改进抗体稳定性的方法技术
Method for improving antibody stability
This paper reports the method for selecting or eliminating antibodies including: a) for each antibody in Fv region Asp and Asn residues, using homology model set, determine the C alpha atom conformational flexibility, b) for each antibody in Fv region Asp and Asn residues, determination of amino acid residues of the Asp or Asn the size of the terminal residues C-, C and C) which is non atomic alpha antibody conformational flexibility and / or the Asp or Asn with C- terminal amino acid residues of C, or eliminate the alpha atoms with moderate to high degree of conformational flexibility and / or the Asp or Asn with C- terminal amino acid residues small antibody.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本文报道了改进抗体稳定性的方法，其中根据基于结构的方法，识别和去除抗体氨基酸序列中的天冬酰胺和天冬氨酸降解位点。
技术介绍
单克隆抗体和基于抗体结构域的分子组成临床研究中的主要蛋白质治疗剂(1，2)。单克隆抗体在多种范围的治疗适应症中是有效的，并且容易生产。抗体特异性主要由位于可变结构域中的CDR的序列决定。选择临床候选物的方法开始于筛选大量单克隆抗体的功能性质。筛选后，对高达数百个分子进行详细的体外性质分析，以识别满足所有所需功能标准且还显示化学和生物物理稳定性的单克隆抗体。因此，必须识别和剔除具有可能影响单克隆抗体的结构和生物学功能的不稳定性问题的单克隆抗体，以避免制造和贮存过程中以及应用后在体内的不想要的降解。在蛋白质中发生的一种降解反应是天冬酰胺(Asn)(3)和天冬氨酸(Asp)残基(4，5)的化学降解。这些反应可通过适当的制剂条件控制(6-9)。如果Asn和Asp残基参与抗原识别，它们的化学改变可导致抗体效力的降低(10-14)。已经提出了，主要是在肽中(52，53，57-59)，但也有在蛋白质环境中(7，10，35，60)，可能影响Asn和Asp残基降解倾向的多个参数，例如一级序列(3，5，16，33，40，51-56)、溶剂的介电常数、温度和pH。早在上世纪80年代，一些结构上的要求被提议是蛋白质脱酰胺的主要决定因素(5，61)，后来其被证实和扩展(34，37，38，40，46，51，62...
【技术保护点】
一种选择具有降解稳定性的抗体的方法，其包括以下步骤：a)使用同源物模型集合，针对抗体Fv区中每个Asp和Asn残基，确定Cα原子的构象柔性，b)针对抗体Fv区中每个Asp和Asn残基，确定该Asp或Asn残基C‑端的氨基酸残基的大小，c)选择其中Cα原子是非构象柔性的且Asp或Asn具有大的C‑端氨基酸残基的抗体。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.09.06 EP 13183389.9;2013.09.12 EP 13184174.41.一种选择具有降解稳定性的抗体的方法，其包括以下步骤：
a)使用同源物模型集合，针对抗体Fv区中每个Asp和Asn残基，确
定Cα原子的构象柔性，
b)针对抗体Fv区中每个Asp和Asn残基，确定该Asp或Asn残基
C-端的氨基酸残基的大小，
c)选择其中Cα原子是非构象柔性的且Asp或Asn具有大的C-端氨
基酸残基的抗体。
2.一种识别易于发生天冬酰胺(Asn)降解的抗体的方法，其包括以
下步骤：
a)使用同源物模型集合，针对抗体Fv区中每个Asn残基，确定Cα原子的构象柔性，
b)针对抗体Fv区中具有小的C-端氨基酸残基的每个Asn残基，确
定主链二面角phi，
c)针对抗体Fv区中具有小的C-端氨基酸残基且主链二面角phi大于
-75.2度的每个Asn残基，确定溶剂暴露以及Asn残基N-端二级结构改变
的出现和出现的该改变距该Asn残基的氨基酸残基距离，和
d)如果
i)Asn残基在CDR环1中，其Cα原子是构象柔性的，且C-端氨基
酸残基是Asp，Pro，Thr或Asn，
ii)Asn残基的Cα原子是构象柔性的，具有小于-75.2度的主链二面角
phi，且Asn残基的C-端氨基酸残基是小的，或
iii)Asn残基的Cα原子是构象柔性的，具有大于-75.2度的主链二面
角phi，具有高度溶剂暴露，且氨基端的二级结构改变距Asn残基超过3
个氨基酸残基出现，
则识别易于发生天冬酰胺(Asn)降解的抗体。
3.选择一个或多个具有改进的天冬酰胺(Asn)稳定性的抗体的方法，
其包括以下步骤：
a)提供两个或更多个抗体，
b)使用同源物模型集合，针对每个抗体Fv区中每个Asn残基，确定
Cα原子的构象柔性，
c)针对每个抗体Fv区中具有小的C-端氨基酸残基的每个Asn残基，
确定主链二面角phi，
d)针对每个抗体Fv区中具有小的C-端氨基酸残基且主链二面角phi
大于-75.2度的每个Asn残基，确定溶剂暴露以及Asn残基N-端二级结构
改变的出现和出现的该改变距该Asn残基的氨基酸残基距离，和
e)从该两个或更多个抗体中除去至少具有以下之一的那些抗体：
i)Asn残基，其在CDR环1中、具有构象柔性的Cα原子，且具有
Asp，Pro，Thr或Asn作为C-端氨基酸残基，
ii)Asn残基，其具有构象柔性的Cα原子、小于-75.2度的主链二面角
phi，且具有小的C-端氨基酸残基，或
iii)Asn残基，其具有构象柔性的Cα原子，具有大于-75.2度的主链
二面角phi，具有高度溶剂暴露，且氨基端的二级结构改变距Asn残基超
过3个氨基酸残基出现，
由此选择一个或多个具有改进的天冬酰胺(Asn)稳定性的抗体。
4.一种识别易于发生天冬氨酸(Asp)降解的抗体的方法，其包括以
下步骤：
a)针对抗体Fv区中每个Asp残基，使用同源物模型集合，确定Cα原子的构象柔性，
b)针对抗体Fv区中每个A...
【专利技术属性】
技术研发人员：H·克腾伯格，S·克洛斯特曼，F·利普斯梅尔，A·帕帕季米特里乌，J·赛多安德森，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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