下降。原位生物修复是最能表现生物修复方法特点和优点的方法，与传统的环境治理方法有本质的区别。向实行生物恢复的场所引入新的外来微生物，以建立新的微生物群落，改变土著微生物的低生物降解性能，获得对某类污染物质具有高降解性能的新的微生物群落，引入微生物是原位生物恢复技术的核心部分。引入新的具有某些特殊的功能的微生物才是该技术的生命力的所在。通过某种手段培育和训化出一些对某种污染物质具有特殊降解能力的菌种，然后将这些菌种引入到实施生物降解的目标地带，继续发挥其对该类污染物质的特有降解作用。芽孢杆菌(Bacilussp.)能够分泌具有较高活性的蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等消化酶，可以高效降解残饵中蛋白质和淀粉，能够减少氨氮(NH4+-N)、亚硝酸盐氮(NO2-N)、H2S等有害物质，高效降解有机污染物，抑制有害微生物的繁殖，有效的改善养殖生态环境促进水环境良性循环，并且微生态制剂具有成本低、收效大等优点，是目前水环境污染治理的研究热点。并且能在不利的环境中以芽孢的形式存在，具有耐高温、耐酸碱性能，易于储藏及运输，作为饲料微生态添加剂和水体微生态修复改良剂都有广阔前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高效净化养殖污水的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)Am11及其应用。为实现上述目的，本专利技术采用技术方案为：一种高效净化养殖污水的解淀粉芽孢杆菌，菌株为解淀粉芽孢杆菌Am11(BacillusamyloliquefaciensAm11)已于2016年2月1日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNO.12123。一种高效净化养殖污水的解淀粉芽孢杆菌，所述菌株在用于生物修复改善水产养殖环境中的应用。一种解淀粉芽孢杆菌微生物制剂，生物制剂为将所述解淀粉芽孢杆菌Am11经发酵所得发酵物。具体为：将解淀粉芽孢杆菌Am11于营养琼脂培养基中活化培养后以接种环接种再次接种到新鲜营养琼脂培养基中获得固体种子；将上述获得固体种子以3wt％接种量接种至种子培养液中37℃，培养12h,培养后再以1wt％接种至发酵培养基中以37℃、150rpm扩大培养24h；将上述发酵培养后培养液升温至50-60℃，而后加入固体氯化钙和磷酸氢二钠各0.3wt％，搅拌混匀后再加入3wt％硅藻土，板框压滤；将滤饼干燥，干燥的菌体颗粒粉碎后，即得到微生物制剂。一种解淀粉芽孢杆菌微生物制剂的应用，所述制剂作为水体净化制剂，在原位生物修复改善水产养殖环境中的应用。本专利技术所具有的的优点：本专利技术新型解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)Am11具有明显的净化水体的作用，可广泛应用于水产养殖行业，减少抗生素的使用，从而减轻水体污染，增加养殖户的效益，可作为用于原位生物修复能够改善水产养殖环境的解淀粉芽孢杆菌。解淀粉芽孢杆菌Am11对饵料溶解物中蛋白、淀粉和CODMn的降解利用率在48h时趋于稳定，降解率分别为57％，52％，55％；该菌处理养殖污水24h后氨氮和亚硝酸盐含量降低至很低水平，降解率分别达到了95％和97％。改善养殖水质，不但增强水产动物的免疫力和抗病能力，还能减轻养殖污水中有机物污染源的排放，保证优良的养殖水域生态环境从而促进水产养殖行业的健康发展。附图说明图1为本专利技术实施例提供的不同因素对菌株A11产蛋白酶活力的影响图，其中，(a)培养温度对菌株产蛋白酶活力的影响，(b)不同pH值对酶活力的影响，(c)接种量对酶活力的影响，(d)不同NaCl浓度对产酶活力的影响。图2为本专利技术实施例提供的采用本专利技术菌株A11对残饵降解率的效果图。图3为本专利技术实施例提供的采用本专利技术菌株A11对氨盐和亚硝酸盐的降解图。具体实施方式实施例1通过蛋白酶活性对菌株的筛选与鉴定1、筛选(1)从潍坊市潍北六场水产养殖户的污水沟中取泥样50mL，80℃水浴15min，杀灭非芽孢菌；稀释后，将样品涂布于营养琼脂培养基(蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂15～20g，蒸馏水1000mL，pH7.2～7.4)平板，37℃，培养24h；挑选典型芽孢杆菌菌落在营养琼脂培养基平板上划线，37℃，培养24h。(2)产蛋白酶菌株的初筛：挑取少量菌落，接种到种子培养液(蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH7.2～7.4)中，35℃、180r/min恒温培养24h，按照10倍稀释法将增殖菌悬液稀释成不同梯度(取100μL增值菌悬液，加入900μL无菌水，制成10-1的稀释液。取100μL10-1的稀释液，加入900μL无菌水，制成10-2的稀释液。以此类推，按照10倍稀释法适当稀释成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10等不同梯度的稀释液)后，吸取10-8、10-9、10-10的不同梯度的稀释液各0.1ml依次均匀涂布于蛋白酶筛选培养基(酪蛋白10g，酵母粉3g，Na2HPO4·12H2O5g，NaCl5g，溴麝香草酚蓝0.05g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH7.2～7.4)平板上。恒温培养24～48h，测量水解圈的直径(D)和菌落的直径(d)，根据D/d的比值大小来判断菌株产酶的能力，筛选出产蛋白酶稳定并且酶活力高的菌株。(3)产蛋白酶菌株的复筛：将初筛选取的菌株接种到液体培养基(蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH7.2～7.4)中，35℃、180r/min恒温培养24h，取适量发酵液，10000r/min离心15min，上清液为粗酶液，测定粗酶液的蛋白酶活力，结合水解圈与菌落直径的比值(D/d)进行产蛋白酶菌株的复筛，于35℃恒温发酵培养，测定蛋白酶活力达到187U/ml，菌株即为解淀粉芽孢杆菌Am11(BacillusamyloliquefaciensAm11)。解淀粉芽孢杆菌Am11(BacillusamyloliquefaciensAm11)进行保藏，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日：2016年2月1日，保藏号为CGMCCNO.12123，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。2、菌株鉴定(1)菌落形态和菌体形态观察：将制备的菌悬液稀释适当倍数，均匀涂布于营养琼脂平板上，35℃恒温培养48h，观察单菌落形状、大小、颜色、边缘、表面、透明度等。将菌株进行革兰氏染色，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种高效净化养殖污水的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于：菌株为解淀粉芽孢杆菌Am11(Bacillus amyloliquefaciens Am11)已于2016年2月1日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO.12123。
【技术特征摘要】
1.一种高效净化养殖污水的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于：菌株为解淀粉芽孢杆菌Am11(BacillusamyloliquefaciensAm11)已于2016年2月1日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNO.12123。2.一种权利要求1所述的高效净化养殖污水的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于：所述菌株在用于生物修复改善水产养殖环境中的应用。3.一种解淀粉芽孢杆菌微生物制剂，其特征在于：生物制剂为将权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌Am11经发酵所得发酵物。4.按权利要求3所述解淀粉芽孢杆菌微生物制剂，其特征在于：将解淀粉芽孢杆...
【专利技术属性】
技术研发人员：王宝杰，刘清兵，王雷，刘梅，蒋克勇，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37
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