特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法技术

本发明专利技术公开了一种特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法，包括以下步骤：以Fmoc‑D‑Ala‑Wang Resin氨基树脂为起始树脂载体，依次与活化的保护氨基酸溶液反应，得到戈那瑞林前体肽Ⅰ‑氨基树脂；对戈那瑞林前体肽Ⅰ‑氨基树脂脱掉D‑Nal保护基，进行N端的乙酰化反应，得到戈那瑞林中间体肽Ⅱ‑氨基树脂；对戈那瑞林中间体肽Ⅱ‑氨基树脂进行进行切割反应，沉降得到戈那瑞林粗肽Ⅲ；将戈那瑞林粗品Ⅲ溶解并过滤，采用反相高效液相色谱法制备纯化，收集目标样品并冻干得到戈那瑞林多肽。本发明专利技术操作简单，反应过程取样方便，易于中控，并且合成周期短，生产成本低，副产物少，产品收率高，利于快速地大规模生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于多肽药物制备方法
，特别涉及一种特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法。
技术介绍
中文名称：醋酸戈那瑞林，英文名称：cetrorelixAcetate，结构式：Ac-D-2-Nal-D-Cpa-D-3-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2，分子式：C70H92N17O14Cl，分子量：1431.06醋酸戈那瑞林是一种有效的黄体酮释放激素抑制素受体拮抗剂，用于控制卵巢的刺激作用，来预防不成熟卵泡的过早排出，帮助受孕。由于醋酸戈那瑞林的自身物理性质易被胃肠道中的酵素分解破坏，不能通过口服使用，因此常作注射用戈那瑞林制剂，通过皮下或肌肉注射吸收，迅速发挥作用。醋酸戈那瑞林对卵巢癌、前列腺癌、子宫纤维瘤、子宫内膜异位等疾病有较好的疗效，而且对良性前列腺肥大和卵巢过度刺激综合征有预防和改善作用。目前市场上的戈那瑞林制备方法，多采用了液相合成法，这些方法中都用到了毒性较大的如吡啶、氨水等试剂，若用于戈那瑞林的大量制备，定会长期接触此类试剂，对人身体伤害较大；在专利CN105646671A中公开了一种戈那瑞林的纯化方法，该专利的纯化过程较复杂，须对样品进行多次纯化，且需要对目标产物进行减压旋蒸浓缩，工序较多，各个反应中的取样不便，不利于快速大规模的生产。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种纯化率高、副产物少且工序操作简单的特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法，具体通过以下技术方案实现：特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法，包括以下步骤：步骤一：以Fmoc-D-Ala-WangResin氨基树脂为起始树脂载体，依次与活化的保护氨基酸溶液于恒温震荡器中反应，通过固相合成法的缩合反应接入相对应的保护氨基酸，得到戈那瑞林前体肽Ⅰ-氨基树脂：Fmoc-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-氨基树脂；步骤二：对戈那瑞林前体肽Ⅰ-氨基树脂脱掉D-Nal保护基，进行N端的乙酰化反应，得到戈那瑞林中间体肽Ⅱ-氨基树脂：Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-氨基树脂；步骤三：对戈那瑞林中间体肽Ⅱ-氨基树脂进行脱保护并洗涤，进行切割反应，沉降后，得到戈那瑞林粗肽Ⅲ：Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2步骤四：将戈那瑞林粗品Ⅲ溶解并过滤，采用反相高效液相色谱法制备纯化，收集目标样品并冻干得到戈那瑞林多肽；将戈那瑞林多肽用醋酸溶解，室温下加入到强阴离子交换树脂中搅拌吸附，取出吸附液补加醋酸，冻干后得醋酸戈那瑞。