一种保健酒中总皂苷含量的测定方法技术

本发明专利技术提出了一种保健酒中总皂苷含量的测定方法，包括以下步骤：S1校准溶液的制备和显色，S2酒样溶液的制备和显色，以及S3酒样中总皂苷的含量计算。其中S1校准溶液的制备和显色，S2酒样溶液的制备和显色操作过程中，首先将皂苷水解成苷元，消除了糖基对香草醛显色剂的干扰，采用液液萃取方式提取苷元的同时除去了酒样中的干扰色素。本发明专利技术方法具有线性关系良好、准确度高、精确度好、重复性效果良好等优点，因此非常适合用于保健酒中总皂苷含量的定量分析和质量控制。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品测试
，特别涉及一种保健酒中总皂苷含量的测定方法。
技术介绍
保健酒已有数千年的历史，是中国医药科学的重要组成部分。中国的历代医药著作中几乎无一例外地有药酒治疾健身的记载。今天随着科学技术的进步，从中药浸酒的传统工艺的基础上已发展到利用萃取、浸提和生物工程等现代化手段，提取中药中的有效成份制成高含量的功能药酒。当人们的保健意识日趋增强，一些药物成为食用保健品时，保健酒这一新名词便开始出现。保健酒作为保健食品的一大类，是由基酒加中药配制而成，具有抗疲劳，调节免疫力之功效，免疫调节的功效。保健酒将中药功能与酒的作用有效结合，极大地增强了药物的效能与作用，药借酒势，酒助药威，迅速增强人体微循环(扩张毛细血管)，使有效成份直达病所，诸多症状可迅速缓解或消失。保健酒的生物活性成份通常来自传统中药，特别是有滋补作用的中药。全球市场上常见的保健酒有法国的廊酒(法语：Bénédictine)日本的养命酒，中国的劲酒和椰岛的鹿龟酒。它们的共同特征是配方复杂(采用数十种中药)，均声称有各样保健功效。然而，由于成份过于复杂，如何有效的对其活性成份进行定量和质量控制标准是保健酒业面临的巨大挑战。以鹿龟酒为例，它是由人参、枸杞、熟地黄、当归、黄精、砂仁、肉桂等多位中药材为原料经浸提、调配、陈酿、过滤等工艺精制而成。总皂苷作为保健酒中重要的功效成分，建立稳定的总皂苷含量测定方法是保障产品品质稳定的基础。“皂苷”是由甾体或三萜类化合物作为苷元与糖分子缩合而成的一类低聚糖苷，是一类广泛存在于植物细胞内的有机化合物，它具有调节肾脏功能，抗缺氧和抗疲劳、抗低温应激作用，抗脂质氧化作用，抗致突变作用及双向调节免疫的保健功能。总皂苷的现有检测标准为2003版《保健食品检验与评价技术规范》，该法是针对保健食品中“总皂苷”含量测定的一个广泛方法，其采用香草醛显色剂测定总皂苷含量。但是，皂苷结构中的糖基本身可与香草醛发生显色反应，保健酒中含有多种不同糖基数的皂苷致使与香草醛出现显色结果差异。
技术实现思路
鉴以此，本专利技术的目的在于提出一种保健酒中总皂苷含量的测定方法，消除皂苷结构中的糖基对香草醛显色剂的干扰，从而达到准确检测保健酒样中总皂苷含量的目的。本专利技术的技术方案是这样实现的：一种保健酒中总皂苷含量的测定方法，包括以下步骤：S1：校准溶液的制备和显色S101水解：往乙腈和盐酸的混合溶剂中加入人参皂苷Re甲醇溶液，混匀后于恒温水浴条件下进行水解；S102萃取：水解产物冷却后加入二氯甲烷和去离子水，水洗分离去掉水层，经氮吹仪吹干有机相层；S103校准溶液配制：将萃取吹干后的产物用乙腈溶解和定容，得到人参皂苷苷元校准溶液；S104测定吸光度：取人参皂苷苷元校准溶液加入到香草醛硫酸显色中间溶液中，显色体系中人参皂苷苷元校准溶液的浓度记为C标，测定人参皂苷苷元校准溶液的吸光度值，该吸光度值记为A标；S2：酒样溶液的制备和显色S201皂苷的提取：将保健酒酒样挥干乙醇和水，所得固体用水溶解，将该溶液进行固相萃取和洗脱，收集洗脱液，除去溶剂，所得固体用甲醇溶解，获得酒样皂苷甲醇溶液；S202水解：往乙腈和盐酸的混合溶剂中加入酒样皂苷甲醇溶液，混匀后于恒温水浴条件下进行水解；S203萃取：将水解产物冷却后加入二氯甲烷和去离子水，水洗分离去掉水层，经氮吹仪吹干有机相层；S204酒样溶液的配制：将萃