气相色谱串联质谱法同时测定豆芽中6种植物生长调节剂残留的方法技术

技术编号:14642970 阅读:111 留言:0更新日期:2017-02-15 23:08
本发明专利技术涉及一种豆芽中6种植物生长调节剂残留的测定方法,尤其是涉及一种通过气相色谱串联质谱/质谱法对豆芽中6种植物生长调节剂进行定量检测的方法。气相色谱串联质谱/质谱法同时测定豆芽中6种植物生长调节剂残留的方法,6种植物生长调节剂为4‑氯苯氧乙酸、2,4‑二氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸、2,4‑D‑丁酯和吲哚丁酸,方法如下:1)样品处理;2)测定;采用气相色谱串联质谱/质谱法;3)标准曲线的制作;4)空白试验;5)结果计算和表述。本发明专利技术的测定方法采用气相色谱串联质谱/质谱法同时测定豆芽中6种植物生长调节剂的残留,方法简便、快速、准确、可靠,方法的测定低限、回收率和精密度均符合要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种豆芽中6种植物生长调节剂残留的测定方法,尤其是涉及一种通过气相色谱串联质谱/质谱法对豆芽中6种植物生长调节剂进行定量检测的方法。
技术介绍
近年来,随着“毒豆芽”事件的屡次曝光,引起了人民对豆芽质量安全的高度重视。所谓“毒豆芽”,是指在豆芽生产过程中非法添加对人体有害的工业原料、激素、农药、兽药、抗生素等,从而改变豆芽生产周期和外观,增加豆芽产量,最后流入市场销售的豆芽,因其添加的很多物质都对人体有害,故称为毒豆芽。植物生长调节剂是人工合成的对植物的生长发育有调节作用的化学物质和从生物中提取的天然植物激素。根据其作用可分为:植物生长抑制剂,植物生长促进剂,植物生长延缓剂。在生产上常用的有3种类型植物生长促进剂生长素类,分别是:吲哚衍生物,如吲哚乙酸(IAA),吲哚丁酸(IBA);氯代苯的衍生物,如2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D),2,4-D丁酯;萘乙酸类,如萘乙酸(NAA);防落素,如4-氯苯氧乙酸(4-CPA)。它们的生理作用与内源激素相似,可以促进植物叶片的扩大生长,维管束的分化、根的形成。不法商贩在生产豆芽时通过添加豆芽激素,使豆芽长得粗壮长,无毛根,从而来迎合群众的选购意愿。而人类食用后可以通过新陈代谢将其降解,正常使用情况下合理地使用植物生长调节剂,将它在豆芽中的残留量控制在一定范围内,是不会对人体造成危害的。但是不合理的过量植物生长调节剂被人体吸收后,长期食用会对人体产生蓄积危害。GB2760-2014规定经表面处理的新鲜蔬菜中2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的的最大使用量0.01g/kg,最高残留限量≤2.0mg/kg。国家食品药品监督管理总局发布的食药监食监三便函[2014]73号文件提供了一种气相色谱质谱联用法(GC-MS),检测豆芽中4-氯苯氧乙酸(4-CPA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、2,4-D-丁酯、吲哚丁酸(IBA)6种植物生长调节剂,并且要求测定低限(LOQ)为0.03mg/kg。美国规定了果蔬类蔬菜中2,4-D的残留限量为0.1mg/kg。实验过程中发现豆芽基质干扰较大,尤其是吲哚乙酸(IAA)和吲哚丁酸(IBA),回收率低,GC-MS法无法准确定量。因此迫切需要建立一个准确、可靠的气相色谱-串联质谱/质谱(GC-MS/MS)测定方法。国内外关于豆芽中相关药物残留的检测方法报道较少。目前,植物生长调节剂的检测方法主要有气相色谱法(GC),气相色谱-质谱法(GC-MS),气相色谱串联质谱/质谱法(GC-MS/MS),高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱串联质谱/质谱法(LC-MS/MS)。常宇文报道了一种利用凝胶渗透色谱-气相色谱法测定豆芽中2,4-二氯苯氧乙酸残留量的方法。石金娥采用GC-MS法检测了豆芽中4-氯苯氧乙酸、萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、2,4-D-乙酯、2,4-D-丁酯、吲哚乙酸、吲哚丁酸7种植物生长调节剂的残留量。吴平谷利用气相色谱质谱(GC-MS)法测定了豆芽中2,4-D-乙酯、2,4-D-丁酯、4-氯苯氧乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、β-萘乙酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸、多效唑、激动素、6-苄基腺嘌呤10种植物生长调节剂的残留量。