皮肤色素沉着动物模型的构建方法技术

本发明专利技术涉及动物模型的构建方法技术领域，是一种皮肤色素沉着动物模型的构建方法；第一步，选取受试豚鼠；第二步，剃除长毛和脱去短毛；第三步，用紫外线照射后得到皮肤色素沉着动物模型。本发明专利技术选择紫外线辐射棕色受试豚鼠背部皮肤，以皮肤黑色素和黑素细胞的变化情况为指标，确定最佳辐照剂量和辐照时间建立皮肤色素沉着动物模型，本发明专利技术不会灼烧皮肤，皮肤不会出现红斑、蜕皮、红肿和水泡，便于镜下观察和仪器检测，通过外观评价、组织病理学观察和考察肉苁蓉苯乙醇苷纳米乳抗色素沉着作用，本发明专利技术较现有技术更能较真实的模拟皮肤色素沉着后人皮肤的生理状况，为抗色素沉着新药、新制剂及美白防晒化妆品的研究提供参考。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及动物模型的构建方法
，是一种皮肤色素沉着动物模型的构建方法。
技术介绍
人体皮肤中含有多种色素，如黄色素、褐色素和黑色素等，这些色素一般统称“黑色素”。皮肤的颜色受很多因素的影响，其中，黑色素在皮肤真皮层中的分布对皮肤的颜色起决定性作用。正常黑色素的合成和沉着，具有保护皮肤、抵御紫外线辐射和防止机体内部组织过热等功效。而任一环节的缺陷或受某一因素的影响将会引起黑色素合成或运输过程的紊乱，产生皮肤黑色素沉着过多、过少或缺乏等异常改变，从而导致一系列皮肤色素沉着疾病的发生。此类疾病易诊难治，给患者的身体和心理带来巨大的痛苦和伤害。黑色素的产生可由许多外部和内部活动引发。例如，当皮肤经受紫外线辐射时，黑素细胞产生额外的黑色素。然后黑色素经由黑素体传送至角质细胞，其随后在皮肤上留下“晒黑”的外观。正常的紫外线照射可促进黑素细胞黑色素合成的增多，黑色素能够吸收一定量的紫外线，避免或减少机体染色体受损，但是过量的紫外线照射会损伤机体细胞，导致皮肤色素沉着疾病的发生，并可能诱发皮肤癌。对疾病和药物的研究离不开好的实验模型，目前皮肤色素沉着疾病的动物或细胞模型多利用紫外线辐射建立模型，但对紫外线的波段选择和辐照剂量无统一的标准。太阳光紫外线波段主要分为四个部分：400nm至320nm为长波紫外线(UVA波段)、320nm至280nm为中波紫外线(UVB波段)、280nm至200nm为短波紫外线(UVC波段)、200nm至100nm为真空紫外线(UVD波段)，UVC经过大气层时，几乎全部被臭氧层吸收，所以只有UVA和UVB会对人体产生生物学效应。UVA对皮肤的作用持久而缓慢，是导致皮肤提前衰老的主要原因；UVB则主要损害皮肤表皮层及真皮浅层，对人体的生理作用较强，造成皮肤脱皮、红斑、粗糙、皱纹和色素沉着等(Peng,L.h.,etal.Phytomedicine,2013,20:1082-1087.)。现有紫外线诱导色素沉着的动物模型在建模过程中，多采用大于最小红斑剂量的紫外线在短期内连续照射，皮肤易出现红斑、蜕皮等皮肤损伤，而人体的自然晒黑过程通常不伴有肉眼可见的皮肤损伤。这种外在因素导致的损伤对模型建立本身极易产生不利影响，不便于镜下观察、仪器检测以确定建模条件；同时，也不利于后期药物或制剂的干预，已不能满足现有建模要求。
技术实现思路
本专利技术提供了一种皮肤色素沉着动物模型的构建方法，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决现有紫外线诱导色素沉着的动物模型在建模过程中，皮肤易出现红斑、蜕皮等皮肤损伤，不便于镜下观察和仪器检测以确定建模条件，已不能满足现有建模要求的问题。本专利技术的技术方案是通过以下措施来实现的：一种皮肤色素沉着动物模型的构建方法，按下述步骤进行：第一步，选取受试豚鼠；第二步，剃除受试豚鼠的背部长毛，然后用脱毛膏脱去短毛，使受试豚鼠背部的皮肤充分裸露；第三步，用紫外线正对受试豚鼠的裸露皮肤隔日照射1次，照射2次至10次，每次照射能量为50mJ·cm-2至500mJ·cm-2，照射后得到皮肤色素沉着动物模型。下面是对上述专利技术技术方案的进一步优化或/和改进：上述受试豚鼠为棕黄色豚鼠。上述紫外线的波长为280nm至400nm。上述紫外线照射时，紫外线发射端距受试豚鼠的裸露皮肤2cm至20cm。本专利技术选择紫外线辐射棕色受试豚鼠背部皮肤，以皮肤黑色素和黑素细胞的变化情况为指标，确定最佳辐照剂量和辐照时间建立皮肤色素沉着动物模型，本专利技术皮肤色素沉着动物模型的构建方法不会灼烧皮肤，皮肤不会出现红斑、蜕皮、红肿和水泡，便于镜下观察和仪器检测，通过外观评价、组织病理学观察和考察肉苁蓉苯乙醇苷纳米乳抗色素沉着作用，本专利技术构建的皮肤色素沉着动物模型较现有技术更能较真实的模拟皮肤色素沉着后人皮肤的生理状况，为抗色素沉着新药、新制剂及美白防晒化妆品的研究提供参考。