一种具有穿膜靶向特性的致病菌生物膜新型抑制剂的制备方法，首先分别采用穿膜肽TAT和致病菌适配体修饰DSPE‑PEG5000，然后采用DSPE‑PEG包封3种具有协同作用的天然酚类化合物，制备得到新型纳米脂质体，具有穿膜、靶向作用等特征，显著增强了天然酚类成分的抗菌和抗生物膜效果，能够有效对抗多种耐药菌，有效清除致病菌生物膜。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于天然产物领域，本专利技术涉及纳米化靶向修饰天然组分制备细菌生物膜天然抑制剂的方法。
技术介绍
目前，各种致病细菌的耐药性问题越来越严重，严重威胁着食品安全和人们的健康，尤其是细菌生物膜，比浮游细菌耐药性更强，危害更大。近年来，天然酚类化合物的抗菌活性引起了人们的重视，不易形成耐药性，并且副作用较小，前景广阔。通过靶向给药、纳米融合膜脂质体修饰等，有望进一步提高酚类化合物的抗菌和抗生物膜活性。从而进一步避免细菌的耐药性和药物的不良反应，扩大其在临床和其他领域的应用。细胞穿膜肽是目前研究的热门靶基，主要因为穿膜肽不仅自身能透过多种细胞膜，而且还可有效携带比其相对分子质量大百倍的外源性大分子进入活细胞，这种高效率的细胞穿膜肽对宿主细胞没有显著毒副作用。适配体(Aptamer)是一种经体外筛选技术得到的寡核苷酸序列(RNA或DNA)，与相应的配体有严格的识别能力和高度的亲和力，适配体具有高特异性、靶分子广、易于体外合成和修饰等优点。近年来，纳米脂质体作为载体已成为药学和分子生物学等领域的研究热点。脂质体作为载体具有缓释药物、延长作用时间、靶向输送、增强药物活性，减少药物剂量、避免耐药性发生、降低对正常组织的损伤等优点。
技术实现思路
一种具有穿膜靶向特性的致病菌生物膜新型抑制剂的制备方法，其特征步骤为：取DSPE-PEG5000适量溶于超纯水中，用EDC活化DSPE-PEG5000的羧基位点，然后按DSPE-PEG5000与穿膜肽TAT的摩尔比为1:1-5:1加入TAT，反应5-8h，形成化合物DSPE-PEG5000-TAT；通过EDC交联，将DSPE-PEG5000与特异性结合某种致病菌的核酸适配体(Aptamer)反应，形成DSPE-PEG5000-Aptamer；用氯仿溶解DSPE-PEG2000，40-60℃减压旋转蒸发成膜；将DSPE-PEG5000-TAT与DSPE-PEG5000-Aptamer按照质量比为1：1-1：3混合，取1份质量的该混合物溶解在PBS缓冲液中，加入3-7份质量的酚类化合物组合物，酚类化合物组合物的组成为对香豆酸、咖啡酸和熊果酸，充分混合；然后加入15-20份质量的已经成膜的DSPE-PEG2000，40-65℃震荡处理1-4h,然后将该悬液冰浴超声处理1-10min,挤压过孔径0.45μm的微孔滤膜，即得具有穿膜靶向特性的多酚纳米脂质体。该专利技术的有益效果：采用该方法制备的新型纳米多酚脂质体，由于适配体的修饰，能够特异性结合到目标致病菌及其生物膜上，精准靶向作用；同时还采用穿膜肽进行了修饰，从而能够促进抗菌成分进入细菌细胞内，显著增强了抗菌效果；第三，采用具有协同抗菌作用的3种天然酚类化合物共同作用，抗菌活性和抗生物膜能力大大增强；第四，采用纳米脂质体作为载体，能够保证将天然酚类成分靶向输送给目标致病菌，并具有缓释效果，能够延长酚类化合物的作用时间，进一步增强酚类成分的抗菌和抗生物膜效果，同时有利于进一步避免耐药性，降低对其他细菌和正常组织的伤害。基于多种优势，该专利技术制备的新型纳米多酚脂质体能够有效杀灭多种耐药菌，能够抑制细菌生物膜的形成，破坏和高效清除成熟的致病菌生物膜，能够将酚类化合物的抗菌能力提高数十倍。具体实施方式实施例1取2gDSPE-PEG5000溶于超纯水中，用EDC活化DSPE-PEG5000的羧基位点，然后加入0.0003摩尔的穿膜肽TAT，反应6h，形成化合物DSPE-PEG5000-TAT；通过EDC交联，将DSPE-PEG5000与特异性结合某种致病菌的核酸适配体(Aptamer)反应，形成DSPE-PEG5000-Aptamer；用氯仿溶解DSPE-PEG2000，60℃减压旋转蒸发成膜；将DSPE-PEG5000-TAT与DSPE-PEG5000-Aptamer按照质量比为1：1混合，取2g该混合物溶解在PBS缓冲液中，加入7.5g酚类化合物组合物，酚类化合物组合物的组成为对香豆酸2.5g、咖啡酸2.5g和熊果酸2.5g，充分混合；然后加入38g的已经成膜的DSPE-PEG2000，55℃震荡处理2h,然后将该悬液冰浴超声处理5min,挤压过孔径0.45μm的微孔滤膜，即得具有穿膜靶向特性的多酚纳米脂质体。