制备金针菇液体菌种的新方法技术

本发明专利技术提供一种制备金针菇液体菌种的新方法，该方法包括金针菇一级种的制备、摇瓶菌种的培养、摇瓶菌种的摇瓶菌种的发酵罐培养等步骤，本发明专利技术所提供的金针菇液体菌种的制备方法，经过大量试验得到培养过程中的合理技术参数，并对发酵过程进行详细分级培养，提供了金针菇菌种生长和发育的良好环境和条件，得到的金针菇液体菌种，品质好，产量高，可实现对金针菇液体菌种的大量制备。

A new method for preparing Flammulina velutipes liquid strain

The present invention provides a new method for preparing mushroom liquid spawn, the method includes a kind of mushroom preparation, shake flask cultivation of strain, strain shaking flask fermentation strain steps, preparation method of needle mushroom liquid spawn provided by the invention, after a lot of tests develop reasonable technical parameters in the process, and a detailed classification of cultivation of the fermentation process, provide a good environment for the growth and development of flammulinavelutipesstrains and conditions of needle mushroom liquid spawn, get good quality, high yield, can achieve a large number of business mushroom liquid spawn preparation.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食用菌培植
，特别涉及制备金针菇液体菌种的新方法。
技术介绍
金针菇既是一种美味食品，又是较好的保健食品，其富含B族维生素、维生素C、碳水化合物、矿物质、胡萝卜素、多种氨基酸、植物血凝素、多糖、牛磺酸、香菇嘌呤、麦冬甾醇、细胞溶解毒素、冬菇细胞毒素等，对增强智力尤其是对儿童的身高和智力发育有良好的作用，国外称之为“增智菇”。金针菇具有很高的药用价值，经常使用金针菇能够增强机体对癌细胞的抗御能力，常食金针菇还能降胆固醇，预防肝脏疾病和肠胃道溃疡，增强机体正气，防病健身。总之，金针菇营养价值高、口味好，颇受广大消费者的青睐，市场需求量不断增加，从而推动金针菇的产业发展向规模化、工业化前进。液体培养具有很多如周期短、产量高、占地面积少、便于操控、生产条件稳定等优点，有关金针菇菌种液体培养技术的研究虽有一些报道，但多以利用发酵液或菌丝体为目的，对培养过程中影响菌丝活性的生理指标研究甚少，目前尚缺乏有效控制发酵过程的技术参数。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供制备金针菇液体菌种的新方法，技术方案为：本专利技术提供制备金针菇液体菌种的新方法，包括如下步骤：(1)、金针菇一级种的制备，取金针菇菌株接种于斜面培养基上，在23-25℃条件下，培养10-13天；(2)、摇瓶菌种的培养，取斜面母种，按照液体培养基体积百分比10-18％的接种量，接种到装有80-120mL摇瓶液体培养基的500mL培养瓶中，培养5-8天得摇瓶菌种；培养条件为：温度25-28℃，震荡速率为120-190转/min，湿度65-80％，二氧化碳浓度为1500-2800ppm；(3)、摇瓶菌种的摇瓶菌种的发酵罐培养，将摇瓶菌种按发酵培养基体积百分比7-15％的接种量接种至装有5.5L发酵培养基的10L发酵罐进行发酵培养，培养时间为4天，培养条件为：第1天，培养温度20-25℃，通气量：每分钟每1L发酵液通入的空气量为0.5-0.7L，搅拌速度为150-170r/min，压力为0.1-0.15MPa，初始PH为3.5-4.8；第2-3天，培养温度为15-18℃，通气量：每分钟每1L发酵液通入的空气量为1.5-2L，搅拌速度210-240r/min，压力为0.4-0.6MPa；第4天，培养温度20-22℃，通气量：每分钟每1L发酵液通入的空气量为0.8-1L，搅拌速度210-240r/min，压力为0.1-0.2MPa，调节PH值为5.1-6.3。斜面培养基可为PDA培养基，即马铃薯葡萄糖培养基，配方：葡萄糖20g，琼脂18g，马铃薯煮的汁的过滤液1000ml；摇瓶菌种的培养、二级摇瓶培养和发酵培养基均可为常用金针菇液体培养基，例如PDB液体培养基，配方：葡萄糖20g，马铃薯煮的汁的过滤液1000ml。本专利技术所提供的金针菇液体菌种的制备方法，经过大量试验得到培养过程中的合理技术参数，利用本专利技术所述的制备方法得到的金针菇液体菌种，品质好，产量高，大大缩短了培养时间，有效提供培养效率，为金针菇液体菌种培养工厂化提供有效的技术参数。