取吹干后的产物用乙腈溶解并定容至V1mL，得到酒样苷元乙腈溶液；S205测定吸光度：吸取V2mL酒样苷元乙腈溶液加入到V3mL的香草醛硫酸显色中间溶液中，测定酒样苷元乙腈溶液的吸光度，该吸光度值记为A样；S3：酒样中总皂苷的含量计算计算公式为：式中，X表示酒样中总皂苷的含量，单位为mg/100mL；A标表示紫外分光光度计测定的校准溶液的吸光度值；A样表示紫外分光光度计测定的样品吸光度值；C标表示显色体系中校准溶液的浓度，单位为μg/mL；946.55为人参皂苷Re的摩尔分子量，单位为g/mol；476.73为人参皂苷水解成苷元的摩尔分子量，单位为g/mol。进一步的，步骤S101和S202的水解过程中，恒温水浴温度为70～90℃，时间为1～5小时。进一步的，步骤S101和S202的水解过程中，乙腈和盐酸的体积比为1:1。进一步的，步骤S101和S202的水解过程中使用的盐酸还可以用硫酸或硝酸代替。进一步的，所述步骤S104的测定吸光度过程中，取人参皂苷苷元校准溶液加入到香草醛硫酸显色中间溶液中，涡旋混匀，得到校准显色组；同时吸取乙腈加入到香草醛硫酸显色中间溶液中，涡旋混匀，得到溶剂空白显色组；所得校准显色组和溶剂空白显色组水浴加热后迅速放入冰水中冷却，后检测溶液在最大吸收波长下的吸光度值。进一步的，所述步骤S201皂苷的提取过程中，将保健酒酒样水浴挥干乙醇和水，所得固体用水溶解，将该溶液加入经激活的萃取小柱中萃取，然后用去离子水洗涤，保持1～2滴/秒的速度洗涤，再用甲醇进行洗脱，收集洗脱液，除去甲醇和水，所得固体用甲醇溶解，获得酒样皂苷甲醇溶液。进一步的，所述步骤S205的测定吸光度过程中，取酒样苷元乙腈溶液加入到的香草醛硫酸显色中间溶液中，混合均匀，所得混合物水浴加热后迅速放入冰水中冷却，后检测溶液在最大吸收波长下的吸光度值。进一步的，测定过程中所使用到的甲醇还可以替换为水饱和正丁醇。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提出的保健酒中总皂苷含量的测定方法采用皂苷酸水解显色法测定保健酒中的总皂苷含量，将保健酒中的皂苷水解成苷元，消除了皂苷糖基对香草醛显色剂的干扰，采用液液萃取方式提取苷元的同时除去了酒样中的干扰色素。且以水解后的人参皂苷苷元制备标准曲线，本专利技术方法具有线性关系良好的优点。本专利技术测定方法具有准确度高、精确度好、重复性效果良好等优点，因此非常适合用于保健酒中总皂苷含量的定量分析和质量控制。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为本专利技术实施例中人参皂苷苷元标准曲线图。图中，横坐标为苷元标准曲线工作溶液显色体系中的浓度，纵坐标为吸光度。具体实施方式为对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，专利技术人结合实施例进行说明，但以下实施例所描述的仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。仪器与试剂：莱伯泰科UV2000型紫外分光光度计；十万分之一分析天平(MettlerToledoXS205DU)；万分之一天平(MettlerToledoAL204-IC)；漩涡混悬器(VELPZX3)；固相萃取仪(supelco12管路)；隔膜真空泵(AmeritechAVP-7120)；氮吹仪(上海安谱DC-12)；旋转蒸发仪(上海申顺生物科技R-201)。移液枪；塑料离心管；50ml圆底烧瓶；巴氏吸管；固相萃取柱(bondElut-C18OH，500mg3ml，50/PK，AgilentTechnologies)。香草醛(基准试剂)二氯甲烷、甲醇、乙腈、硫酸、盐酸为分析纯。