蜜环菌提取物在治疗动物糖尿病中的应用制造技术

本发明专利技术公开了蜜环菌提取物在治疗动物糖尿病中的应用。本发明专利技术公开的蜜环菌提取物为蜜环菌水洗脱物、蜜环菌水提物和蜜环菌NaCl洗脱物；用水提取蜜环菌子实体，收集提取液，得到蜜环菌水提物；利用木瓜蛋白酶和纤维素酶处理蜜环菌水提物，然后进行DEAE‑纤维素离子交换柱层析，先用水洗脱，收集洗脱液，得到蜜环菌水洗脱物，再用NaCl水溶液洗脱，收集洗脱液，得到蜜环菌NaCl洗脱物。实验证明，本发明专利技术的蜜环菌提取物可以治疗糖尿病：施用了蜜环菌水洗脱物的动物血糖水平显著低于未施用蜜环菌水洗脱物的动物，施用了蜜环菌醇提物与蜜环菌NaCl洗脱物的动物的血糖水平也出现下降的趋势，表明，可用本发明专利技术的蜜环菌提取物治疗糖尿病。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
中，蜜环菌提取物在治疗动物糖尿病中的应用。
技术介绍
糖尿病是一种严重危害人类健康的多发病，根据病因的不同，糖尿病可分为1型糖尿病(胰岛素依赖型)、2型糖尿病(非胰岛素依赖型)和妊娠糖尿病。随着社会的发展和人们生活水平的提高，糖尿病的发病率呈现逐年上升趋势，尤其是2型糖尿病。目前治疗糖尿病的药物，如胰岛素、罗格列酮、阿卡波糖等，均具有不同程度的副作用，并且长期注射这些药物给患者带来巨大的痛苦，因此研发一种口服降血糖药物或者保健品迫在眉睫。蜜环菌(ArmillariamelleaP.Kumm)又名榛蘑，属于担子菌门，担子菌纲，伞菌目，白蘑科，是一种在夏、秋季发生，能兼性寄生于多种木本和草本植物的食用菌。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何治疗糖尿病。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了蜜环菌提取物在制备治疗动物糖尿病产品中的应用。本专利技术所提供的蜜环菌提取物在制备治疗动物糖尿病产品中的应用中，所述蜜环菌提取物为蜜环菌水洗脱物、蜜环菌水提物、蜜环菌NaCl洗脱物或蜜环菌酶解产物；所述蜜环菌水提物按照包括如下D1)的方法制备：D1)用水提取蜜环菌，收集提取液，得到所述蜜环菌水提物；所述蜜环菌酶解产物按照包括如下D2)的方法制备：D2)利用木瓜蛋白酶和纤维素酶处理所述蜜环菌水提物，得到所述蜜环菌酶解产物；所述蜜环菌水洗脱物按照包括如下D3)的方法制备：D3)将所述蜜环菌酶解产物进行DEAE-纤维素离子交换柱层析得到所述蜜环菌水洗脱物；所述DEAE-纤维素离子交换柱层析包括：用水洗脱，收集洗脱液，得到所述蜜环菌水洗脱物；所述蜜环菌NaCl洗脱物按照包括如下D4)的方法制备：D4)将所述蜜环菌酶解产物进行DEAE-纤维素离子交换柱层析得到所述蜜环菌NaCl洗脱物；所述DEAE-纤维素离子交换柱层析包括：用水洗脱，然后用NaCl水溶液洗脱，收集洗脱液，除去所述洗脱液中的盐得到所述蜜环菌NaCl洗脱物。上述应用中，所述用水提取蜜环菌可在70-100℃下进行。所述用水提取蜜环菌的提取时间可根据具体情况确定，具体可为2-8小时，如4小时。为充分提取所述蜜环菌，可先用水浸泡所述蜜环菌。所述浸泡的时间可根据具体情况确定，具体可为6-18小时，如12小时。上述应用中，所述D1)可包括：D11)用水提取所述蜜环菌，收集提取液，得到蜜环菌水提物1；D12)利用乙醇水溶液提取所述蜜环菌水提物1，得到所述蜜环菌水提物。上述应用中，步骤D12)具体可包括：向所述蜜环菌水提取物1中加入所述乙醇水溶液进行提取，得到乙醇提取液；将所述乙醇提取液进行离心，收集沉淀，得到所述蜜环菌水提物。上述应用中，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比可为95％。所述D1)中所述乙醇水溶液与所述蜜环菌水提物1的体积比可为4:1。上述应用中，所述木瓜蛋白酶、所述纤维素酶和所述蜜环菌水提物的配比可为0.4U:0.12U:100mg。其中，所述蜜环菌水提物的量可为将所述蜜环菌水提物干燥后的质量。所述干燥可通过浓缩冻干进行。