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EGCG在制备对抗脓毒症细菌内毒素靶向药物中的应用制造技术

技术编号:14558194 阅读:184 留言:0更新日期:2017-02-05 12:39
本发明专利技术公开了一种EGCG在制备对抗脓毒症细菌内毒素靶向药物中的应用,所述的EGCG加入其它治疗脓毒症的药物中,起到靶向作用,所述的EGCG可和适量药学上可以接受的载体制备成药物制剂,所述的药物制剂为溶液制剂或干粉制剂,所述药物制剂的给药形式为静脉给药,皮下注射,腹腔内注射或肌肉注射。本申请发现EGCG的新药理作用,EGCG特异性作用于CD14-TLR4受体复合物,可显著抑制外周血中CD14以及CD14-TLR4复合物水平,能有效对抗LPS致死性细胞毒性效应。

Application of EGCG in preparation of target drug for bacterial endotoxin in sepsis

The invention discloses an application of EGCG in the preparation of anti sepsis drug targeting bacterial endotoxin in the drug, the EGCG joined in the treatment of sepsis, the targeting vector, the EGCG may be appropriate and pharmaceutically acceptable preparation into pharmaceutical preparations, the the pharmaceutical preparations for solution preparation or powder preparation, the pharmaceutical dosage form for intravenous injection, subcutaneous injection, intraperitoneal injection or intramuscular injection. For the discovery of new pharmacological effects of EGCG, EGCG specific to the CD14-TLR4 receptor complex, can inhibit the peripheral blood CD14 and CD14-TLR4 compound level, effective against LPS lethal cytotoxic effect.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
,具体涉及一种EGCG在制备对抗脓毒症细菌内毒素靶向药物中的应用
技术介绍
革兰阴性菌感染的危害性主要源自其释放的内毒素LPS。内毒素LPS结构在20世纪90年代中期就已经研究清楚,由多糖O抗原、核心多糖和类脂A(lipidA)三部分组成。核心多糖由庚糖、半乳糖、2-酮基-3-脱氧辛酸(2-keto-3-deoxyoctonicacid,KDO)等组成,类脂A是葡萄胺二糖脂化形成特殊的糖脂化合物。其结构中类脂A是革兰氏阴性细菌内毒素的毒性成分。通常LPS以完整的形式存在于细菌细胞外膜上,当其从菌体上游离下来,成为可溶性的游离LPS时具有广泛的生物活性,其活性是细胞壁上内毒素的50~100倍。研究还表明细菌内毒素可通过两种途径进入血液循环导致内毒素血症:一是外源性革兰阴性菌感染,二是肠道系统内源性革兰阴性菌转位。很多严重疾病(如损伤、烧伤、心、肾、消化系统、呼吸系统、肿瘤、心血管手术、自动免疫等方面的疾病)都直接或间接与革兰阴性菌感染及其释放的内毒素有关。已知细胞表面受体TLR4是革兰氏阴性细菌LPS于靶细胞表面特异性的结合受体,而CD14是外周血中LPS特异性的受体,革兰氏阴性细菌释放LPS入血形成内毒素血症,LPS通过识别和结合外周血中CD14形成LPS-CD14复合物,LPS-CD14复合物是LPS进一步识别和结合靶细胞表面受体TLR4所必需的;LPS借助CD14与TLR4结合形成LPS-TLR4-CD14复合物,从而激活TLR4信号系统,介导LPS诱导的炎症反应及细胞钙超载损伤等脓毒症反应。因此,CD14-TLR4复合物是LPS活化TLR4信号从而启动致死性毒性反应的关键因素。如果能封闭CD14的功能,就能最大限度的抑制LPS对TLR4的活化,从而阻断LPS介导的炎症反应、钙超载损伤,对于脓毒症、感染性性休克的治疗具有重要的临床意义。表没食子儿茶素EGCG(((-)-Epigallocatechingallate,EGCG)的主要作用具有抗氧化、抗炎症反应及调节机体免疫功能,但对LPS诱导的CD14-TLR4活化以及细胞钙离子代谢的作用没有报道。
技术实现思路
