【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求2013年6月21日提交的美国临时申请号61/837,932的权益;这个临时申请以其全文引用的方式并入本文中;包括任何图式。序列表的引用本申请连同电子格式的序列表一起提交。序列表以命名为“TGase10PCT_ST25”的文件提供,于2014年6月20日创建,大小为20KB。序列表的电子格式中的信息以其全文引用的方式并入本文中。
本申请涉及化学、生物化学以及医学领域。本文公开了特别是用药物使免疫球蛋白功能化的方法。本文还公开了连接试剂、功能化抗体、医药组合物以及治疗疾病和/或病状的方法。
技术介绍
偶联至所关注的药物的免疫球蛋白,一般称为抗体药物偶联物(ADC),是治疗研究的有前景的领域。ADC技术中的新近发展已经集中于提供细胞内裂解的连接子技术,或更新近的是提供更高的体内稳定性和降低的毒性的不可裂解连接子。然而,基于不可裂解连接子的方法的可行性相比在可裂解连接子的情况下可能更加取决于细胞标靶。具有不可裂解连接子的ADC必须在细胞内内化和降解,而具有可裂解连接子的化合物可以经由细胞外药物释放和药物进入肿瘤细胞中对不良内化的标靶具活性。类似地,经由靶向抗原阳性细胞杀死旁邻抗原阴性细胞(附带的毒性)推测起来仅可能使用可裂解连接子。因此,一般据信,对于所有ADC不存在通用连接子设计并且必须独立地检查每个抗体。另外,连接至毒素的药物的功效可以例如取决于细胞类型或特定肿瘤细胞而变化,这样的话可能还 ...
【技术保护点】
一种使疏水性、高分子量或带电有机化合物偶联至抗体的方法,其包括以下步骤:a)提供包含接受体谷氨酰胺残基的抗体或抗体片段;b)使所述抗体与包含伯胺的连接试剂和所关注的部分(Z)反应,其中(Z)为疏水性化合物、带电有机化合物和/或具有至少500、700或800g/mol的分子量的有机化合物,在TGase存在下,在足以获得包含经由所述连接试剂连接至所述所关注的部分(Z)的接受体谷氨酰胺的抗体的条件下进行,其中所述反应混合物不含有机溶剂或含有小于10%(v/v),任选地进一步小于5%、4%、3%或2%(v/v)的有机溶剂。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.06.21 US 61/837,9321.一种使疏水性、高分子量或带电有机化合物偶联至抗体的方法,其包括以下步骤:
a)提供包含接受体谷氨酰胺残基的抗体或抗体片段;
b)使所述抗体与包含伯胺的连接试剂和所关注的部分(Z)反应,其中(Z)为疏水性化合
物、带电有机化合物和/或具有至少500、700或800g/mol的分子量的有机化合物,在TGase存
在下,在足以获得包含经由所述连接试剂连接至所述所关注的部分(Z)的接受体谷氨酰胺
的抗体的条件下进行,其中所述反应混合物不含有机溶剂或含有小于10%(v/v),任选地进
一步小于5%、4%、3%或2%(v/v)的有机溶剂。
2.一种使疏水性、高分子量或带电有机化合物偶联至抗体的方法,其包括以下步骤:
a)提供在重链的位置297(EU编号)处包含谷氨酰胺残基并且在位置295(EU编号)处缺
乏接受体谷氨酰胺的抗体或抗体片段;
b)使所述抗体与包含伯胺的连接试剂和所关注的部分(Z)反应,其中(Z)为疏水性化合
物、带电有机化合物和/或具有至少500、700或800g/mol的分子量的有机化合物,在TGase存
在下,在足以获得包含经由所述连接试剂连接至所述所关注的部分(Z)的接受体谷氨酰胺
的抗体的条件下进行。
3.一种使疏水性、高分子量和/或带电有机化合物偶联至抗体的方法,其包括以下步
骤:
a)提供具有至少一个接受体谷氨酰胺残基的抗体;以及
b)使所述抗体与包含伯胺的连接子和反应基团(R)反应,在TGase存在下,在足以获得
包含经由所述连接子连接至反应基团(R)的接受体谷氨酰胺的抗体的条件下进行,其中所
述反应混合物不含有机溶剂或含有小于10%(v/v)或含有小于5%、4%、3%或2%(v/v)的
有机溶剂;以及
(c)在有机溶剂存在下,任选地在至少2%、3%、4%、5%或10%(v/v)的有机溶剂存在
下,使以下反应:
(i)包含经由包含伯胺的连接子连接至反应基团(R)的接受体谷氨酰胺的步骤(b)的抗
体,与
(ii)包含所关注的部分(Z)和能够与反应基团R反应的反应基团(R′)的化合物,其中
