用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物及其检测方法。所述检测方法包括如下步骤：S1：设计以及合成用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的特异性引物序列；S2：对待测样本DNA提取及处理，获得转化模板DNA；S3：应用步骤S1中的特异性引物序列及步骤S2中的模板DNA，进行PCR反应；通过琼脂糖凝胶电泳检测步骤S3中的PCR反应的产物进行验证。本发明专利技术通过7个甲基化抑癌基因标志物组合检测，提高了检测的灵敏度和特异性，为辅助诊断非小细胞肺癌提供帮助。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生命健康
，尤其涉及一种用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物及其检测方法。
技术介绍
据GLOBOCAN报告，由于人口的增长和老龄化的到来，癌症的发生率不断增加，2012年全球约有1.41千万新发癌症病例，其中肺癌发病率为180万，占癌症发病率的13％，是癌症中诊断率最高的病种，也是全球男性、发达国家女性癌症死亡率最高的病种。肺癌分为小细胞肺癌、非小细胞肺癌。非小细胞肺癌占肺癌总量的80％左右，主要包括腺癌、腺鳞癌、鳞状细胞癌和大细胞癌，非小细胞肺癌大多为腺癌或鳞状细胞癌。随着对表观遗传学研究的深入，DNA甲基化涉及基因和微RNA的表达调节、变异基因的剪切的等，其被认为在癌症早期检测中发挥重要的作用。据文献报道，在早期非小细胞肺癌中，已经发现数百个DNA甲基化位点。其中抑癌基因表达下调跟该类基因的甲基化有密切的关系。根据最新的研究进展，基因启动子区CG岛的甲基化可能是肿瘤发生的一个重要的机制。采用甲基化抑癌基因鉴定肿瘤是目前比较热门的研究方向近年来新的检测位点不断被发现并证实为肿瘤的抑制基因并不同程度的出现甲基化，如FUS1，NPRL2/G21、RASSF1A、CMTM7、DUTT1、H37、PCDH10、RASGRF2、RUNX3、RASSF2、BLU等。但已报道鉴定方法中由于采用的样本来源不同、样本数量的差别，使得标志物的组合的异质性很大，广谱适用性未知。基于此，有必要设计一种用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物组合及其检测方法，从而通过甲基化抑癌基因标志物检测，提高检测的灵敏度和特异性，为辅助诊断非小细胞肺癌提供帮助。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物及其检测方法，所述用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物及其检测方法能够通过7个甲基化抑癌基因标志物组合检测，提高了检测的灵敏度和特异性，为辅助诊断非小细胞肺癌提供帮助。为实现上述目的，本专利技术提供一种用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物，所述用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物包括HOXA9、TBX5、PITX2、MFY6、ZMYND10、TAC1、CDO1。此外，本专利技术还提供了一种用于非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的检测方法，所述用于非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的检测方法包括如下步骤：S1：设计以及合成如权利要求1所述的用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的特异性引物序列；S2：对待测样本DNA提取及处理，获得转化模板DNA；S3：应用步骤S1中的特异性引物序列及步骤S2中的模板DNA进行PCR反应；S4：通过琼脂糖凝胶电泳检测步骤S3中的PCR反应的产物。优选地，所述步骤S1包括如下步骤：S11：人工合成一对扩增HOXA9启动子甲基化区的特异性引物序列；S12：人工合成一对扩增TBX5启动子甲基化区的特异性引物序列；S13：人工合成一对扩增PITX2启动子甲基化区的特异性引物序列；S14：人工合成一对扩增MFY6启动子甲基化区的特异性引物序列；S15：人工合成一对扩增ZMYND10启动子甲基化区的特异性引物序列；S16：人工合成一对扩增TAC1启动子甲基化区的特异性引物序列；S17：人工合成一对扩增CDO1启动子甲基化区的特异性引物序列。优选地，所述步骤S2包括如下步骤：S21：取预设量的待测组织或者细胞，用手术剪剪碎转移至1.5ml的离心管中，获得待测样品A；S22：取预设量的待测样品A通过DNA提取试剂盒，获得待测样品B。优选地，所述步骤S2还包括如下步骤：S23：将待测样品B经过硫化氢盐或者亚硫酸氢盐转化，获得模板DNA。优选地，所述步骤S3中的PCR反应的扩增条件为：94℃5min，1个循环；94℃1min，58℃30s，70℃40s，5个循环；94℃1min，55℃30s，70℃40s，30个循环；70℃10min，1个循环。本专利技术提供的用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物及其检测方法通过7个甲基化抑癌基因标志物组合检测，提高了检测的灵敏度和特异性，为辅助诊断非小细胞肺癌提供帮助。