上述应用中，所述NaCl水溶液中NaCl的浓度可为0.4M。上述应用中，所述蜜环菌可为蜜环菌子实体。为充分得到所述蜜环菌提取物，也可先将所述蜜环菌粉碎，然后按照上述方法提取所述蜜环菌。上述应用中，所述木瓜蛋白酶和所述纤维素酶处理所述蜜环菌水提物的温度可为45℃。所述木瓜蛋白酶和所述纤维素酶处理所述蜜环菌水提物的时间可为2小时。上述应用中，步骤D4)中，除去所述洗脱液中的盐可通过透析进行。所述透析所用透析袋可为3500Da透析袋。所述透析所用透析液可为蒸馏水。上述应用中，所述蜜环菌水洗脱物、所述蜜环菌水提物、所述蜜环菌NaCl洗脱物或所述蜜环菌酶解产物均可为液体、半固体或干燥后得到的固体。所述干燥可通过浓缩冻干进行。为解决上述技术问题，本发面还提供了所述蜜环菌提取物在治疗动物糖尿病中的应用。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了所述蜜环菌提取物的制备方法。本专利技术所提供的所述蜜环菌提取物的制备方法为下述M1)-M4)中的任一种：M1)所述蜜环菌提取物为所述蜜环菌水提物，所述蜜环菌水提物的制备方法所述D1)；M2)所述蜜环菌提取物为所述蜜环菌酶解产物，所述蜜环菌酶解产物的制备方法包括所述D2)；M3)所述蜜环菌提取物为所述蜜环菌水洗脱物，所述蜜环菌水洗脱物的制备方法包括所述D3)；M4)所述蜜环菌提取物为所述蜜环菌NaCl洗脱物，所述蜜环菌NaCl洗脱物的制备方法包括所述D4)。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了由所述蜜环菌提取物的制备方法制备的蜜环菌提取物。所述蜜环菌提取物可为所述蜜环菌水洗脱物、所述蜜环菌水提物、所述蜜环菌NaCl洗脱物、所述蜜环菌酶解产物或所述蜜环菌水提物1。本专利技术中，所述动物可为哺乳动物。所述哺乳动物具体可为小鼠，如B6.BKS(D)-Leprdb/JNju小鼠。本专利技术中，所述糖尿病可为2型糖尿病。本专利技术中，所述产品可为药物或保健食品。本专利技术中，治疗糖尿病的效果可通过血糖水平来体现。实验证明，本专利技术的蜜环菌提取物可以治疗糖尿病：施用了蜜环菌水洗脱物的动物血糖水平显著低于未施用蜜环菌水洗脱物的动物，施用了蜜环菌醇提物与蜜环菌NaCl洗脱物的动物的血糖水平也出现下降的趋势，表明，可用本专利技术的蜜环菌提取物治疗糖尿病。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的木瓜蛋白酶为biosharp产品，酶活为0.5U/mg；纤维素酶为sigma产品，酶活为0.3U/mg。下述实施例中的B6.BKS(D)-Leprdb/JNju小鼠为南京大学模式动物研究所产品，C57BL/6J小鼠为北京华阜康生物科技股份有限公司产品。实施例1、蜜环菌提取物可以降低小鼠血糖水平1、蜜环菌提取物的制备将500g蜜环菌(ArmillariamelleaP.Kumm)子实体利用12L蒸馏水浸泡过夜(12小时)，得到混合物；将混合物于100℃孵育4h，利用300目纱布过滤，分别收集滤液(将该滤液称为提取液1)和滤渣；向滤渣中加入10L蒸馏水，然后于100℃孵育3h，利用300目纱布过滤，收集滤液(将该滤液称为提取液2)；合并提取液1和提取液2，得到混合提取液，将该混合提取液浓缩至2.5L得到蜜环菌水提物浓缩液，将该浓缩液称为蜜环菌水提物1；向蜜环菌水提物1中加入是浓缩液4倍体积的95％(体积百分比)乙醇，静置过夜，然后于4000rpm(3200RCF)离心15min，收集沉淀，干燥即得到蜜环菌水提物，将该蜜环菌水提物称为蜜环菌水提物2；将8g蜜环菌水提物2溶于160ml蒸馏水中，调节体系pH至6.5，得到溶液1；向溶液1中加入总质量为64mg的木瓜蛋白酶和32mg纤维素酶，其中加入的木瓜蛋白酶和纤维素酶质量比为2：1，使木瓜蛋白酶、纤维素酶和蜜环菌醇提物的配比为0.4U:0.12U:100mg)，于45℃孵育2h后，100℃加热煮沸15min使酶失活，得到溶液2；将溶液2于4500rpm(4000RCF)下离心15min，收集上本文档来自技高网...