实施例2取DSPE-PEG5000适量溶于超纯水中，用EDC活化DSPE-PEG5000的羧基位点，然后按DSPE-PEG5000与穿膜肽TAT的摩尔比为3:1加入TAT，反应7h，形成化合物DSPE-PEG5000-TAT；通过EDC交联，将DSPE-PEG5000与特异性结合某种致病菌的核酸适配体(Aptamer)反应，形成DSPE-PEG5000-Aptamer.用氯仿溶解DSPE-PEG2000，45℃减压旋转蒸发成膜；将DSPE-PEG5000-TAT与DSPE-PEG5000-Aptamer按照质量比为1：1.5混合，取3g该混合物溶解在PBS缓冲液中，加入9g的酚类化合物组合物，酚类化合物组合物的组成为对香豆酸3g、咖啡酸3g和熊果酸3g，充分混合；然后加入60g已经成膜的DSPE-PEG2000，60℃震荡处理3h,然后将该悬液冰浴超声处理8min,挤压过孔径0.45μm的微孔滤膜，即得具有穿膜靶向特性的多酚纳米脂质体。实施例3取DSPE-PEG5000适量溶于超纯水中，用EDC活化DSPE-PEG5000的羧基位点，然后按DSPE-PEG5000与穿膜肽TAT的摩尔比为1:1加入TAT，反应5h，形成化合物DSPE-PEG5000-TAT；通过EDC交联，将DSPE-PEG5000与特异性结合某种致病菌的核酸适配体(Aptamer)反应，形成DSPE-PEG5000-Aptamer.用氯仿溶解DSPE-PEG2000，51℃减压旋转蒸发成膜；将DSPE-PEG5000-TAT与DSPE-PEG5000-Aptamer按照质量比为1：2混合，取0.5g的该混合物溶解在PBS缓冲液中，加入2g的酚类化合物组合物，酚类化合物组合物的组成为对香豆酸0.6g、咖啡酸0.7g和熊果酸0.7g，充分混合；然后加入9.5g的已经成膜的DSPE-PEG2000，63℃震荡处理1.5h,然后将该悬液冰浴超声处理6min,挤压过孔径0.45μm的微孔滤膜，即得具有穿膜靶向特性的多酚纳米脂质体。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有穿膜靶向特性的致病菌生物膜新型抑制剂的制备方法，其特征步骤为：(1)取DSPE‑PEG5000适量溶于超纯水中，用EDC活化DSPE‑PEG5000的羧基位点，然后按DSPE‑PEG5000与穿膜肽TAT的摩尔比为1:1‑5:1加入TAT，反应5‑8h，形成化合物DSPE‑PEG5000‑TAT；通过EDC交联，将DSPE‑PEG5000与特异性结合某种致病菌的核酸适配体(Aptamer)反应，形成DSPE‑PEG5000‑Aptamer；(2)用氯仿溶解DSPE‑PEG2000，40‑60℃减压旋转蒸发成膜；将DSPE‑PEG5000‑TAT与DSPE‑PEG5000‑Aptamer按照质量比为1：1‑1：3混合，取1份质量的该混合物溶解在PBS缓冲液中，加入3‑7份质量的酚类化合物组合物，酚类化合物组合物的组成为对香豆酸、咖啡酸和熊果酸，充分混合；然后加入15‑20份质量的已经成膜的DSPE‑PEG2000，40‑65℃震荡处理1‑4h,然后将该悬液冰浴超声处理1‑10min,挤压过孔径0.45μm的微孔滤膜，即得具有穿膜靶向特性的多酚纳米脂质体。
【技术特征摘要】
1.一种具有穿膜靶向特性的致病菌生物膜新型抑制剂的制备方法，其特征步骤为：(1)取DSPE-PEG5000适量溶于超纯水中，用EDC活化DSPE-PEG5000的羧基位点，然后按DSPE-PEG5000与穿膜肽TAT的摩尔比为1:1-5:1加入TAT，反应5-8h，形成化合物DSPE-PEG5000-TAT；通过EDC交联，将DSPE-PEG5000与特异性结合某种致病菌的核酸适配体(Aptamer)反应，形成DSPE-PEG5000-Aptamer；(2)用氯仿溶解DSPE-PEG...
【专利技术属性】
技术研发人员：娄在祥，王洪新，李雅芹，马朝阳，吕文平，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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