77％硫酸溶液(v/v)；氯化氢水溶液(4mol/L)；70％甲醇水溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种保健酒中总皂苷含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：校准溶液的制备和显色S101水解：往乙腈和盐酸的混合溶剂中加入人参皂苷Re甲醇溶液，混匀后于恒温水浴条件下进行水解；S102萃取：水解产物冷却后加入二氯甲烷和去离子水，水洗分离去掉水层，经氮吹仪吹干有机相层；S103校准溶液配制：将萃取吹干后的产物用乙腈溶解和定容，得到人参皂苷苷元校准溶液；S104测定吸光度：取人参皂苷苷元校准溶液加入到香草醛硫酸显色中间溶液中，显色体系中人参皂苷苷元校准溶液的浓度记为C标，测定人参皂苷苷元校准溶液的吸光度值，该吸光度值记为A标；S2：酒样溶液的制备和显色S201皂苷的提取：将保健酒酒样挥干乙醇和水，所得固体用水溶解，将该溶液进行固相萃取和洗脱，收集洗脱液，除去溶剂，所得固体用甲醇溶解，获得酒样皂苷甲醇溶液；S202水解：往乙腈和盐酸的混合溶剂中加入酒样皂苷甲醇溶液，混匀后于恒温水浴条件下进行水解；S203萃取：将水解产物冷却后加入二氯甲烷和去离子水，水洗分离去掉水层，经氮吹仪吹干有机相层；S204酒样溶液的配制：将萃取吹干后的产物用乙腈溶解并定容至V1mL，得到酒样苷元乙腈溶液；S205测定吸光度：吸取V2mL酒样苷元乙腈溶液加入到V3mL的香草醛硫酸显色中间溶液中，测定酒样苷元乙腈溶液的吸光度，该吸光度值记为A样；S3：酒样中总皂苷的含量计算计算公式为：式中，X表示酒样中总皂苷的含量，单位为mg/100mL；A标表示紫外分光光度计测定的校准溶液的吸光度值；A样表示紫外分光光度计测定的样品吸光度值；C标表示显色体系中校准溶液的浓度，单位为μg/mL；946.55为人参皂苷Re的摩尔分子量，单位为g/mol；476.73为人参皂苷水解成苷元的摩尔分子量，单位为g/mol。...

【技术特征摘要】
1.一种保健酒中总皂苷含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：校准溶液的制备和显色S101水解：往乙腈和盐酸的混合溶剂中加入人参皂苷Re甲醇溶液，混匀后于恒温水浴条件下进行水解；S102萃取：水解产物冷却后加入二氯甲烷和去离子水，水洗分离去掉水层，经氮吹仪吹干有机相层；S103校准溶液配制：将萃取吹干后的产物用乙腈溶解和定容，得到人参皂苷苷元校准溶液；S104测定吸光度：取人参皂苷苷元校准溶液加入到香草醛硫酸显色中间溶液中，显色体系中人参皂苷苷元校准溶液的浓度记为C标，测定人参皂苷苷元校准溶液的吸光度值，该吸光度值记为A标；S2：酒样溶液的制备和显色S201皂苷的提取：将保健酒酒样挥干乙醇和水，所得固体用水溶解，将该溶液进行固相萃取和洗脱，收集洗脱液，除去溶剂，所得固体用甲醇溶解，获得酒样皂苷甲醇溶液；S202水解：往乙腈和盐酸的混合溶剂中加入酒样皂苷甲醇溶液，混匀后于恒温水浴条件下进行水解；S203萃取：将水解产物冷却后加入二氯甲烷和去离子水，水洗分离去掉水层，经氮吹仪吹干有机相层；S204酒样溶液的配制：将萃取吹干后的产物用乙腈溶解并定容至V1mL，得到酒样苷元乙腈溶液；S205测定吸光度：吸取V2mL酒样苷元乙腈溶液加入到V3mL的香草醛硫酸显色中间溶液中，测定酒样苷元乙腈溶液的吸光度，该吸光度值记为A样；S3：酒样中总皂苷的含量计算计算公式为：式中，X表示酒样中总皂苷的含量，单位为mg/100mL；A标表示紫外分光光度计测定的校准溶液的吸光度值；A样表示紫外分光光度计测定的样品吸光度值；C标表示显色体系中校准溶液的浓度，单位为μg/mL；946.55为人参皂苷Re的摩尔分子量，单位为g/mol；476.73为人参皂苷水解成苷元的摩尔分...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷燕，张湘娥，吴炜，周海妹，符小婕，敬霖志，
申请(专利权)人：海南椰岛酒业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：海南;46