一种苎麻高效脱胶菌株长期保存及活化方法技术

本发明专利技术公开了一种苎麻高效脱胶菌株长期保存方法及活化方法，挑取纯化典型单菌落菌苔划线于试管斜面固体营养琼脂培养基，于35℃恒温培养箱培养20h；套入大试管，塞上橡胶空心玻璃管，在大试管与橡胶交界处涂石蜡，真空泵抽真空后，用酒精喷灯烧结空心玻璃管封存；采用该方法保存10年的苎麻高效脱胶菌株经活化处理后，测试活菌量可达到1.02×109cfu/ml以上，活化态菌液接种到苎麻进行浸泡发酵10.5h后，苎麻纤维完全分散，质量减少27％以上，实现苎麻的高效脱胶，本发明专利技术贮存菌种需要空间少、保存时间长，菌种存活期超过10年；一次接种，10年以上可不用转代，容易活化，性能稳定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及农业技术和生物
，具体是一种苎麻高效脱胶菌株长期保存及活化方法。
技术介绍
现有技术中，不少企业采用酶制剂进行苎麻脱胶操作，其工艺流程为：扎把-装笼-酶练-沤麻-洗麻-碱煮-拷麻-漂洗-给油-脱油水-抖麻-烘麻；其采用的是生物-化学联合脱胶工艺，这种工艺相对于采用酸碱预浸的化学脱胶工艺而言，大大降低了酸碱废水的产生和原料成本；脱胶菌株的脱胶酶活力不高或者分泌的酶系不全会使得苎麻经微生物脱胶后仍不能达到纺织生产对苎麻纤维的要求，因此对于脱胶菌株的保存尤为重要。菌种保存是微生物学中的一项重要基础工作。由于微生物菌种具有容易变异的特性，长期使用以及过多次数的转代，都会导致其活力降低；为了使菌种尽可能的不衰退，能保持其原有的纯度和优良性状，以利于生产和科研等方面应用，必须对菌种进行保存；菌种保存的方法很多，主要有：转接斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、甘油培养物保藏法、半固体穿刺保藏法、沙土管保藏法、液氮超低温保藏法、超低温甘油冷冻法和真空冷冻干燥保藏法等，有些方法虽能长期保存，但所需设备较多，操作复杂；有些方法尽管比较简单，但保存时间较短，频繁转代容易变异，基于上述原因，需要探究一种保存时间长、性状稳定、操作简单、不需较多设备，且能长期保存高效脱胶菌株的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种保存时间长、性状稳定、操作简单、不需较多设备，采用斜面抽真空保存法进行苎麻高效脱胶菌株长期保存及活化方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种苎麻高效脱胶菌株长期保存及活化方法，采用斜面抽真空保存法进行苎麻高效脱胶菌株长期保存，包括以下步骤：1)挑取纯化典型单菌落菌苔划线于试管斜面固体培养基，于35℃恒温培养箱培养20h；2)套入大试管，塞上橡胶空心玻璃管，在大试管与橡胶交界处涂石蜡，真空泵抽真空后，用酒精喷灯烧结空心玻璃管封存；所述活化方法为：1)制备活化态菌液，取斜面抽真空法保存10年菌株菌苔1环、斜面抽真空法保存3年菌株菌苔1环分别加入5ml活化培养基中，于35℃条件下培养10h后得到菌液，取1ml菌液稀释涂布于平板，35℃条件下培养20h，取活化态典型单菌落接入6ml活化培养基中，混匀，35℃条件下培养6h后，倒入至100ml扩大培养基中，于35℃温度条件、180r/min转速下培养6h，按2％的接种量转接至200ml扩大培养基中，于35℃条件下培养6h，得到活化态菌液。作为本专利技术进一步的方案：所述固体培养基为营养琼脂培养基。作为本专利技术再进一步的方案：所述活化培养基由以下按照质量百分数的原料制成：牛肉浸膏0.5％、葡萄糖0.5％、蛋白胨0.5％、氯化钠0.5％、自来水98％；活化培养基制备完成后保持自然pH值，灭菌后备用；扩大培养基由以下按照质量百分数的原料制成：豆饼粉2％、K2HPO40.05％、NH4H2PO40.1％、MgSO4·7H2O0.1％、自来水97.75％，扩大培养基制备完成后保持自然pH值，灭菌后备用。作为本专利技术再进一步的方案：所述苎麻高效脱胶菌株经活化处理后，经接种和脱胶进行活性测试，具体方法为取300ml自来水放入锥形瓶中，预热至35℃，接着向锥形瓶中放入6ml活化态菌液，混匀后投入30g剪切为3cm长度的苎麻段，置于振荡器中于35℃温度条件、180r/min转速下发酵。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术采用斜面抽真空保存法进行苎麻高效脱胶菌株长期保存，保存时间长、性状稳定、操作简单、不需较多设备，贮存菌种需要空间少，便于管理；保存时间长，菌种存活期超过10年；一次接种，10年以上可不用转代，容易活化，性能稳定，操作简单；通过活化测试试验可得，经斜面抽真空保存法保存10年的苎麻高效脱胶菌株经活化处理，在加入活化培养基活化培养10h后，取样涂片、染色、镜检，显微照片中观测到染色较深的杆状菌体，检测活化态菌液接种到苎麻进行浸泡发酵10.5h后的活菌量，达到1.02×109cfu/ml以上；浸泡发酵10.5h后苎麻纤维完全分散，质量减少27％以上，实现苎麻的高效脱胶，表明菌株活性保存完好，证明本专利技术的保存方法具有极大的推广利用价值。