(Z)为疏水性化合物、带电有机化合物和/或具有至少500、700或800g/mol的分子量的有机
化合物,
在足以获得包含经由包含伯胺的连接子连接至所关注的部分(Z)的接受体谷氨酰胺的
抗体的条件下进行。
4.如权利要求4所述的方法,其中抗体包含人类重链和轻链恒定区,其中所述重链恒定
区包含N297Q取代和Q295X取代,其中X为除谷氨酰胺之外的任何氨基酸。
5.如权利要求1至2或4所述的方法,其中获得式IVa的抗体或组合物。
6.如权利要求3至4所述的方法,其中获得式IVb的抗体或组合物。
7.一种抗体,其通过如前述权利要求中任一项所述的方法产生。
8.一种包含功能化接受体谷氨酰胺残基的抗体或抗体片段,其中所述接受体谷氨酰胺
残基在+2位置处由丙氨酸、组氨酸或丝氨酸侧接,所述功能化接受体谷氨酰胺残基具有式
IVa,
(Q)-NH-(C)n-X-L-(V-(Y-(Z或R)z)q)r式IVa
或其医药学上可接受的盐或溶剂化物,
其中:
Q为存在于抗体或抗体片段中的谷氨酰胺残基;
(C)n为经取代或未经取代的烷基或杂烷基链,任选地其中所述链的任何碳被烷氧基、羟
基、烷基羰氧基、烷基-S-、硫醇、烷基-C(O)S-、胺、烷基胺、酰胺或烷基酰胺取代;
n为选自2至20的范围的整数;
X为NH、O、S、不存在或键;
L独立地为不存在、键或连续的键、或在一个或多个原子处被取代的5至200个原子的含
碳构架,任选地其中所述含碳构架包含任选地在一个或多个原子处被取代的5至30个碳原
子的直链构架,任选地其中所述含碳构架为直链烃、对称或不对称支链烃、单糖、二糖、直链
或支链寡糖(不对称支链或对称支链)、其它天然直链或支链寡聚物(不对称支链或对称支
链),或由任何链增长或逐步增长聚合工艺产生的二聚物、三聚物或高碳寡聚物(直链、不对
称支链或对称支链);
r为选自1、2、3或4的整数;
q为选自1、2、3或4的整数;
z为选自1、2、3或4的整数;并且
V独立地为不存在、不可裂解的部分或可有条件地裂解的部分;
Y独立地为不存在、键或连续的键、或由1个或多个间隔子组成的间隔子系统;
R为反应部分,并且
Z为改善药物动力学特性的部分、治疗部分或诊断部分。
9.一种在重链的位置297(EU编号)处包含功能化接受体谷氨酰胺残基并且在位置295
(EU编号)处缺乏接受体谷氨酰胺的抗体或抗体片段,所述功能化接受体谷氨酰胺残基具有
式IVa,
(Q)-NH-(C)n-X-L-(V-(Y-(Z)z)q)r式IVa
或其医药学上可接受的盐或溶剂化物,
其中:
Q为存在于抗体或抗体片段中的谷氨酰胺残基;
(C)n为经取代或未经取代的烷基或杂烷基链,任选地其中所述链的任何碳被烷氧基、羟
基、烷基羰氧基、烷基-S-、硫醇、烷基-C(O)S-、胺、烷基胺、酰胺或烷基酰胺取代;
n为选自2至20的范围的整数;
X为NH、O、S、不存在或键;
L独立地为不存在、键或连续的键、或在一个或多个原子处被取代的5至200个原子的含
碳构架,任选地其中所述含碳构架包含任选地在一个或多个原子处被取代的5至30个碳原
子的直链构架,任选地其中所述含碳构架为直链烃、对称或不对称支链烃、单糖、二糖、直链
或支链寡糖(不对称支链或对称支链)、其它天然直链或支链寡聚物(不对称支链或对称支
链),或由任何链增长或逐步增长聚合工艺产生的二聚物、三聚物或高碳寡聚物(直链、不对
称支链或对称支链);
r为选自1、2、3或4的整数;
q为选自1、2、3或4的整数;
z为选自1、2、3或4的整数;并且
V独立地为不存在、不可裂解的部分或可有条件地裂解的部分;
Y独立地为不存在、键或连续的键、或由1个或多个间隔子组成的间隔子系统;并且
Z为改善药物动力学特性的部分、治疗部分或诊断部分,其中Z为带负电、疏水性和/或
具有至少400g/mol的分子量的有机化合物。
10.如权利要求9所述的抗体,其中所述抗体在所述位置295处具有除天冬酰胺之外的
氨基酸。
11.如权利要求9所述的抗体,其中所述抗体在所述位置295处具有丝氨酸、丙氨酸、...
【专利技术属性】
技术研发人员:D·贝尔根,P·丹勒,C·贝尔蒙特,L·戈捷,F·罗马涅,E·费舍尔,R·斯科博勒,
申请(专利权)人:先天制药公司,保罗·谢勒研究所,
类型:发明
国别省市:法国;FR
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