附图说明附图1(a)为空白对照组(A组)的豚鼠表皮色素沉着外观图。附图1(b)为模型组(B组)的豚鼠表皮色素沉着外观图。附图1(c)为给药组(E组)给药后的豚鼠表皮色素沉着外观图。附图2(a)为空白对照组(A组)的豚鼠皮肤激光共聚焦扫描显微镜图。附图2(b)为模型组(B组)的豚鼠皮肤激光共聚焦扫描显微镜图。附图2(c)为给药组(E组)给药后的豚鼠皮肤激光共聚焦扫描显微镜图。附图3(a)为空白对照组(A组)的豚鼠皮肤组织学改变图。附图3(b)为模型组(B组)的豚鼠皮肤组织学改变图。附图3(c)为给药组(E组)给药后的豚鼠皮肤组织学改变图。附图4(a)为空白对照组(A组)的豚鼠表皮黑色素分布情况图。附图4(b)为模型组(B组)的豚鼠表皮黑色素分布情况图。附图4(c)为给药组(E组)给药后的豚鼠表皮黑色素分布情况图。附图5(a)为空白对照组(A组)的豚鼠表皮黑素细胞增殖情况图。附图5(b)为模型组(B组)的豚鼠表皮黑素细胞增殖情况图。附图5(c)为给药组(E组)给药后的豚鼠表皮黑素细胞增殖情况图。具体实施方式本专利技术不受下述实施例的限制，可根据本专利技术的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。实施例1，该皮肤色素沉着动物模型的构建方法，按下述步骤进行：第一步，选取受试豚鼠；第二步，剃除受试豚鼠的背部长毛，然后用脱毛膏脱去短毛，使受试豚鼠背部的皮肤充分裸露；第三步，用紫外线正对受试豚鼠的裸露皮肤隔日照射1次，照射2次至10次，每次照射能量为50mJ·cm-2至500mJ·cm-2，照射后得到皮肤色素沉着动物模型。紫外线照射时可用紫外线光疗仪进行照射；背部皮肤耐受性较其它部位好，且光滑平整易于涂抹给药。隔日照射1次，照射2次至10次，每次照射能量为50mJ·cm-2至500mJ·cm-2，条件温和，照射能量范围适宜皮肤耐受；隔日一次是为了防止长时间连续照射对模型动物造成的附带损伤；照射次数太少无法达到模型应用的效果，照射次数过多会灼烧模型动物皮肤，局部会产生红肿、水泡，直接影响模型建立。实施例2，该皮肤色素沉着动物模型的构建方法，按下述步骤进行：第一步，选取受试豚鼠；第二步，剃除受试豚鼠的背部长毛，然后用脱毛膏脱去短毛，使受试豚鼠背部的皮肤充分裸露；第三步，用紫外线正对受试豚鼠的裸露皮肤隔日照射1次，照射2次或10次，每次照射能量为50mJ·cm-2或500mJ·cm-2，照射后得到皮肤色素沉着动物模型。实施例3，作为上述实施例的优化，受试豚鼠为棕黄色豚鼠。由于棕黄色豚鼠体内黑素细胞、黑素小体在毛囊、表皮的分布类似于人体(尤其是亚洲人)中的分布，其作为致黑模型载体能较真实的反应色素沉着后皮肤状况，应用最为广泛。实施例4，作为上述实施例的优化，紫外线的波长为280nm至400nm。本专利技术采用小剂量多次重复紫外线照射致黑动物模型，选用以上波段紫外线，较真实的模拟实际情况，既可减少红斑水疱的发生，又能够形成稳定均匀的色素沉着，从而便于实验中观察和数据记录。实施例5，作为上述实施例的优化，紫外线照射时，紫外线发射端距受试豚鼠的裸露皮肤2cm至20cm。紫外线照射时可用紫外线光疗仪进行照射，紫外线光疗仪距受试豚鼠的裸露皮肤2cm至20cm。由于紫外线过量辐照会使皮肤局部温度升高，产生红肿、水泡等现象，不利于模型建立。所以照射距离的设置显得尤为重要，距离太近易造成损伤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种皮肤色素沉着动物模型的构建方法，其特征在于按下述步骤进行：第一步，选取受试豚鼠；第二步，剃除受试豚鼠的背部长毛，然后用脱毛膏脱去短毛，使受试豚鼠背部的皮肤充分裸露；第三步，用紫外线正对受试豚鼠的裸露皮肤隔日照射1次，照射2次至10次，每次照射能量为50mJ·cm‑2至500mJ·cm‑2，照射后得到皮肤色素沉着动物模型。

【技术特征摘要】
1.一种皮肤色素沉着动物模型的构建方法，其特征在于按下述步骤进行：第一步，选取受试豚鼠；第二步，剃除受试豚鼠的背部长毛，然后用脱毛膏脱去短毛，使受试豚鼠背部的皮肤充分裸露；第三步，用紫外线正对受试豚鼠的裸露皮肤隔日照射1次，照射2次至10次，每次照射能量为50mJ·cm-2至500mJ·cm-2，照射后得到皮肤色素沉着动物模型。2.根据权利要求1所述的皮肤色素沉着动物模型的构建方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨建华，胡君萍，许欢欢，居博伟，吴姗姗，朱丹丹，曹丹丹，向雪滢，俞婧，
申请(专利权)人：新疆医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：新疆;65