附图说明图1为本专利技术用于非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的检测方法的流程示意图；图2为本专利技术用于非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的检测方法的步骤S1的流程示意图；图3为本专利技术用于非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的检测方法的步骤S2的流程示意图；图4为本专利技术7个标志物的ROC曲线下面积示意图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以下实施例是对本专利技术的解释，本专利技术并不局限于以下实施例。本专利技术提供一种用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物，所述用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物包括HOXA9、TBX5、PITX2、MFY6、ZMYND10、TAC1、CDO1。采用甲基化抑癌基因标志物进行联合检测具有快速、高通量、灵敏和特异性好等特点，检测方法不仅适用于肺癌早期的检测，为辅助诊断非小细胞肺癌提供帮助。此外，本专利技术还提供了一种用于非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的检测方法。在本实施例中，本专利技术主要适用于检测人肺癌的甲基化水平的应用，DNA提取试剂盒为，QIAmpDNAMiniKit(QIAGEN)；其他试剂为国产分析纯试剂。本专利技术所采用的生物材料均来自与申请人合作的医院。在本实施例中，待测DNA样本为生物样本：包括50例肺癌患者的肿瘤组织及配对正常组织。在实施例中，如图1所示，图1为本专利技术用于非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的检测方法的流程示意图。所述用于非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的检测方法包括如下步骤：S1：设计以及合成上述用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的特异性引物序列；具体地，上述用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物包括HOXA9、TBX5、PITX2、MFY6、ZMYND10、TAC1、CDO1。S2：对待测样本DNA的提取及处理，获得转化模板DNA；S3：应用步骤S1中的特异性引物序列及步骤S2中的模板DNA进行PCR反应；S4：通过琼脂糖凝胶电泳检测步骤S3中的PCR反应的产物。具体地来说，步骤S1包括：S11：人工合成一对扩增HOXA9启动子甲基化区的特异性引物序列；S12：人工合成一对扩增TBX5启动子甲基化区的特异性引物序列；S13：人工合成一对扩增PITX2启动子甲基化区的特异性引物序列；S14：人工合成一对扩增MFY6启动子甲基化区的特异性引物序列；S15：人工合成一对扩增ZMYND10启动子甲基化区的特异性引物序列；S16：人工合成一对扩增TAC1启动子甲基化区的特异性引物序列；S17：人工合成一对扩增CDO1启动子甲基化区的特异性引物序列。步骤S11、S12、S13、S14、S15、S16、S17中的特异性引物序列均是根据NCBI(美国国立生物技术信息中心)公开的人类全基因组序列，使用methprimer在线软件设计甲基化特异引物，由华大基因有限公司合成。HOXA9、TBX5PITX2、MFY6、ZMYND10、TAC1、CDO1均为抑癌基因，当这些基因启动子区域甲基化时，会减弱或降低这些基因的转录、翻译以及表达。因此，对于正常人群来说，HOXA9、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物，其特征在于，所述用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物包括HOXA9、TBX5、PITX2、MFY6、ZMYND10、TAC1、CDO1。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物，其特征在于，所述用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物包括HOXA9、TBX5、PITX2、MFY6、ZMYND10、TAC1、CDO1。2.一种用于非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的检测方法，其特征在于，所述用于非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的检测方法包括如下步骤：S1：设计以及合成如权利要求1所述的用于检测非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的特异性引物序列；S2：对待测样本DNA提取及处理，获得转化模板DNA；S3：应用步骤S1中的特异性引物序列及步骤S2中的模板DNA进行PCR反应；S4：通过琼脂糖凝胶电泳检测步骤S3中的PCR反应的产物。3.如权利要求2所述的用于非小细胞肺癌的甲基化抑癌基因标志物的检测方法，其特征在于，所述步骤S1包括如下步骤：S11：人工合成一对扩增HOXA9启动子甲基化区的特异性引物序列；S12：人工合成一对扩增TBX5启动子甲基化区的特异性引物序列；S13：人工合成一对扩增PITX2启动子甲基化区的特异性引物序列；S14：人工合成一对扩增MFY6启动子...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐之艳，陈琦，谷东风，高伟明，周亮，梁昊原，李慧玲，
申请(专利权)人：深圳市圣必智科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44