所述步骤一中的缩合反应时间为20-30min，缩合反应后加入0.5mlDIEA，再利用微波进行戈那瑞林粗品Ⅰ-氨基树脂的合成反应，微波合成反应时间为20-30s。将保护氨基酸依次和HOBT放入离心管中，并加入20％Pip或DMF试剂，得到混合试液；向混合试液溶液中滴加DIEA，混合均匀后即得到所述的活化的保护氨基酸溶液；其中，HBTU为缩合剂，DIEA为活化试剂，20％Pip或DMF溶液为脱保护试剂，进行与氨基树脂的连续缩合反应。所述的Fmoc-D-Ala-WangResin氨基树脂的取代度为0.3mmol/g。反相高效液相色谱法制备纯化的条件为：5umC18制备柱，流动相为A：0.1％乙酸/水，B：0.1％乙酸/乙腈，流速9ml/min，检测波长214nm，洗脱梯度为B.Cone/％：2-55，时间梯度为0.01-30min。步骤二中的乙酰化反应的试剂是以体积比为醋酐：DIEA：DMF＝1:1:4配置的混合溶液，反应液体积为反应器容积的1/3-1/2。切割反应的切割试剂为TFA、茴香硫醚、EDT和水的混合液，反应温度为20℃，切割反应的用量为1g树脂8ml切割试剂，树脂切割两次，对反应后含有戈那瑞林粗肽Ⅲ的溶液用-20℃低温预冷的无水乙醚进行离心沉降。对步骤一中的Fmoc-D-Ala-WangResin氨基树脂以及步骤三中戈那瑞林中间体肽Ⅱ-氨基树脂均进行脱保护并洗涤。脱保护并洗涤步骤如下：用真空泵将反应器中的脱保护溶液抽干，然后加入1/3-1/2反应器体积的DMF溶液，置于30r/min的脱色摇床上摇1min，抽干反应器中溶液再加入DMF洗涤，重复操作3次。固相合成法依次缩合的保护氨基酸为：Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Cit-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-Ala(3-pyridyl)-OH、Fmoc-D-Phe(4-Cl)-OH、Fmoc-D-2-Nal-OH。本专利技术的有益技术效果：本专利技术利用Fmoc固相合成原理，开发了固相高效合成技术，采用常见易得、低成本的原料试剂来合成制备，通过工艺优化以及微波反应技术处理，在工序操作简单化的同时，戈那瑞林粗品收率高达92％，其纯品得率达到40％，大大提高了戈那瑞林的得率；本专利技术还采用强阴离子交换树脂-醋酸转盐技术处理戈那瑞林纯品，大大降低了纯品中三氟醋酸的含量，彻底清除了三氟醋酸对生物体的毒性，避免了因长期接触此类试剂对人身体造成的伤害。本专利技术操作简单，反应过程取样方便，易于中控，并且合成周期短，生产成本低，副产物少，产品收率高，利于快速地大规模生产。具体实施方式为了便于本领域技术人员理解，下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例1：一种特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法，操作步骤如下：(1)：氨基树脂的溶胀称量取代度为0.3mmol/g的Fmoc-D-Ala-WangResin氨基树脂0.2g，从开口端加入至多肽合成反应器中，取DCM试剂加入至反应器中，使树脂完全浸没在DCM溶剂中，与溶剂充分接触，溶胀2h；用真空泵将反应器中的脱保护溶液抽干，然后加入1/3反应器体积的DMF溶液，置于30r/min的脱色摇床上摇1min，抽干反应器中溶液再加入DMF洗涤，重复操作3次，使用茚三酮显色检测，合格后得到目标氨基树脂；(2)：保护氨基酸的制备依次将保护氨基酸和HOBT放入离心管中，并加入DMF试剂，得到混合试液；向混合试液溶液中滴加DIEA，混合均匀后即得到所述的活化的保护氨基酸溶液；保护氨基酸从树脂端起算第1-9个氨基酸相对应的保护氨基酸及分子量如下表所示：以Fmoc-Pro-D-Ala-氨基树脂为例，按照料量称取30mgFmoc-Pro-OH和40mgHBTU于离心管中，加入2mlDMF将其溶解，再取10ulDIEA加入离心管中，混合均匀得到活化的保护氨基酸溶液；(3)：戈那瑞林树脂I的合成将上述活化的保护氨基酸溶液加到抽干的反应器中，保护氨基酸的投料量为所投氨基树脂摩尔数的1.5倍，再将反应器置于25℃的恒温震荡器中反应25min，微波合成20s。