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酶偶联核酸-银纳米探针制造技术

技术编号:14311775 阅读:106 留言:0更新日期:2016-12-27 20:43
本发明专利技术公开了一种酶偶联核酸‑银纳米探针,用下述方法制成:(1)分别用磷酸盐缓冲溶液为溶剂配制寡聚核苷酸溶液,硝酸银溶液,和硼氢化钠溶液;(2)取寡聚核苷酸溶液和硝酸银溶液,混合均匀,加入磷酸盐缓冲溶液,搅拌,加入硼氢化钠溶液,搅拌,(3)向步骤(2)获得的液体中加入FeSO4水溶液,加入D‑氨基酸氧化酶水溶液,震荡混匀;所述寡聚核苷酸为5ˊ–CCCTTAATCCCC–3ˊ,本发明专利技术的探针用于荧光分析法,对食品中的D‑氨基酸进行检测,检测下线可达到10nM;具有分析灵敏度高、选择性强和使用简便等优点;与传统的检测方法相比,样品无需进行衍生化,操作简单、成本低,实现D‑氨基酸的快捷、方便的检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测
,具体涉及一种识别手性D-氨基酸的酶偶联核酸-银纳米探针
技术介绍
氨基酸是蛋白质的基本组成单元,与生命活动密切相关。大部分氨基酸均存在手性对映异构体,L-氨基酸和D-氨基酸(甘氨酸除外)。绝大多数存在于地球上的生命体均以L-氨基酸合成蛋白质,仅少数细菌细胞内存在L-氨基酸的肽链。虽然D-氨基酸不参与人体蛋白质的合成,但其具有特殊的生理功能,少而适量的D-氨基酸是生命所必需的。过量的D-氨基酸可被D-氨基酸氧化酶代谢,能够产生过氧化氢,对人的机体造成一定的损害,另外,D-氨基酸的大量进入机体,将可能引起生命活动的异常甚至死亡。例如,在肌萎缩性侧索硬化症患者的神经胶质细胞中含浓度较高的D-Ser。因此,手性识别在生命过程中极为重要,在食品中若含有过多的D-氨基酸,一旦吸收进入人体,会对人体产生毒理性。目前,手性异构体的分析,尤其是小分子异构体氨基酸的检测仍然较为繁琐。D-氨基酸检测方法主要包括高压液相色谱法,气相色谱法,圆二色谱法,电化学检测法,酶法和微流控芯片法等。但上述方法步骤繁琐、操作复杂、成本高、需要大型设备及专业人员等不足。目前,以纳米银为荧光探针检测D-氨基酸的工作尚未报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足,提供一种酶偶联核酸/银纳米的探针。本专利技术的技术方案概述如下:一种酶偶联核酸-银纳米探针,用下述方法制成:(1)分别用磷酸盐缓冲溶液为溶剂配制0.1-0.5mM寡聚核苷酸溶液,配制0.7-3.5mM的硝酸银溶液,和配制0.7-3.5mM硼氢化钠溶液;(2)取50μL所述寡聚核苷酸溶液和50μL硝酸银溶液,混合均匀,加入4.85mL的磷酸盐缓冲溶液,搅拌15-25min,加入50μL硼氢化钠溶液,搅拌50-90min;其中寡聚核苷酸、硝酸银和硼氢化钠的摩尔比为:1:7:7;(3)向步骤(2)获得的液体中加入0.56mL的0.5-5.0mM的FeSO4水溶液,加入25-40μL的100000U/L D-氨基酸氧化酶水溶液,震荡混匀;所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为20mM,pH为6.8。寡聚核苷酸的序列优选为5ˊ–CCCTTAATCCCC–3ˊ。本专利技术的优点:(1)酶偶联核酸-银纳米探针用于荧光分析法,对食品中的D-氨基酸进行检测,检测下线可达到10nM;具有分析灵敏度高、选择性强和使用简便等优点;(2)与传统的检测方法相比,样品无需进行衍生化,操作简单、成本低,实现D-氨基酸的快捷、方便的检测。附图说明图1为酶偶联核酸-银纳米探针的荧光照片;图2为酶偶联核酸-银纳米探针的荧光光谱图;图3为酶偶联核酸-银纳米探针对D-丙氨酸识别的荧光光谱图;图4.为酶偶联核酸-银纳米探针对D-精氨酸识别的荧光光谱图;图5为酶偶联核酸-银纳米探针对D-苯丙氨酸识别的荧光光谱图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。本专利技术各实施例所作用的D-氨基酸氧化酶为市售猪肾D-氨基酸氧化酶。本专利技术的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本专利技术,若在本申请寡聚核苷酸5ˊ–CCCTTAATCCCC–3ˊ的基础上进行改进,并与D-氨基酸氧化酶结合用于制备酶偶联核酸-银纳米探针,也属于本专利技术的范围。实施例1一种酶偶联核酸-银纳米探针,用下述方法制成:(1)分别用磷酸盐缓冲溶液为溶剂配制0.3mM寡聚核苷酸溶液,配制2.1mM的硝酸银溶液,和配制2.1mM硼氢化钠溶液;(2)取50μL所述寡聚核苷酸溶液和50μL硝酸银溶液,混合均匀,加入4.85mL磷酸盐缓冲溶液,搅拌20min,加入50μL硼氢化钠溶液,搅拌70min;(3)向步骤(2)获得的液体中加入0.56mL的1.0mM的FeSO4水溶液,加入35μL的100000U/L D-氨基酸氧化酶水溶液,震荡混匀;所述寡聚核苷酸为5ˊ–CCCTTAATCCCC–3ˊ。