李殷利用气相色谱串联质谱法测定了豆芽中4-氯苯氧乙酸和2,4-二氯苯氧乙酸2种植物生长调节剂的残留量。柴勇利用高效液相色谱法测定了豆芽中赤霉素、激动素、6-苄氨基嘌呤、2,4-二氯苯氧乙酸4种激素的残留量,方法的测定低限<0.5mg/kg。刘春生利用超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)法检测了豆芽中咪鲜胺、头孢氨苄、诺氟沙星、6-苄氨基嘌呤、赤霉酸、2,4-二氯苯氧乙酸、4-氯苯氧乙酸7种药物的残留量。刘印平利用气相色谱质谱(GC-MS)法测定了豆芽中4-氯苯氧乙酸、吲哚乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、2,4-二氯苯氧乙酸丁酯、吲哚丁酸、β-萘乙酸6种植物生长调节剂的残留量。
技术实现思路
为了解决现有豆芽中植物生长调节剂残留检测的难题,本专利技术的目的是提供一种气相色谱串联质谱/质谱法测定豆芽中4-氯苯氧乙酸(4-CPA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、2,4-D-丁酯、吲哚丁酸(IBA)残留量的方法,该方法准确、快速、高效,测定低限均为15μg/kg,回收率和精密度均符合残留分析要求,并且完全满足国内外有关法规对豆芽中植物生长调节剂残留的要求,可为进出口豆芽植物生长调节剂残留的监管提供技术支持。为了实现上述目的,本专利技术采用了以下的技术方案:气相色谱串联质谱/质谱法同时测定豆芽中6种植物生长调节剂残留的方法,6种植物生长调节剂为4-氯苯氧乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸、2,4-D-丁酯和吲哚丁酸,该方法包括以下步骤:1)样品处理:①样品提取分别称取两份豆芽试样各10.0g(精确至0.01g)于两个50mL离心管中(一份用于测定4-氯苯氧乙酸(4-CPA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA),另一份用于测定2,4-二氯苯氧乙酸丁酯),分别加入40μL加酸,再加入20mL乙腈,3.0g氯化钠,涡旋混匀,4000rpm离心5min后,取10mL上层乙腈,用旋转蒸发仪浓缩至近干,分别都用甲醇复溶。②衍生向第一份复溶液加入1mL三氟化硼甲醇衍生溶液,涡旋混匀,40℃加热衍生10min,取出冷却后待净化用;③净化将衍生液和2,4-二氯苯氧乙酸丁酯的复溶液合并后转移至离心管中,加入2.0mL乙酸乙酯-正己烷混合溶液和2.0mL纯水,涡旋混匀,4000rpm离心机离心5min,取出上层有机相,向下层水相再加入2.0mL乙酸乙酯-正己烷混合溶液重复萃取一遍,合并两次萃取液,40℃水浴下氮吹至1.0mL以下,再用乙酸乙酯-正己烷混合溶液定容至1.0mL,过膜后转移至进样瓶中供GC-MS/MS分析测定。2)测定:采用气相色谱串联质谱/质谱法,其中:液相色谱条件为:a)色谱柱为HP-5MS,30m×0.25mm×0.25μm;b)进样口温度:220℃;c)程序升温:80℃保温1.0min,10℃/min升温至230℃,保温4min,30℃/min升温至320℃保温3min;d)载气:氦气,纯度≥99.999%,流速:1.0mL/min;e)进样方式:不分流进样;f)进样量:2μL;质谱条件为:a)电离模式:电子轰击源(EI);b)电离能量:70eV;c)离子源温度:230℃;d)接口温度:280℃;e)离子检测模式:多反应监测模式(MRM);所述的多反应监测条件如下:其中,带“*”的为定量离子,其余为定性离子;(3)标准曲线的制作纯溶剂标准溶液:移取0.25mL4-氯苯氧乙酸、2,4-D、萘乙酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸的混合工作溶液于10mL玻璃离心管中,再加入1.0mL三氟化硼甲醇溶液,涡旋混匀,40℃加热衍生10min,取出冷却后加入0.25mL2,4-D-丁酯工作溶液,然后按照步骤③进行净化,制备成含量为50ng/mL、75ng/mL、150ng/mL、30本文档来自技高网
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【技术保护点】