采用上述同样方法，依次缩合第2-9个Fmoc-保护氨基酸，即得到戈那瑞林前体肽Ⅰ-氨基树脂：Fmoc-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-氨基树脂。(本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：以Fmoc‑D‑Ala‑Wang Resin氨基树脂为起始树脂载体，依次与活化的保护氨基酸溶液于恒温震荡器中反应，通过固相合成法的缩合反应接入相对应的保护氨基酸，得到戈那瑞林前体肽Ⅰ‑氨基树脂：步骤二：对戈那瑞林前体肽Ⅰ‑氨基树脂脱掉D‑Nal保护基，进行N端的乙酰化反应，得到戈那瑞林中间体肽Ⅱ‑氨基树脂：步骤三：对戈那瑞林中间体肽Ⅱ‑氨基树脂进行脱保护并洗涤，进行切割反应，沉降后，得到戈那瑞林粗肽Ⅲ：步骤四：将戈那瑞林粗品Ⅲ溶解并过滤，采用反相高效液相色谱法制备纯化，收集目标样品并冻干得到戈那瑞林多肽；将戈那瑞林多肽用醋酸溶解，室温下加入到强阴离子交换树脂中搅拌吸附，取出吸附液补加醋酸，冻干后得醋酸戈那瑞林。

【技术特征摘要】
1.特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：以Fmoc-D-Ala-WangResin氨基树脂为起始树脂载体，依次与活化的保护氨基酸溶液于恒温震荡器中反应，通过固相合成法的缩合反应接入相对应的保护氨基酸，得到戈那瑞林前体肽Ⅰ-氨基树脂：步骤二：对戈那瑞林前体肽Ⅰ-氨基树脂脱掉D-Nal保护基，进行N端的乙酰化反应，得到戈那瑞林中间体肽Ⅱ-氨基树脂：步骤三：对戈那瑞林中间体肽Ⅱ-氨基树脂进行脱保护并洗涤，进行切割反应，沉降后，得到戈那瑞林粗肽Ⅲ：步骤四：将戈那瑞林粗品Ⅲ溶解并过滤，采用反相高效液相色谱法制备纯化，收集目标样品并冻干得到戈那瑞林多肽；将戈那瑞林多肽用醋酸溶解，室温下加入到强阴离子交换树脂中搅拌吸附，取出吸附液补加醋酸，冻干后得醋酸戈那瑞林。2.根据权利要求1中所述的特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法，其特征在于：所述步骤一中的缩合反应时间为20-30min，缩合反应后加入0.5mlDIEA，再利用微波进行戈那瑞林粗品Ⅰ-氨基树脂的合成反应，微波合成反应时间为20-30s。3.根据权利要求1或2中所述的特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法，其特征在于：将保护氨基酸依次和HOBT放入离心管中，并加入20％Pip或DMF试剂，得到混合试液；向混合试液溶液中滴加DIEA，混合均匀后即得到所述的活化的保护氨基酸溶液；其中，HBTU为缩合剂，DIEA为活化试剂，20％Pip或DMF溶液为脱保护试剂，进行与氨基树脂的连续缩合反应。4.根据权利要求1所述的特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法，其特征在于：所述的Fmoc-D-Ala-WangResin氨基树脂的取代度为0.3mmol/g。5.根据权利要求1所述的特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法，其特征在于：反相高效液相色谱法制备纯化的条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙良玉，陈为光，张旭光，
申请(专利权)人：合肥国肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34