本发明专利技术涉及一种美洲大蠊药材的HPLC‑DAD指纹图谱质量测定方法。本发明专利技术建立的美洲大蠊药材HPLC‑DAD指纹图谱色谱峰的分离度好，检测时间合理，重复性和稳定性好。与现有报道的美洲大蠊药材及康复新液制剂的HPLC指纹图谱技术相比，本发明专利技术提高了对美洲大蠊原料药材的质量控制水平。本发明专利技术使用的指纹图谱技术能更有效地评价和控制美洲大蠊原料药材质量，保证了在一定制备工艺条件下，所得美洲大蠊提取物的质量稳定，从而能进一步有效的控制由美洲大蠊提取物制成的包含但不仅限于康复新片、康复新胶囊、康复新液、心脉隆及肝龙胶囊等制剂的质量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药材的质量测定方法，特别涉及美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法。
技术介绍
美洲大蠊药材收载于《云南省药品标准》1996年版。美洲大蠊药材主要含有神经肽类、核苷类、氨基酸类、多糖等成分。目前虽已有关于美洲大蠊药材指纹图谱的研究报道，但样品前处理过于繁琐，势必会导致样品检测的误差，降低分析的精确度，且所建立的指纹图谱信息量小，不利于体现其“整体性”和“模糊性”的显著特点，难以对成分复杂的美洲大蠊药材得到较为全面的表征。因此本文通过建立简便的美洲大蠊样品前处理方法，同时又能反映更多信息的HPLC指纹图谱，以期为较为全面的评价和控制美洲大蠊药材的质量提供参考。
技术实现思路
本专利技术的目的在于公开一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法，此方法具有分离效果好，灵敏度高，能真实反映美洲大蠊药材所含特征物质，从而可作为测定美洲大蠊药材中生物碱的化学组分方法，也可作为鉴定美洲大蠊药材质量控制方法。为达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：本专利技术美洲大蠊的指纹图谱质量测定方法，该方法包括如下步骤：(A)供试品溶液的制备：精密称定美洲大蠊药材粉末1～4重量份，置具塞锥形瓶中，加入石油醚50～200体积份，超声处理1～3h，滤过，弃去石油醚；药渣加入30％～85％乙醇25～100体积份，称定重量，超声处理1～2h，放冷，再称定重量；用30％～85％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10～50体积份，挥干，残渣加水溶解，转移至25～100体积份量瓶中，加水定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，备用；(B)对照品溶液的制备：精密称取尿嘧啶、次黄嘌呤、肌苷适量，加水制成每1mL含尿嘧啶、次黄嘌呤及肌苷分别为15μg、30μg及45μg的混合溶液，备用；(C)测定：吸取供试品与对照品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，以3％～4％甲醇溶液(0.07％醋酸)(A)-甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到美洲大蠊药材的指纹图谱。高效液相色谱仪测定条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为3％甲醇溶液(0.07％醋酸)(A)-甲醇(B)；采用梯度洗脱：0～10min，100％A；10～20min，100％A～80％A；20～35min，80％A～60％A；35～45min，60％A～0％A；检测波长为260nm；柱温为30℃；流速为0.5mL/min；理论板数按次黄嘌呤计算不低于5000。如图2所示，采用本专利技术的到的美洲大蠊药材的指纹图谱的特征在于：美洲大蠊药材共有10个共有指纹峰，其中3个分别与相应的参照物峰保留时间相同；参照峰S为次黄嘌呤谱峰，10个共有指纹峰的相对保留时间分别为：1号峰0.386±0.039，2号峰0.640±0.064，3号峰0.920±0.092，S号峰1.000±0.000，4号峰1.139±0.114，5号峰1.327±0.133，6号峰1.503±0.150，7号峰1.662±0.166，8号峰1.775±0.178，9号峰2.123±0.212，10个共有指纹峰中，6个峰面积的比值分别为∶1号峰∶2号峰∶3号峰∶S号峰∶4号峰：5号峰＝(0.253～0.469)∶(0.342～0.636)∶(0.931～1.397)∶1.000∶(0.226～0.420)∶(0.368～0.612)。本专利技术美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法，优选如下检测方法：(A)供试品溶液的制备：精密称定美洲大蠊药材粉末2g，置具塞锥形瓶中，加入石油醚100ml，超声处理2h，滤过，弃去石油醚；药渣加入85％乙醇50ml，称定重量，超声处理1h，放冷，再称定重量；用85％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，挥干，残渣加水溶解，转移至50ml量瓶中，加水定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，备用；(B)对照品溶液的制备：精密称取尿嘧啶、次黄嘌呤、肌苷适量，加水制成每1mL含尿嘧啶、次黄嘌呤及肌苷分别为15μg、30μg及45μg的混合溶液，备用；(C)测定：吸取供试品与对照品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，以3％甲醇溶液(0.07％醋酸)(A)-甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到美洲大蠊药材的指纹图谱。高效液相色谱仪测定条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为3％甲醇溶液(0.07％醋酸)(A)-甲醇(B)；采用梯度洗脱：0～10min，100％A；10～20min，100％A～80％A；20～35min，80％A～60％A；35～45min，60％A～0％A；检测波长为260nm；柱温为30℃；流速为0.5mL/min；理论板数按次黄嘌呤计算不低于5000。