所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为20mM,pH为6.8。酶偶联核酸/银纳米的探针的荧光照片见图1。荧光谱图为图2。实施例2一种酶偶联核酸/银纳米探针,用下述方法制成:(1)分别用磷酸盐缓冲溶液为溶剂配制0.1mM寡聚核苷酸溶液,配制0.7mM的硝酸银溶液,和配制0.7mM硼氢化钠溶液;(2)取50μL所述寡聚核苷酸溶液和50μL硝酸银溶液,混合均匀,加入4.85mL的磷酸盐缓冲溶液,搅拌15min,加入50μL硼氢化钠溶液,搅拌50min;(3)向步骤(2)获得的液体中加入0.56mL的0.5mM的FeSO4水溶液,加入25μL的100000U/L D-氨基酸氧化酶水溶液,震荡混匀;所述寡聚核苷酸为5ˊ–CCCTTAATCCCC–3ˊ。所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为20mM,pH为6.8。荧光谱图为图2。实施例3一种酶偶联核酸-银纳米探针,用下述方法制成:(1)分别用磷酸盐缓冲溶液为溶剂配制0.5mM寡聚核苷酸溶液,配制3.5mM的硝酸银溶液,和配制3.5mM硼氢化钠溶液;(2)取50μL所述寡聚核苷酸溶液和50μL硝酸银溶液,混合均匀,加入4.85mL的磷酸盐缓冲溶液,搅拌25min,加入50μL硼氢化钠溶液,搅拌90min;(3)向步骤(2)获得的液体中加入0.56mL的5.0mM的FeSO4水溶液,加入40μL的100000U/L D-氨基酸氧化酶水溶液,震荡混匀;所述寡聚核苷酸为5ˊ–CCCTTAATCCCC–3ˊ。所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为20mM,pH为6.8。荧光谱图为图2。实施例4用实施例1制备的酶偶联核酸-银纳米探针对D-丙氨酸的手性识别检测:在三支离心管中,均加入90μL的酶偶联核酸-银纳米探针,再分别加入10μL的超纯水(空白),10μL的10–2M的L-丙氨酸和10μL的10–2M的D-丙氨酸,水浴37℃30min,使用荧光分光光度计在568nm激发,620nm发射测定。见图3。实施例5用实施例2制备的酶偶联核酸-银纳米探针对D-氨基酸的手性识别检测:在三支离心管中,均加入90μL的酶偶联核酸-银纳米探针,再分别加入10μL的超纯水(空白),10μL的10–2M的L-精氨酸和10μL的10–2M的D-精氨酸,水浴37℃30min,使用荧光分光光度计在568nm激发,620nm发射测定。见图4。实施例6用实施例3制备的酶偶联核酸-银纳米探针对D-氨基酸的手性识别检测,在三支离心管中,均加入90μL的酶偶联核酸-银纳米探针,再分别加入10μL的超纯水(空白),10–2M的L-苯丙氨酸和10μL的10–2M的D-苯丙氨酸,水浴37℃30min,使用荧光分光光度计在568nm激发,620nm发射测定。见图5。实验证明:用本专利技术的酶偶联核酸-银纳米探针可以对D-丙氨酸,D-精氨酸,D-苯丙氨酸,D-组氨酸,D-赖氨酸,D-丝氨酸,D-苏氨酸等进行识别。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酶偶联核酸‑银纳米探针,其特征是用下述方法制成:(1)分别用磷酸盐缓冲溶液为溶剂配制0.1‑0.5mM寡聚核苷酸溶液,配制0.7‑3.5mM的硝酸银溶液和配制0.7‑3.5mM硼氢化钠溶液;(2)取50μL所述寡聚核苷酸溶液和50μL硝酸银溶液,混合均匀,加入4.85mL的磷酸盐缓冲溶液,搅拌15‑25min,加入50μL硼氢化钠溶液,搅拌50‑90min;所述寡聚核苷酸、硝酸银和硼氢化钠的摩尔比为:1:7:7;(3)向步骤(2)获得的液体中加入0.56mL的0.5‑5.0mM的FeSO4水溶液,加入25‑40μL的100000U/L D‑氨基酸氧化酶水溶液,震荡混匀;所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为20mM,pH为6.8。

【技术特征摘要】
1.一种酶偶联核酸-银纳米探针,其特征是用下述方法制成:(1)分别用磷酸盐缓冲溶液为溶剂配制0.1-0.5mM寡聚核苷酸溶液,配制0.7-3.5mM的硝酸银溶液和配制0.7-3.5mM硼氢化钠溶液;(2)取50μL所述寡聚核苷酸溶液和50μL硝酸银溶液,混合均匀,加入4.85mL的磷酸盐缓冲溶液,搅拌15-25min,加入50μL硼氢化钠溶液,搅拌50-90min;所述寡聚...

【专利技术属性】
技术研发人员:仰大勇张志昆刘阳杨璐
申请(专利权)人:天津大学
类型:发明
国别省市:天津;12

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