用于治疗花生过敏的核酸制造技术

本文提供了用于治疗花生过敏的DNA疫苗。所述疫苗包含与溶酶体相关膜蛋白(LAMP)的腔内结构域框内融合的一个或多个花生过敏原性表位的编码序列和LAMP的靶向序列。所述疫苗可以是多价分子，和/或可以被提供为包含两种或更多种DNA构建物的多价疫苗的一部分。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与相关申请的交叉引用本申请要求2014年6月23日提交的美国申请号62/015,981的利益，所述申请整体通过参考并入本文。
本公开的主题内容涉及分子生物学和医学领域。更具体来说，本公开的主题内容涉及用作DNA疫苗的核酸和使用它们治疗患有花生过敏反应或对花生过敏反应易感的受试者的方法。
技术介绍
当免疫系统对被称为过敏原的无害外来物质做出反应时，发生过敏反应。由于过敏性反应这种潜在致死的系统性休克的高风险，食物过敏是重要的公共健康问题(Sampson等，(1992)N.Engl.J.Med.327:380-384；Bock等，(2001)J.AllergyClin.Immunol.107:191-193)。幼儿具有比公众更高的发生食物过敏的风险(Lack等，(2003)N.Engl.J.Med348:977-985；Zimmerman等，(1989)J.AllergyClin.Immunol.83:764-770；Green等，(2007)Pediatrics120:1304-1310)。在生命的前三年中，6-8％的儿童经历由食物引起的过敏反应(Bock(1987)Allergy45:587-596；Burks和Sampson(1993)Curr.Prob.Pediatr.23:230-252；Jansen等，(1994)J.AllergyClin.Immunol.93；2:446-456；Sampson(1999)J.AllergyClin.Immunol.103；5:717-728)。奶、蛋和花生是三种最常见的食物过敏原(Sampson(1988)J.AllergyClin.Immunol.81:635-645)，并且到5岁为止，80-85％的具有奶或蛋过敏的儿童将长大而不再发生过敏(Host等，(1997)J.AllergyClin.Immunol.99:S490)。相反，只有20％的婴儿发展出对花生的耐受(Skolnick等，(2001)J.AllergyClin.Immunol.107；2:367-374)。由暴露于食物过敏原、特别是花生而引起的过敏性反应，引起以组胺的过量生产为特征的严重免疫反应，并造成每年美国过敏性反应急诊的一半。在美国，这些对花生的极端反应每年引起超过30,000例过敏性反应事件和100–200例死亡。痕量的花生通常存在于数千种各种品牌但未标注的包装食品类别中。超过150万美国人苦于花生过敏的症状，并且症状通常持续终生。许多人在痕量暴露后经历危险的反应。没有用于缓解花生过敏症状的治疗方法；患有花生过敏的个人和诸如小学的机构必须采取严格措施来避免暴露或摄入和潜在致命的过敏性反应发作的风险。花生过敏的诊断要求维持恒定的饮食警觉以避免过敏性反应的风险(Yunginger等，(1988)JAMA260:1450-1452)。在儿童的情况下，这种警觉也必须由父母亲、学校和看护者实行。在过去的十年中，花生过敏的患病率已经加倍，影响2％的成年美国人(Sampson(1999)J.AllergyClin.Immunol.103；5:717-728；Sicherer等，(2003)J.AllergyClin.Immunol.112:1203-1207)。尽管许多其他过敏症如枯草热和短豚草花粉的症状不危及生命，但对于花生过敏的个体来说，摄入少至1/1000的花生可以引起过敏性休克和死亡(Taylor等，(2002)J.AllergyClin.Immunol.109(1):24-30；Wensing等，(2002)J.AllergyClin.Immunol.110(6):915-920)。所有食物诱导的过敏性休克中的三分之二已与花生的意外摄入相关联(Bock等，(2001)J.AllergyClin.Immunol.107:191-193)。在意外摄入引发过敏性反应的情形中，使用肾上腺素注射来打开气道通道(Stark和Sullivan(1986)J.AllergyClin.Immunol.78:76-83；Sampson(2003)Pediatrics111(6):1601-1608)。当个体未能发展出口腔耐受而是相反变得对随后的过敏原暴露敏感时，则发生食物过敏(Till等，(2004)J.AllergyClin.Immunol.113(6):1025-1034)。在过敏患者中，过敏原倾向性地激活2型辅助性CD4+T淋巴细胞(Th2)，所述细胞产生促过敏细胞因子白介素IL-4、IL-5和IL-13，其帮助协调地产生作为大多数过敏症状的基础的炎症(Woodfolk(2007)J.AllergyClin.Immunol.118(2):260-294)。IL-4指导产生抗体的B细胞分泌过敏原特异性免疫球蛋白(Ig)E(DelPrete等，(1988)J.Immunol.140:4193-4198；Swain等，(1990)J.Immunol.145:3796-3806)。与中和性IgG不同，IgE结合于其被肥大细胞和嗜曙红细胞表达的高亲和性受体Fc--εRI(Blank等，(1989)Nature337:187-190；Benhamou等，(1990)J.Immunol.144:3071-3077)，由此使这些细胞敏感。在随后的暴露后，IgE结合引起麻烦的过敏原，交联，并转导信号以指导肥大细胞脱粒并释放出引发过敏反应的挥发性化学物质。免疫疗法，即给药逐渐增加剂量的过敏原以引起耐受，是过敏性疾病的标准治疗，但由于频繁的过敏性反应，尚未被批准用于治疗花生过敏(Nelson等，(1997)J.AllergyClin.Immunol99；6:744-751；Oppenheimer等，(1992)J.AllergyClin.Immunol90:256-262)。此外，免疫疗法的应用受到治疗长度的限制，其需要长达36个月的每周或两周一次的注射，并且成功和依从的程度变化不定(Bousquet等，(1998)J.AllergyClin.Immunol102:558-562；Rank和Li(2007)MayoClin.Proc.82(9):1119-1123；Ciprandi等，(2007)AllergyAsthmaProc.28:40-43)。