气相色谱串联质谱/质谱法同时测定豆芽中6种植物生长调节剂残留的方法,6种植物生长调节剂为4‑氯苯氧乙酸、2,4‑二氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸、2,4‑D‑丁酯和吲哚丁酸,其特征在于该方法包括以下步骤:1)样品处理:①样品提取分别称取两份豆芽试样各10.0g,精确至0.01g,于两个50mL离心管中,一份用于测定4‑氯苯氧乙酸、2,4‑二氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸和吲哚丁酸,另一份用于测定2,4‑二氯苯氧乙酸丁酯,分别加入40μL加酸,再加入20mL乙腈,3.0g氯化钠,涡旋混匀,4000rpm离心5min后,取10mL上层乙腈,用旋转蒸发仪浓缩至近干,分别都用甲醇复溶;②衍生向第一份复溶液加入1mL三氟化硼甲醇衍生溶液,涡旋混匀,40℃加热衍生10min,取出冷却后待净化用;③净化将衍生液和2,4‑二氯苯氧乙酸丁酯的复溶液合并后转移至离心管中,加入2.0mL乙酸乙酯‑正己烷混合溶液和2.0mL纯水,涡旋混匀,4000rpm离心机离心5min,取出上层有机相,向下层水相再加入2.0mL乙酸乙酯‑正己烷混合溶液重复萃取一遍,合并两次萃取液,40℃水浴下氮吹至1.0mL以下,再用乙酸乙酯‑正己烷混合溶液定容至1.0mL,过膜后转移至进样瓶中供GC‑MS/MS分析测定;2)测定:标准工作液和样品溶液在以下设定的气相色谱串联质谱/质谱条件下进样:气相色谱条件为:a)色谱柱为HP‑5MS,30m×0.25mm×0.25μm;b)进样口温度:220℃;c)程序升温:80℃保温1.0min,10℃/min升温至230℃,保温4min,30℃/min升温至320℃保温3min;d)载气:氦气,纯度≥99.999%,流速1.0mL/min;e)进样方式:不分流进样;f)进样量:2μL;质谱条件为:a)电离模式:电子轰击源;b)电离能量:70eV;c)离子源温度:230℃;d)接口温度:280℃;e)离子检测模式:多反应监测模式;所述的多反应监测条件如下:其中,带“*”的为定量离子,其余为定性离子;3)标准曲线的制作纯溶剂标准溶液:移取0.25mL 4‑氯苯氧乙酸、2,4‑D、萘乙酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸的混合工作溶液于10mL玻璃离心管中,再加入1.0mL三氟化硼甲醇溶液,涡旋混匀,40℃加热衍生10min,取出冷却后加入0.25mL2,4‑D‑丁酯工作溶液,然后按照步骤③进行净化,制备成含量为50ng/mL、75ng/mL、150ng/mL、300ng/mL、500ng/mL的标准溶液;基质匹配标准溶液:准确吸取适量空白样品基质,氮吹干,分别加入等量的混合标准工作液,混匀后,配成系列基质匹配的标准工作溶液,现配现用;4)空白试验不加试样,在步骤1)和步骤2)相同实验条件下进行试验;5)结果计算和表述按公式以下公式计算试样中各个植物生长调节剂含量:X=C×V×1000m×1000]]>式中:X—试样中各个植物生长调节剂的含量,单位为微克每千克;C—由标准工作曲线得到样液中各个植物生长调节剂的浓度,单位为纳克每毫升;V—样液最终定容体积,单位为毫升;m—最终样液所代表的试样质量,单位为克。...

【技术特征摘要】
1.气相色谱串联质谱/质谱法同时测定豆芽中6种植物生长调节剂残留的方法,6种植物生长调节剂为4-氯苯氧乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸、2,4-D-丁酯和吲哚丁酸,其特征在于该方法包括以下步骤:1)样品处理:①样品提取分别称取两份豆芽试样各10.0g,精确至0.01g,于两个50mL离心管中,一份用于测定4-氯苯氧乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸和吲哚丁酸,另一份用于测定2,4-二氯苯氧乙酸丁酯,分别加入40μL加酸,再加入20mL乙腈,3.0g氯化钠,涡旋混匀,4000rpm离心5min后,取10mL上层乙腈,用旋转蒸发仪浓缩至近干,分别都用甲醇复溶;②衍生向第一份复溶液加入1mL三氟化硼甲醇衍生溶液,涡旋混匀,40℃加热衍生10min,取出冷却后待净化用;③净化将衍生液和2,4-二氯苯氧乙酸丁酯的复溶液合并后转移至离心管中,加入2.0mL乙酸乙酯-正己烷混合溶液和2.0mL纯水,涡旋混匀,4000rpm离心机离心5min,取出上层有机相,向下层水相再加入2.0mL乙酸乙酯-正己烷混合溶液重复萃取一遍,合并两次萃取液,40℃水浴下氮吹至1.0mL以下,再用乙酸乙酯-正己烷混合溶液定容至1.0mL,过膜后转移至进样瓶中供GC-MS/MS分析测定;2)测定:标准工作液和样品溶液在以下设定的气相色谱串联质谱/质谱条件下进样:气相色谱条件为:a)色谱柱为HP-5MS,30m×0.25mm×0.25μm;b)进样口温度:220℃;c)程序升温:80℃保温1.0min,10℃/min升温至230...

【专利技术属性】
技术研发人员:张文华谢文侯建波邹学权童赟恺黄超群姚滨滨史颖珠钱艳李杰何建敏奚君阳
申请(专利权)人:浙江省检验检疫科学技术研究院
类型:发明
国别省市:浙江;33

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