The invention discloses a mesenchymal stem cells extracted from irrigation culture system, including the extraction device and perfusion culture system, the extraction device including bone cutting device, a reaction tank, a filtering device, a filtrate collection device and density gradient centrifugation device, the irrigation training system through the use of defined system. And provide nutrients and add specific small molecule compounds related to, maintain the differentiation potential of cells, so that bone marrow mesenchymal stem cells have the potential of multi-directional differentiation, low immunogenicity, easy amplification, fast, stable characteristics of genetic background, so it has broad application prospects in tissue engineering and cell and gene therapy. The use of bone marrow mesenchymal stem cells in the culture medium, which is convenient for the basic research, has a promising prospect for clinical application.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医用机械
,尤其涉及一种间充质干细胞提取灌溉培养系统。
技术介绍
干细胞是指具有自我更新和多向分化潜能的原始细胞,是机体的起源细胞,在特定的条件下可分化成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞。间充质干细胞(MesenchymalStemCell,MSC)是干细胞的一种,因为能分化为间质组织而得名,具有亚全能分化潜能,在特定的体内外环境下,能够诱导分化成为多种组织细胞。干细胞以间充质干细胞为代表的治疗用细胞培养制备方法,传统上是将干细胞提取后接种于培养瓶,置于37℃、饱和湿度、5%CO2培养箱中进行静态非连续工业培养。但是这种传统细胞培养工艺制备干细胞存在以下弊端:1)静态非连续工业培养往往因为营养消耗而不足,细胞代谢废物无法排除,因此造成代谢产物累积,逐渐增加细胞毒性等缺陷,因此导致细胞生长缓慢,最高生长速率和最终细胞浓度有限的问题;2)不能有效地模拟体内的循环动态过程和保持细胞恒定生长活力,使对微环境敏感而又处于变化中的“动态”干细胞不能被高质量地扩增制备;3)培养周期受到限制,总体细胞承载数量有限,难于进行工程放大;4)整体监控能力有限,缺少对正常生长细胞量、分化或未分化态细胞比例等有效的在线或离线监控。因此,利用连续灌流反应器结合有效的监控方式能将传统细胞培养方式进行全新改进,快速、高效、连续地扩增以干细胞为首选的治疗用细胞。综上所述,研究并开发可机械自动化且标准可控的干细胞提取且连续灌流培养系统成为当下热点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种间充质干细胞提取灌溉培养系统,旨在提供一种用于实验室或医疗机构、细胞制备应用工业 ...
【技术保护点】
一种间充质干细胞提取灌溉培养系统,包括提取装置和灌流培养系统,提取装置与灌流培养系统密封无菌相连,其特征在于,所述的提取装置包括骨髓切割装置、反应池、过滤装置、滤液收集装置和密度梯度离心装置,所述骨髓切割装置包括切割部件和连接部件,所述切割部件由切刀部件和底座组成,连接部件为一升降臂;所述连接部件连接所述底座和所述切刀部件;所述的切刀部件由纵横排列的横刀和纵刀组成;所述的底座设有与所述横刀和纵刀对应的纵向和横向排列的凹槽;所述连接部件与一双开关电控装置连接,电动控制所述连接部件上下伸缩;所述反应池通过传送装置与骨髓切割装置相连,切割后的骨髓碎块直接进入反应池与酶反应液反应;所述过滤装置为金属过滤网与反应池相连;所述滤液收集装置与过滤装置相连;所述滤液收集装置与密度梯度离心装置相连;灌流培养系统是直接使用该骨髓间充质干细胞培养液培养原代细胞,可高效促进细胞的贴壁,存活和增值;然后在后续传代过程中,不使用血清进行细胞培养,使用骨髓间充质干细胞完全培养液,完全培养液通过添加成分明确的血清替代物,一系列营养物质和小分子,维持骨髓间充质干细胞在体外培养的细胞活力,纯度和均匀的生物特性;在细胞汇合 ...
【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞提取灌溉培养系统,包括提取装置和灌流培养系统,提取装置与灌流培养系统密封无菌相连,其特征在于,所述的提取装置包括骨髓切割装置、反应池、过滤装置、滤液收集装置和密度梯度离心装置,所述骨髓切割装置包括切割部件和连接部件,所述切割部件由切刀部件和底座组成,连接部件为一升降臂;所述连接部件连接所述底座和所述切刀部件;所述的切刀部件由纵横排列的横刀和纵刀组成;所述的底座设有与所述横刀和纵刀对应的纵向和横向排列的凹槽;所述连接部件与一双开关电控装置连接,电动控制所述连接部件上下伸缩;所述反应池通过传送装置与骨髓切割装置相连,切割后的骨髓碎块直接进入反应池与酶反应液反应;所述过滤装置为金属过滤网与反应池相连;所述滤液收集装置与过滤装置相连;所述滤液收集装置与密度梯度离心装置相连;灌流培养系统是直接使用该骨髓间充质干细胞培养液培养原代细胞,可高效促进细胞的贴壁,存活和增值;然后在后续传代过程中,不使用血清进行细胞培养,使用骨髓间充质干细胞完全培养液,完全培养液通过添加成分明确的血清替代物,一系列营养物质和小分子,维持骨髓间充质干细胞在体外培养的细胞活力,纯度和均匀的生物特性;在细胞汇合度达到90%以前,完全培养液每隔一天换液;超过90%以上,进行细胞传代,满足干细胞的营养需求,维持和控制骨髓间充质干细胞形态稳定,维持细胞多向分化的潜能,纯度高、活力强、生物特性均匀;对获得的细胞进行周期检测;特征分子表达量检测;细胞成骨,成脂和成软骨的分化和鉴定;最终肯定培养所得的树鼩骨髓间充质干细胞可长期传代,并仍然维持较高纯度的间充质干细胞,具有较好的多向分化潜能。2.如权利要求1所述的间充质干细胞提取灌溉培养系统,其特征在于间充质干细胞完全培养液的成分包括:100U/ml青霉素(Sigma)+100μg/ml链霉素(Sigma)+低糖DMDM培养基(Gibco)+15%血清替代物KSR(Gibco)+10mM非必需氨基酸NEAA(Gibco)+10mMbeta巯基乙醇+5ng/mlbFGF+15ng/mlEGF+3μMCHIR99021;其中:上述配方中,100U/ml青霉素(Sigma)+100μg/ml链霉素(Sigma)+低糖DMDM培养基(Gibco)为基础成分;其余为添加成分;以上培养液,可以2-8℃储存1个月。3.如权利要求1所述的间充质干细胞提取灌溉培养系统,其特征在于,其特征在于对获得的细胞进行周期检测;细胞在第4代,第8代,第12代,第20代消化后收集到1.5ml离心管中,每个代次收集细胞5x106以上,加入70%的酒精4℃过夜固定后,用PBS洗涤除去酒精,在PI溶液里(PI0.05mg/ml)重悬细胞,避光4℃孵育30分钟以上,通过流式细胞仪进行细胞周期检测。4.如权利要求1所述的间充质干...
【专利技术属性】
技术研发人员:朱平,郭惠明,庄建,陈寄梅,刘菁,赵明一,朱烁基,刘兰波,陈瑞平,朱小兰,吴志超,罗玲,杨斌,林骏,黄俊刚,
申请(专利权)人:广东省心血管病研究所,广东省人民医院,
类型:发明
国别省市:广东;44
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