The present invention relates to a method of training can improve the content of flavonoids of Glycyrrhiza glabra callus cells, characterized by the following steps: 1) select full of Glycyrrhiza glabra seed culture of aseptic seedlings based on MS containing 30g/L sucrose 7g/L agar medium access, callus induction medium, after to subculture the subculture; 2) selected in step 1) obtained the subculture after light yellow callus transferred to liquid culture suspension culture medium; 3) in step 2) the suspension callus culture in the process of induction, subculture from day 6~12 the beginning of the cycle, the cultivation temperature increased from 25oC to 35~45oC, cultured for 1~3 days, to restore the culture temperature to 25oC; in 35~45oC culture, adding coronatine; recovery to 25oC after addition of hydroxyl At the end of suspension culture, the callus cells of Glycyrrhiza glabra l.. Beneficial effects: high content of flavonoids.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
,特别涉及一种可提高甘草黄酮含量的光果甘草愈伤组织细胞培养方法。技术背景光果甘草主要分布于新疆北部、青海、甘肃等省区,主要化学成分为黄酮类化合物和三萜皂苷,其中,甘草黄酮类化合物具有多种生物活性,除了消炎、抗菌等作用外,在抗氧化、抗癌、防癌等方面也有显著的生物活性,在医药、食品保健、化妆品行业中有广泛的应用前景。随着对光果甘草开发利用的不断深入,其需求量猛增。由于世界90%的甘草原料均由我国出口提供,因此,我国大部分地区野生甘草受到了毁灭性的采挖,有的地区甚至濒临枯竭。野生资源的匮乏与甘草需求量增长的矛盾日益突出,成为亟待解决的问题。为解决野生资源的匮乏与甘草需求量增长的矛盾,可从两方面着手:一是利用组织培养技术,对光果甘草进行无性快速繁殖,并采用细胞工程或基因工程的手段改良其品质,扩大优良品种种植面积;二是通过细胞大规模培养来生产甘草的有效成分——甘草黄酮。但是,光果甘草至少需要生长3年才能入药,也就是说,若采取第一种方案,在相当长的时期内,光果甘草仍不能满足市场需求。因此,通过细胞大规模培养来生产甘草黄酮迫在眉睫。在上述背景下,近年来,许多学者都已经将研究目光转向于利用光果甘草干细胞培养,以获得高产量的甘草黄酮。此法不仅可大大加快植物细胞的生长,提高目标物质的含量,并且不受地理、季节和气候条件的限制,能节省野生植物和土地资源,具有生长周期短,经济效益显著等优点。但甘草愈伤组织诱导培养过程中易出现褐化,难以获得稳定细胞系,另外,对甘草愈伤组织增加次生代谢产物甘草黄酮的研究尚处起步阶段。文献表明,愈伤组织悬浮扩大培养的过程中 ...
【技术保护点】
可提高甘草黄酮含量的光果甘草愈伤组织细胞培养方法,其特征在于采用以下步骤:1)光果甘草愈伤组织的诱导与继代培养:挑选饱满的光果甘草种子,在含有30g/L蔗糖、7g/L琼脂的MS基础培养基上培养得到无菌苗;取无菌苗胚轴为外植体,接入愈伤组织诱导培养基中黑暗培养10天,诱导出愈伤组织,之后在光照强度为1500 lx的条件下继续培养14天,每日光照12h;然后将愈伤组织转入继代培养基中,每28天继代一次,继代培养2次,以获得稳定的光果甘草愈伤组织,继代培养温度25oC,继代培养基pH 5.8;所述愈伤组织诱导培养基为含有1~2mg/L萘乙酸、0.1~0.5mg/L 6‑苄氨基嘌呤、20~30g/L蔗糖、5~8g/L琼脂的MS基础培养基;所述继代培养基由愈伤组织诱导培养基中添加甲硫氨酸而成,甲硫氨酸在继代培养基中的浓度为0.1~1.0 mmol/L;2)愈伤组织悬浮振荡培养:选取步骤1)中生长旺盛、质地松散的淡黄色愈伤组织,转移至液体培养基中悬浮振荡培养,接种量40~100g/L,g/L=愈伤组织鲜重/液体培养基体积,摇床转速60~150 rpm,光照强度1500~2000 lx,光照时间8~ ...
【技术特征摘要】
1.可提高甘草黄酮含量的光果甘草愈伤组织细胞培养方法,其特征在于采用以下步骤:1)光果甘草愈伤组织的诱导与继代培养:挑选饱满的光果甘草种子,在含有30g/L蔗糖、7g/L琼脂的MS基础培养基上培养得到无菌苗;取无菌苗胚轴为外植体,接入愈伤组织诱导培养基中黑暗培养10天,诱导出愈伤组织,之后在光照强度为1500lx的条件下继续培养14天,每日光照12h;然后将愈伤组织转入继代培养基中,每28天继代一次,继代培养2次,以获得稳定的光果甘草愈伤组织,继代培养温度25oC,继代培养基pH5.8;所述愈伤组织诱导培养基为含有1~2mg/L萘乙酸、0.1~0.5mg/L6-苄氨基嘌呤、20~30g/L蔗糖、5~8g/L琼脂的MS基础培养基;所述继代培养基由愈伤组织诱导培养基中添加甲硫氨酸而成,甲硫氨酸在继代培养基中的浓度为0.1~1.0mmol/L;2)愈伤组织悬浮振荡培养:选取步骤1)中生长旺盛、质地松散的淡黄色愈伤组织,转移至液体培养基中悬浮振荡培养,接种量40~100g/L,g/L=愈伤组织鲜重/液体培养基体积,摇床转速60~150rpm,光...
【专利技术属性】
技术研发人员:黄洁芳,张金龙,孙晓昂,镇晓华,吴依娜,邱玉想,蒋丽刚,
申请(专利权)人:珀莱雅化妆品股份有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江;33
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