技术实现思路
一方面，本文提供了一种分离或纯化的核酸，其按顺序排列包含：编码信号序列的序列；编码细胞器内稳定化/运输结构域的序列；编码花生过敏原结构域的序列，其中所述花生过敏原结构域包含至少一种花生过敏原，所述至少一种花生过敏原不包括所述花生过敏原的天然存在的信号序列；编码跨膜结构域的序列；和编码内吞体/溶酶体靶向结构域的序列。在某些实施方式中，所述至少一种花生过敏原是AraH1，AraH2，AraH3，AraH3del，AraH1、AraH2或AraH3的具有至少一个花生过敏表位的部分，或其任何组合。另一方面提供了一种药物组合物，其包含一种或多种分离或纯化的核酸，所述核酸按顺序排列包含：编码信号序列的序列；编码细胞器内稳定化/运输结构域的序列；编码花生过敏原结构域的序列，其中所述花生过敏原结构域包含至少一种花生过敏原，所述至少一种花生过敏原不包括所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的或纯化的核酸分子，其按顺序排列包含：编码信号序列的核酸序列；编码细胞器内稳定化/运输结构域的核酸序列；编码花生过敏原结构域的核酸序列，其中所述花生过敏原结构域包括至少一种花生过敏原，所述至少一种花生过敏原不包括所述花生过敏原的本源信号序列；编码跨膜结构域的核酸序列；和编码内吞体/溶酶体靶向结构域的核酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.23 US 62/015,9811.一种分离的或纯化的核酸分子，其按顺序排列包含：编码信号序列的核酸序列；编码细胞器内稳定化/运输结构域的核酸序列；编码花生过敏原结构域的核酸序列，其中所述花生过敏原结构域包括至少一种花生过敏原，所述至少一种花生过敏原不包括所述花生过敏原的本源信号序列；编码跨膜结构域的核酸序列；和编码内吞体/溶酶体靶向结构域的核酸序列。2.权利要求1的核酸分子，其中所述信号序列包含溶酶体膜相关蛋白(LAMP)的信号序列。3.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述LAMP是LAMP-1、LAMP2、LAMP-3(DC-LAMP)、LIMPII或ENDOLYN。4.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述信号序列包含SEQIDNO：1的第1至27位氨基酸。5.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述细胞器内稳定化/运输结构域包含溶酶体相关膜蛋白(LAMP)。6.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述细胞器内稳定化/运输结构域包含LAMP的腔内结构域。7.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述细胞器内稳定化/运输结构域包含LAMP1、LAMP2、LAMP-3(DC-LAMP)、LIMPII或ENDOLYN的腔内结构域。8.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述细胞器内稳定化/运输结构域包含SEQIDNO：1的第28至380位氨基酸。9.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述编码花生过敏原结构域的核酸序列包含编码两个或更多个花生过敏原性表位的核酸序列。10.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述编码花生过敏原结构域的核酸序列包含编码两种或更多种花生过敏原的核酸序列。11.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述编码花生过敏原结构域的核酸序列包含编码三种花生过敏原的核酸序列。12.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述至少一种花生过敏原包含AraH1、AraH2、AraH3、AraH3del或其组合。13.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述至少一个花生过敏原结构域包含SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、SEQIDNO：4和/或SEQIDNO：5的氨基酸序列。14.权利要求9至13任一项的核酸分子，其中所述花生过敏原性表位或花生过敏原被连接序列分隔开。15.权利要求14的核酸分子，其中所述连接序列包含氨基酸序列GGGG或GGGGS。16.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述跨膜结构域包含LAMP的跨膜结构域。17.权利要求16的核酸分子，其中所述LAMP是LAMP-1、LAMP2、LAMP-3(DC-LAMP)、LIMPII或ENDOLYN。18.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述跨膜结构域包含SEQIDNO：1的第1637至1660位氨基酸。19.前述权利要求任一项的核酸分子，其中所述内吞体/溶酶体靶向结构域包含信号。20.权利要求19的核酸分子，其中所述信号包含氨基酸序列YQTI、YQRI、YEQF或YHTL。21.权利要求1的核酸分子，其包含编码SEQIDNO：1、SEQIDNO：6、SEQIDNO：7或SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：威廉·赫尔，特瑞·海兰，
申请(专利权)人：免疫治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US