针对现有技术对治疗脓毒症存在的技术难题,本专利技术的目的在于提供一种EGCG在制备对抗脓毒症细菌内毒素靶向药物中的应用。本专利技术具体通过以下技术方案实现:本专利技术提供了EGCG在制备对抗脓毒症细菌内毒素靶向药物中的应用,所述脓毒症可以为重症脓毒症、脓毒症休克。所述EGCG特异性作用于CD14-TLR4受体复合物,是LPS诱导脓毒症细胞钙超载的药物作用靶点。本专利技术所述EGCG加入其它治疗脓毒症的药物中,起到靶向作用,其中所述其它治疗药物为抗感染类药物或重组人活化蛋白C,所述抗感染类药物为抗生素类、抗真菌类、抗病毒类、抗支原体类、抗肿瘤类或免疫抑制剂;其中所述抗生素类为β-内酰胺类、氨基糖甙类、四环素类、酰胺醇类或大环内脂类,所述抗真菌类为多烯类、三唑类、嘧啶类或棘白菌素类。本专利技术所述EGCG可和适量药学上可以接受的载体制备成药物制剂,其中所述药用载体可以是pH缓冲系统,渗透压调节剂,防腐剂,稳定剂等辅助成分,优选自:磷酸钠(SodiumPhosphate)、琥珀酸钠(SodiumSuccinate)、组氨酸(Histidine)、甘露醇(Mannitol)、聚山梨醇酯20/80(Polysorbate20/80)、氯化钠(SodiumChloride)、蔗糖(Sucrose)、三羟甲基氨基甲烷(Trometamol)和乳糖等。本专利技术所述药物制剂为溶液制剂或干粉制剂,所述药物制剂的给药形式为静脉给药,皮下注射,腹腔内注射或肌肉注射。本专利技术的有益效果为:本专利技术发现了EGCG的新药理作用,即EGCG特异性作用于CD14-TLR4受体复合物,可显著抑制外周血中CD14的水平,以及CD14-TLR4复合物水平,从而阻断LPS对LTR4信号的活化,抑制了TLR4信号介导的炎症反应介质的释放,以及钙超载损伤,降低脓毒症小鼠的死亡率。附图说明以下结合附图所示实施例的具体实施方式,对专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。图1为小鼠肺血管内皮细胞的钙离子曲线。图2为EGCG对内毒素血症小鼠生存率(Survival%)的影响。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的说明,以下所述,仅是对本专利技术的较佳实施例而已,并非对本专利技术做其他形式的限制,任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的
技术实现思路
加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本专利技术方案内容,依据本专利技术的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化,均落在本专利技术的保护范围内。本研究采用腹腔注射LPS的方法构建LPS诱导的BALB/c小鼠脓毒症、内毒素血症模型,研究EGCG预处理脓毒症小鼠外周血中的CD14、肺组织中TLR4、CD14-TLR4复合物,发现CD14-TLR4显著被抑制,脓毒症小鼠的血管内皮细胞钙超载被显著逆转,从而证明EGCG能特异性阻断CD14-TLR4信号,及SOCE信号,逆转LPS介导的内毒素血症、钙超载及脓毒症,并改善脓毒症小鼠的预后。(一)实验材料:1、构建LPS诱导小鼠脓毒症模型:采用LPS腹腔注射的方法构建内毒素血症、急性肺损伤的脓毒症模型。2、表没食子儿茶素EGCG,浓度100uM/只,具有抗氧化、抗炎症和调节免疫功能。3、CD14、TLR4等抗体、钙离子荧光探针,钙成像仪等。4、商品化的TLR4(-/-)基因敲除小鼠。(二)实验原理:1、LPS诱导小鼠脓毒症模型建立:采用LPS腹腔注射的方法(LPS10mg/kg),构建小鼠脓毒症模型,LPS一次性注射后正常饲养,检测外周血中LPS浓度,以及小鼠肺组织中的炎症反应,观察小鼠的死亡率应达到90%以上。2、EGCG对CD14、TLR4、SOCE的抑制研究:观察EGCG预处理脓毒症小鼠外周血中CD14、TLR4的水平,以及CD14-TLR4复合物的水平,以及巨噬细胞钙离子内流情况。TLR4(-/-)组小鼠平行进行研究作为TLR4正常表达小鼠的对照。3、EGCG对脓毒症小鼠肺损伤的抑制研究:运用RT-PCR、Westernblot、ELISA法检测EGCG处理过的脓毒症小鼠肺组织中TLR4、NFkB、IL-6及TNF的表达情况。4、EGCG对对脓毒症小鼠的生存率的影响:BALB/c小鼠给予EGCG灌胃(100uM/只),连续灌胃3天后,LPS腹腔注射法制作小鼠脓毒症模型,观察5天,记录小鼠死亡情况,计算生存率。(三)研究结果:1、EGCG预处理的脓毒症小鼠外周血CD14、TLR4被显著抑制:与正常对照组比较,EGCG连续灌胃组,给予EGCG药物3天后,LPS腹腔注射制备脓毒症模型,外周血中CD14的水平,以及CD14-TLR4复合物水平显著降低,如表1所示EGCG抑制外周血中CD14的水平和表2所示EGCG下调CD14-TLR本文档来自技高网
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【技术保护点】
EGCG在制备对抗脓毒症细菌内毒素靶向药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.EGCG在制备对抗脓毒症细菌内毒素靶向药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述脓毒症可以为重症脓毒症、脓毒症休克。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述EGCG特异性作用于CD14-TLR4受体复合物。
4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述EGCG加入其它治疗脓毒症的药物中,起到靶向作用,所述其它治疗药物为抗感染类药物或重组人活化蛋白C,所述抗感染类药物为抗生素类、抗真菌...

【专利技术属性】
技术研发人员:孙荣距肖建国陈威黎檀实张文涛
申请(专利权)人:孙荣距
类型:发明
国别省市:北京;11

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