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术实施例中，一种苎麻高效脱胶菌株长期保存方法，挑取纯化典型单菌落菌苔划线于试管斜面固体培养基，于35℃恒温培养箱培养20h，套入大试管，塞上橡胶空心玻璃管，在大试管与橡胶交界处涂石蜡，真空泵抽真空后，用酒精喷灯烧结空心玻璃管封存；所述活化培养基由以下按照质量百分数的原料制成：牛肉浸膏0.5％、葡萄糖0.5％、蛋白胨0.5％、氯化钠0.5％、自来水98％；活化培养基制备完成后保持自然pH值，灭菌后备用；扩大培养基由以下按照质量百分数的原料制成：豆饼粉2％、K2HPO40.05％、NH4H2PO40.1％、MgSO4·7H2O0.1％、自来水97.75％，扩大培养基制备完成后保持自然pH值，灭菌后备用。采用上述保存方法保存的苎麻高效脱胶菌株活化效率实验如下：1)制备活化态菌液取斜面抽真空法保存10年菌株菌苔1环、斜面抽真空法保存3年菌株菌苔1环分别加入5ml活化培养基中，于35℃条件下培养10h后得到菌液，取1ml菌液稀释涂布于平板，35℃条件下培养20h，取活化态典型单菌落接入6ml活化培养基中，混匀，35℃条件下培养6h后，倒入至100ml扩大培养基中，于35℃温度条件、180r/min转速下培养6h，按2％的接种量转接至200ml扩大培养基中，于35℃条件下培养6h，得到活化态菌液；2)接种与脱胶取300ml自来水放入锥形瓶中，预热至35℃，接着向锥形瓶中放入6ml步骤1)中制备的活化态菌液，混匀后投入30g剪切为3cm长度的苎麻段，置于振荡器中于35℃温度条件、180r/min转速下发酵。经过对高效脱胶菌株进行斜面抽真空法保存的菌苔加入活化培养基活化培养10h，取样涂片、染色、镜检，保存时间10年菌株的活化菌液显微照片中可看到均为染色较深的杆状菌体，证明它们都可以活化出正常菌体。活化态菌液接种到苎麻进行浸泡发酵过程中的活菌量，10年的菌株活菌量经10.5h发酵后其活菌数可达1.02×109cfu/ml以上，表明采用斜面抽真空法保存时间超过10年其活性仍比较稳定。保存10年菌株接种到苎麻上进行浸泡发酵10.5h，苎麻纤维完全分散，能完成脱胶，苎麻含胶质一般为25％～35％，而苎麻接入菌液发酵10.5h能使苎麻质量减少27％以上，即达到了苎麻高效脱胶效果，菌株活性保存完好。对于本领域技术人员而言，显然本专利技术不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本专利技术的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本专利技术。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本专利技术的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本专利技术内。此外，应当理解，虽然本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种苎麻高效脱胶菌株长期保存及活化方法，采用斜面抽真空保存法进行苎麻高效脱胶菌株长期保存，其特征在于，包括以下步骤：1)挑取纯化典型单菌落菌苔划线于试管斜面固体培养基，于35℃恒温培养箱培养20h；2)套入大试管，塞上橡胶空心玻璃管，在大试管与橡胶交界处涂石蜡，真空泵抽真空后，用酒精喷灯烧结空心玻璃管封存；所述活化方法为：1)制备活化态菌液，取斜面抽真空法保存10年菌株菌苔1环、斜面抽真空法保存3年菌株菌苔1环分别加入5ml活化培养基中，于35℃条件下培养10h后得到菌液，取1ml菌液稀释涂布于平板，35℃条件下培养20h，取活化态典型单菌落接入6ml活化培养基中，混匀，35℃条件下培养6h后，倒入至100ml扩大培养基中，于35℃温度条件、180r/min转速下培养6h，按2％的接种量转接至200ml扩大培养基中，于35℃条件下培养6h，得到活化态菌液。

【技术特征摘要】
1.一种苎麻高效脱胶菌株长期保存及活化方法，采用斜面抽真空保存法进行苎麻高效脱胶菌株长期保存，其特征在于，包括以下步骤：1)挑取纯化典型单菌落菌苔划线于试管斜面固体培养基，于35℃恒温培养箱培养20h；2)套入大试管，塞上橡胶空心玻璃管，在大试管与橡胶交界处涂石蜡，真空泵抽真空后，用酒精喷灯烧结空心玻璃管封存；所述活化方法为：1)制备活化态菌液，取斜面抽真空法保存10年菌株菌苔1环、斜面抽真空法保存3年菌株菌苔1环分别加入5ml活化培养基中，于35℃条件下培养10h后得到菌液，取1ml菌液稀释涂布于平板，35℃条件下培养20h，取活化态典型单菌落接入6ml活化培养基中，混匀，35℃条件下培养6h后，倒入至100ml扩大培养基中，于35℃温度条件、180r/min转速下培养6h，按2％的接种量转接至200ml扩大培养基中，于35℃条件下培养6h，得到活化态菌液。2.根据权利要求1所述的苎麻高效脱胶菌株长期保存及活化方法，其特征在于：所述固体培养基为营养琼脂培养基。3.根据权利要求1所述的苎麻高效脱胶菌株长期保存及活化方法，其特征在于：所述活化培养基由以下按照质量百分数的原料制成：牛肉浸膏0.5％、葡萄糖0.5％、蛋白胨...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯湘沅，刘正初，彭源德，段盛文，成莉凤，郑科，
申请(专利权)人：中国农业科学院麻类研究所，
类型：发明
国别省市：湖南;43