一种心肌干细胞的冻存液及冻存方法技术

本发明专利技术提供了一种心肌干细胞的冻存液，该冻存液由DMEM基础培养基、胎牛血清、维生素E、海藻糖和羟乙基淀粉组成；所述胎牛血清的添加量为DMEM基础培养基重量的0.8‑2.0 %；所述维生素E的浓度为18‑25 μM；所述海藻糖的浓度为0.1‑0.3 M；所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的10‑13 %。本发明专利技术还提供了利用上述冻存液对心肌干细胞进行冻存的方法。本发明专利技术的冻存液没有添加DMSO等有毒的保护剂，对于心肌干细胞的冻存而言有着十分优秀的细胞复苏率，最高可达94.55 %。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞
，具体涉及一种心肌干细胞的冻存液及冻存方法。
技术介绍
心肌梗死是严重威胁人类健康的主要疾病之一，一旦发生将造成心脏机能不可逆的改变，早期出现心肌细胞坏死、溶解，后期出现心脏扩大，梗死心肌组织瘢痕形成，心功能下降，严重影响人们的生活质量。目前现有的治疗方法包括：药物治疗、冠脉介入治疗以及冠脉旁路移植术等，尽管上述疗法能够改善患者的症状，但是不能从根本上解决心肌细胞及血管的再生修复问题。目前，心肌干细胞移植成为心肌再生疗法的新热点，该技术有望给心肌梗死患者带来福音。然而，现有的心肌干细胞的冻存方法的效果却不太理想，未发现专门针对于心肌干细胞的冻存液，所用的冻存液通常含有DMSO等对细胞有毒性的保护剂，不利于心肌干细胞的复苏。这极大的限制了利用心肌干细胞进行心肌梗死等疾病的研究和应用。因此，本领域亟待研发一种针对于心肌干细胞的无毒的冻存液。
技术实现思路
针对现有技术的缺点，本专利技术的目的之一在于提供一种心肌干细胞的冻存液，该冻存液由DMEM基础培养基、胎牛血清、维生素E、海藻糖和羟乙基淀粉组成；所述胎牛血清的添加量为DMEM基础培养基重量的0.8-2.0%；所述维生素E的浓度为18-25μM；所述海藻糖的浓度为0.1-0.3M；所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的10-13%。优选的，所述维生素E的浓度为20-22μM；所述海藻糖的浓度为0.15-0.25M。优选的，所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的11-12%。最优的，所述胎牛血清的添加量为DMEM基础培养基重量的1.5%；所述维生素E的浓度为21μM；所述海藻糖的浓度为0.2M；所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的11.5%。本专利技术的另外一个目的还在于提供利用上述冻存液对心肌干细胞进行冻存的方法，该方法为：将所述冻存液预冷至4℃后，利用预冷后的冻存液将心肌干细胞稀释至浓度为0.1-1.0×106个心肌干细胞，于4℃下预冷10-30min后，在-80℃下冻存24h，转移至液氮罐中保存。优选的，心肌干细胞的浓度为5.0×105个。本专利技术的有益效果：本专利技术的冻存液没有添加DMSO等有毒的保护剂，对于心肌干细胞的冻存而言有着十分优秀的细胞复苏率，最高可达94.55%。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本专利技术进行进一步的说明，不能理解为对本专利技术保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述
技术实现思路
所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。实施例1（1）配制冻存液：向DMEM基础培养基加入不同量的胎牛血清、维生素E、海藻糖和羟乙基淀粉，制备5种冻存液，配方如表1所示。表1胎牛血清加入量（占DMEM重量比%）维生素E浓度(μM）海藻糖浓度（M）羟乙基淀粉加入量（占DMEM重量比%）配方10.8018.000.1010.00配方22.0025.000.3013.00配方31.5020.000.1511.00配方41.5022.000.2512.00配方51.5021.000.2011.50（2）用上述5种配方的冻存液分别稀释经原代培养的心肌干细胞至浓度为0.1×106、0.5×106、和1.0×106个，于4℃下预冷10-30min后，在-80℃下冻存24h，转移至液氮罐中保存。、（3）心肌干细胞的复苏：将冻存细胞从液氮罐中转移至37℃的恒温箱中，溶化后立即放入无菌离心管，加入预冷（4℃）的心肌干细胞培养液。（4）利用台盼蓝染色法对心肌干细胞进行计数。细胞复苏率（%）=活细胞数/总细胞数×100%。利用本专利技术上述配方的冻存液对心肌干细胞进行冻存后的细胞复苏率情况如表2所示：表2配方1配方2配方3配方4配方5对照组1对照组2细胞复苏率（%）89.0190.0091.2491.3094.5552.9840.54注：对照组1为一般冻存液，组分为：胎牛血清10%、DMSO10%和DMEM/F12；对照组2除不添加海藻糖之外，其余与配方5一致。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种心肌干细胞的冻存液，其特征在于，所述冻存液由DMEM基础培养基、胎牛血清、维生素E、海藻糖和羟乙基淀粉组成；所述胎牛血清的添加量为DMEM基础培养基重量的0.8‑2.0 %；所述维生素E的浓度为18‑25 μM；所述海藻糖的浓度为0.1‑0.3 M；所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的10‑13 %。

【技术特征摘要】
1.一种心肌干细胞的冻存液，其特征在于，所述冻存液由DMEM基础培养基、胎牛血清、维生素E、海藻糖和羟乙基淀粉组成；所述胎牛血清的添加量为DMEM基础培养基重量的0.8-2.0%；所述维生素E的浓度为18-25μM；所述海藻糖的浓度为0.1-0.3M；所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的10-13%。2.根据权利要求1所述的冻存液，其特征在于，所述维生素E的浓度为20-22μM；所述海藻糖的浓度为0.15-0.25M。3.根据权利要求1或2所述的冻存液，其特征在于，所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的11-12%。4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：向红先，
申请(专利权)人：成都育芽科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51