一种ABCG2单克隆抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种ABCG2单克隆抗体及其用途，具体地，本发明专利技术涉及兼具抗肿瘤及逆转肿瘤抗药性作用的ABCG2单克隆抗体及其在作为新型抗肿瘤药物中的用途。本发明专利技术还涉及一种新的抗原序列，其用于诱导产生针对ABCG2的单克隆或者多克隆抗体的产生。另外，本发明专利技术涉及产生兼具抗肿瘤及逆转肿瘤抗药性作用的ABCG2单克隆抗体的杂交瘤。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学和肿瘤学领域，具体涉及一种ABCG2单克隆抗体及其用途，进一步地，本专利技术涉及兼具抗肿瘤及逆转肿瘤抗药性作用的ABCG2单克隆抗体及其在作为新型抗肿瘤药物中的用途。本专利技术还涉及一种新的抗原序列，其用于诱导产生针对ABCG2的单克隆或者多克隆抗体的产生。另外，本专利技术涉及产生兼具抗肿瘤及逆转肿瘤抗药性作用的ABCG2单克隆抗体的杂交瘤。现有技术多药耐药性(multidrugresistance,MDR)是指对一种药物具有耐药性的同时，对其他结构不同，作用靶点不同的抗肿瘤药物也具有耐药性。其产生可以存在于化疗之前(即固有性耐药)，也可以在化疗之中产生(即获得性耐药)。迄今，对于耐药的发生机制的了解仍然十分有限，通过细胞膜上的ATP-结合域(ATP-bindingcassette,ABC)转运超家族增加抗癌药物从肿瘤细胞的流出率是最主要的机制之一。ABC家族是一组跨膜蛋白,具有ATP结合区域的单向底物转运泵,以主动转运方式完成多种分子的跨膜转运。其中的三个家族成员ABCB1/p-gp(p-glycoprotein，P-gp)、ABCC1/MRP1(MultidrugResistance-associatedProtein1，MRP)和ABCG2/BCRP(breastcancerresistanceprotein,BCRP)在肿瘤发生耐药时高表达(图1-1),这些跨膜蛋白通过降低抗肿瘤药物在细胞内的浓度，或在细胞内重新分布抗肿瘤药物，导致肿瘤细胞的耐药产生。ABCG2/BCRP/MXRABCG2属于ABC转运体蛋白家族中的G亚家族,有655个氨基酸残基，分子量为72kD,定位于细胞膜上,在1-400位残基有一个ABC家族特征性的亲水性的基序,具有独特的结构特征：①由1个ATP结合域和6个α螺旋跨膜结构的疏水性的羧基端跨膜区组成,属于半转运蛋白[McDevittCA,CollinsRF,ConwayM,etal.Purificationand3DstructuralanalysisofoligomerichumanmultidrugtransporterABCG2.Structure,2006,14(11):1623-1632]；②虽属半转运子，却定位于细胞膜；③ABCG2的ATP结合结构域位于N端，而跨膜结构域位于C端，在结构上与其他亚族的转运蛋白如P-gp、MRP1也存在明显差异(图1-2)；④一个功能性的ABCG2转运蛋白需要两个或者两个以上的核苷酸结合结构域和跨膜结构域才能形成一个底物转移通道[chefferGL,MaliepaardM,PijnenborgAC,etal.Breastcancerresistanceproteinislocalizedattheplasmamembraneinmitoxantrone-andtopotecan-resistantcelllines.CancerRes,2000,60(10):2589-2593]。因此，ABCG2作为半转运蛋白很有可能是形成同源二聚体或低聚物而发挥功能。由于ABCG2结构的特异性，决定其所介导的耐药与p-gp和MRP1不同。由ABCG2介导的肿瘤耐药，属于固有性耐药。研究人员从干细胞和肿瘤细胞系中分别分离出表达ABCG2的细胞组分,具有干细胞样的表型，对抗肿瘤药物米托蒽醌、多柔比星、红比霉素和拓扑替康具有耐药性[KennethKWandFuLW.Multidrugresistancetransporters-rolesinmaintainingcancerstem-likecells.StemCellsinClinicandResearch.Chapter30,720-746,editedbyAliGholamrezanezhad,ISBN978-953-307-797-0,Published:August23,2011underCCBY-NC-SA3.0license；TanB，Piwnica-WormsD,andRatnerL,Multidrugresistancetransportersandmodulation.CurrOpinOncol,2000；12,450-8.],ABCG2在非分化的人的胚胎干细胞(embryonicstemcell,ESC)及肿瘤干细胞(Cancerstemcell,CSC)中呈高表达[KennethKWandFuLW.Multidrugresistancetransporters-rolesinmaintainingcancerstem-likecells.StemCellsinClinicandResearch.Chapter30,720-746,editedbyAliGholamrezanezhad,ISBN978-953-307-797-0,Published:August23,2011underCCBY-NC-SA3.0license；ApatiA,OrbanTI,VargaN,NemethA,SchambergerA,KrizsikV,Erdelyi-BelleB,HomolyaL,VaradyG,PadanyiR,KarasziE,KemnaE,NemetK,SarkadiB.HighlevelfunctionalexpressionoftheABCG2multidrugtransporterinundifferentiatedhumanembryonicstemcells.BiochimBiophyActa,2008,1778(12),2700-2709]，表明其对ESC和CSC具有保护作用。因此，ABCG2介导CSC产生的固有耐药，可作为CSC的靶点。ABCG2在人体中具有重要生理功能，表现为通过表达在血脑屏障和胎盘屏障的毛细血管内皮，阻断药物和毒素的通透；表达在小肠粘膜细胞极性表面和结肠上皮细胞与限制吸收相关；表达在肝脏和肾脏组织与药物和毒素的清除相关。ABCG2作为乳腺癌、结肠癌、小细胞肺癌、卵巢癌、胃癌和肠癌、及恶性黑色素瘤的多药耐药调节蛋白[KathawalaRJ,GuptaP,AshbyCRJr,ChenZS.ThemodulationofABCtransporter-mediatedmultidrugresistanceincancer:Areviewofthepastdecade.DrugResistUpdat.2015Jan；18C:1-17.doi:10.1016/j.drup；ShuklaS,OhnumaS,AmbudkarSV.ImprovingcancerchemotherapywithmodulatorsofABCdrugtransporters.CurrDrugTargets.2011,12(5),621-30]，其底物包括有机阴离子偶联物、核苷类似物、有机染料、酪氨酸激酶抑制剂、蒽环类化合物(anthracyclines)、喜树碱-衍生的拓扑异构酶I抑制剂、氨甲蝶呤和黄酮类抗肿瘤药等[ShuklaS,OhnumaS,AmbudkarSV.Improvingcancerchemotherapywithmod本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ABCG2单克隆抗体，其兼具抗肿瘤及逆转肿瘤抗药性作用。

【技术特征摘要】
1.一种ABCG2单克隆抗体，其兼具抗肿瘤及逆转肿瘤抗药性作用。2.权利要求1的单克隆抗体，其保藏日为2016年6月16日、保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC12653的杂交瘤产生的。3.权利要求1或2的单克隆抗体，其具有SEQIDNO：2所示的重链可变区序列，SEQIDNO：3所示的轻链可变区序列。4.权利要求1或2的单克隆抗体，其与抗癌药物偶联，所述的抗癌药物选自顺铂、阿霉素、米托蒽醌、5氟尿嘧啶、替莫唑胺和夫拉平度中的一种或多种。5.一种工程化的抗体，其包含前述SEQIDNO：2所示的重链可变区序列，SEQIDNO：3所示的轻链可变区序列。6.权利要求6的工程化的抗体，其是人源化的。7.权利要求6的工程化的抗体，其进一步工程化有其他癌症治疗药物。8.一种组合物，其包含权利要求1-4中任一项的单克隆抗体，或者含有权利要求5-7中任一项的工程化的抗体，任选地，所述组合物还包含药学允许的辅料。9.一种抗原序列，其由SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：甄红英，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11