如图2所示，采用本专利技术的到的美洲大蠊药材的指纹图谱的特征在于：美洲大蠊药材共有10个共有指纹峰，其中3个分别与相应的参照物峰保留时间相同；参照峰S为次黄嘌呤谱峰，10个共有指纹峰的相对保留时间分别为：1号峰0.386±0.039，2号峰0.640±0.064，3号峰0.920±0.092，S号峰1.000±0.000，4号峰1.139±0.114，5号峰1.327±0.133，6号峰1.503±0.150，7号峰1.662±0.166，8号峰1.775±0.178，9号峰2.123±0.212，10个共有指纹峰中，6个峰面积的比值分别为∶1号峰∶2号峰∶3号峰∶S号峰∶4号峰：5号峰＝(0.253～0.469)∶(0.342～0.636)∶(0.931～1.397)∶1.000∶(0.226～0.420)∶(0.368～0.612)。上述专利技术重量份与体积份的关系为g/ml的关系。本专利技术优点如下：1、本专利技术公开的美洲大蠊指纹图谱，对其特征物质进行了有效表征，提供了一种通过整体指纹图谱信息对美洲大蠊药材质量进行评价的方法，避免了只测定其中一两种化学成分就对美洲大蠊药材体质量判断的片面性，使得美洲大蠊药材质量控制更加准确客观，从而能进一步有效控制由美洲大蠊提取物制成的包含但不仅限于康复新片、康复新胶囊、康复新液、及康复新喷雾剂等制剂的质量。2、本专利技术提供的指纹图谱质量测定方法分离度好，检测时间合理，重复性及稳定性好。附图说明图1为对照品尿嘧啶、次黄嘌呤、肌酐含量测定的HPLC图；图2为美洲大蠊药材的特征对照图谱；图中：峰1：特征峰1，峰2:尿嘧啶，峰3：特征峰3，峰(S):次黄嘌呤，峰4：特征峰4，峰5：特征峰5，峰6：肌昔，峰7:特征峰7，峰8:特征峰8，峰9：特征峰9。图3为美洲大蠊药材230nm波长条件下的色谱图；图4为美洲大蠊药材254nm波长条件下的色谱图；图5为美洲大蠊药材260nm波长条件下的色谱图；图6为美洲大蠊药材300nm波长条件下的色谱图；下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本专利技术。具体实施方式实验例1美洲大蠊药材指纹图谱共有峰的确定1.仪器及试药高效液相色谱仪：美国Agilent1200液相色谱仪系统，配备在线脱气机、四元梯度泵、二极管阵列(DAD)检测器、自动进样器、柱温箱；色谱柱：InertsilODS-3(4.6mm×250mm，5μm)。SB-52000超声波清洗器(宁波新艺超声设备有限公司)；ΜLUP-I-10T优普超纯水机(成都超纯科技有限公司)；Sart本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种美洲大蠊药材的HPLC‑DAD指纹图谱质量测定方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(A)供试品溶液的制备：精密称定美洲大蠊药材粉末1～4重量份，置具塞锥形瓶中，加入石油醚50～200体积份，超声处理1～3h，滤过，弃去石油醚；药渣加入30％～85％乙醇25～100体积份，称定重量，超声处理(功率160W，频率45kHz)1～2h，放冷，再称定重量；用30％～85％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10～50体积份，挥干，残渣加水溶解，转移至25～100体积份量瓶中，加水定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，备用；(B)对照品溶液的制备：精密称取尿嘧啶、次黄嘌呤、肌苷适量，加水制成每1mL含尿嘧啶、次黄嘌呤及肌苷分别为15μg、30μg及45μg的混合溶液，备用；(C)测定：吸取供试品与对照品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，以3％～4％甲醇溶液(0.07％醋酸)(A)‑甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到美洲大蠊药材的指纹图谱。
【技术特征摘要】
1.一种美洲大蠊药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(A)供试品溶液的制备：精密称定美洲大蠊药材粉末1～4重量份，置具塞锥形瓶中，加入石油醚50～200体积份，超声处理1～3h，滤过，弃去石油醚；药渣加入30％～85％乙醇25～100体积份，称定重量，超声处理(功率160W，频率45kHz)1～2h，放冷，再称定重量；用30％～85％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10～50体积份，挥干，残渣加水溶解，转移至25～100体积份量瓶中，加水定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，备用；(B)对照品溶液的制备：精密称取尿嘧啶、次黄嘌呤、肌苷适量，加水制成每1mL含尿嘧啶、次黄嘌呤及肌苷分别为15μg、30μg及45μg的混合溶液，备用；(C)测定：吸取供试品与对照品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，以3％～4％甲醇溶液(0.07％醋酸)(A)-甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到美洲大蠊药材的指纹图谱。2.根据权利要求1所述的美洲大蠊药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法，其特征在于高效液相色谱仪测定条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为3％甲醇溶液(0.07％醋酸)(A)-甲醇(B)；采用梯度洗脱：0～10min，100％A；10～20min，100％A～80％A；20～35min，80％A～60％A；35～45min，60％A～0％A；检测波长为260nm；柱温为30℃；流速为0.5mL/min；理论板数按次黄嘌呤计算不低于5000。3.根据权利要求1、2所述的美洲大蠊药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法得到的指纹图谱，其特征在于：美洲大蠊药材共有10个共有指...
【专利技术属性】
技术研发人员：耿福能，刘越飞，耿福昌，
申请(专利权)人：四川好医生攀西药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
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