【技术保护点】
蜜环菌提取物在制备治疗动物糖尿病产品中的应用；所述蜜环菌提取物为蜜环菌水洗脱物、蜜环菌水提物、蜜环菌NaCl洗脱物或蜜环菌酶解产物；所述蜜环菌水提物按照包括如下D1)的方法制备：D1)用水提取蜜环菌，收集提取液，得到所述蜜环菌水提物；所述蜜环菌酶解产物按照包括如下D2)的方法制备：D2)利用木瓜蛋白酶和纤维素酶处理所述蜜环菌水提物，得到所述蜜环菌酶解产物；所述蜜环菌水洗脱物按照包括如下D3)的方法制备：D3)将所述蜜环菌酶解产物进行DEAE‑纤维素离子交换柱层析得到所述蜜环菌水洗脱物；所述DEAE‑纤维素离子交换柱层析包括：用水洗脱，收集洗脱液，得到所述蜜环菌水洗脱物；所述蜜环菌NaCl洗脱物按照包括如下D4)的方法制备：D4)将所述蜜环菌酶解产物进行DEAE‑纤维素离子交换柱层析得到所述蜜环菌NaCl洗脱物；所述DEAE‑纤维素离子交换柱层析包括：用水洗脱，然后用NaCl水溶液洗脱，收集洗脱液，得到所述蜜环菌NaCl洗脱物。

【技术特征摘要】
1.蜜环菌提取物在制备治疗动物糖尿病产品中的应用；所述蜜环菌提取物为蜜环菌水洗脱物、蜜环菌水提物、蜜环菌NaCl洗脱物或蜜环菌酶解产物；所述蜜环菌水提物按照包括如下D1)的方法制备：D1)用水提取蜜环菌，收集提取液，得到所述蜜环菌水提物；所述蜜环菌酶解产物按照包括如下D2)的方法制备：D2)利用木瓜蛋白酶和纤维素酶处理所述蜜环菌水提物，得到所述蜜环菌酶解产物；所述蜜环菌水洗脱物按照包括如下D3)的方法制备：D3)将所述蜜环菌酶解产物进行DEAE-纤维素离子交换柱层析得到所述蜜环菌水洗脱物；所述DEAE-纤维素离子交换柱层析包括：用水洗脱，收集洗脱液，得到所述蜜环菌水洗脱物；所述蜜环菌NaCl洗脱物按照包括如下D4)的方法制备：D4)将所述蜜环菌酶解产物进行DEAE-纤维素离子交换柱层析得到所述蜜环菌NaCl洗脱物；所述DEAE-纤维素离子交换柱层析包括：用水洗脱，然后用NaCl水溶液洗脱，收集洗脱液，得到所述蜜环菌NaCl洗脱物。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述D1)包括：D11)用水提取所述蜜环菌，收集提取液，得到蜜环菌水提物1；D12)利用乙醇水溶液提取所述蜜环菌水提物1，得到所述蜜环菌水提物。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述乙醇水溶液中乙醇的体...

【专利技术属性】
技术研发人员：周义发，范玉莹，闫晶敏，宫海全，曲云鹤，
申请(专利权)人：东北师范大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22