进一步地，所述摇瓶菌种的培养过程中采用暗培养和光培养两个阶段进行，所述暗培养阶段为初始2-3天，所述光培养阶段为剩余时间，优选地，光培养所需的光照强度为560-800勒克斯。优选培养基为，摇瓶液体培养基包括如下重量百分比的组分：2-3％豆粕、1-2％红糖、0.3-0.8％酵母膏、0.02-0.05％七水硫酸镁、0.01-0.02％碘化钾、0.01-0.03％碳酸铯、0.03-0.05％土霉素、0.01-0.02％氰钴胺、0.08-0.1％胆碱、0.05-0.07％维甲酸、0.12-0.21％缬氨酸、0.1-0.2％糖胺聚糖，余量为水。进一步优选，发酵培养基包括如下重量百分比的组分：1.5-2.5％大米粉、2-3％玉米粉、3-5％红糖、0.5-1.2％酵母膏、0.03-0.05％七水硫酸镁、0.01-0.02％碘化钾、0.02-0.05％土霉素、0.08-0.1％氰钴胺、0.06-0.09％胆碱、0.15-0.3％缬氨酸、0.02-0.07％左旋肉碱、0.12-0.21％透明质酸、0.01-0.03％木质素磺酸钠、0.05-0.1％乙醇胺，余量为水。本专利技术另一方面，提供了适用于金针菇液体菌种培养的培养基，在优化基本的碳源、氮源、维生素和无机盐的基础上，进一步改良添加营养成分，诱导菌丝的有效增长；使用本专利技术所提供的培养基进行培养的金针菇液体菌种，颜色洁白，活性优良，菌丝球性状较佳，且产量高。进一步地，发酵培养基的制备方法为：将大米粉和玉米粉加入到二分之一水中稀释，并打浆，得到混合浆液，灭菌后待用；将红糖、酵母膏、土霉素和透明质酸加入到四分之一水中，搅拌并加热到45-60℃后，向水溶液中依次加入碘化钾、左旋肉碱、木质素磺酸钠、缬氨酸、乙醇胺、氰钴胺、胆碱、七水硫酸镁混合均匀，55℃搅拌30min，得到营养液，灭菌后待用；将灭菌后的混合浆液和营养液混合均匀，加剩余四分之一水定容后，混合均匀即得发酵培养基。其中，混合浆液灭菌条件为：灭菌锅内温度137-142℃，压力为85KPa，灭菌时间为80-90min；营养液灭菌条件为：灭菌锅内温度150-160℃，压力为90KPa，灭菌时间为25-40min。进一步地，发酵培养基中还包括重量百分比为1.5-2％的桑葚、土豆和丝瓜藤混合物的水浸提取物，桑葚、土豆和丝瓜藤的质量比为1:1:3，制备方法为：将桑葚和土豆剪切成1-2cm3的小块，将丝瓜藤剪切成1-2cm的长条，混合后加入原料总重量5-8倍的水打成浆液，将浆液加热到75-85℃后，热过滤，得到的滤液减压浓缩即得水浸提物。添加上述水浸提物，可进一步促进菌丝对培养基中营养成分的吸收、分解和利用，产生的菌丝体产量更高，均一性更佳，质量更好，处理较为容易。本专利技术所提供的金针菇液体菌种的制备方法，经过大量试验得到培养过程中的合理技术参数，并对发酵过程进行详细分级培养，提供了金针菇菌种生长和发育的良好环境和条件，得到的金针菇液体菌种，品质好，产量高，可实现对金针菇液体菌种的大量制备。使用本专利技术所提供的液态培养基培养的金针菇液态菌种，菌丝白色浓密，可达到738个/ml，产量高，且大小均一，菌球直径均在有效菌种2.0mm内；菌株的活性强，菌丝球边缘多毛刺，菌丝间具有横隔，有锁状联合，菌球由菌丝紧密缠绕而成，且无杂菌污染；菌株对培养液中的大分子营养物质的分解利用完全，生长状好。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述。实施例1提供制备金针菇液体菌种的新方法，如下步骤：(1)、配置斜面培养基，取金针菇菌株接种于斜面培养基上，在23℃条件下，培养13天；(2)、摇瓶菌种的培养，取斜面母种，按照液体培养基体积百分比10％的接种量，接种到装有80mL摇瓶液体培养基的500mL培养瓶中，培养5天得摇瓶菌种；培养条件为：温度25℃，震荡速率为120r/min，湿度80％，二氧化碳浓度为2800ppm；(4)、摇瓶菌种的发酵罐培养，将摇瓶菌种按发酵培养基体积百分比7％的接种量接种至装有5.5L发酵培养基的10L发酵罐进行发酵培养，培养时间为4天，培养条件为：第1天，培养温度20℃，通气量：每分钟每1L发酵液通入的空气量为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备金针菇液体菌种的新方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)、金针菇一级种的制备，取金针菇菌株接种于斜面培养基上，在23‑25℃条件下，培养10‑13天；(2)、摇瓶菌种的培养，取步骤(1)制备的金针菇一级种，按照液体培养基体积百分比10‑18％的接种量，接种到装有摇瓶液体培养基的培养瓶中，培养5‑8天得摇瓶菌种；培养条件为：温度25‑28℃，震荡速率为120‑190转/min，湿度65‑80％，二氧化碳浓度为1500‑2800ppm；(3)、摇瓶菌种的发酵罐培养，将摇瓶菌种按发酵培养基体积百分比7‑15％的接种量接种至装有发酵培养基的发酵罐进行发酵培养，培养时间为4天，培养条件为：第1天，培养温度20‑25℃，通气量：每分钟每1L发酵液通入的空气量为0.5‑0.7L，搅拌速度为150‑170r/min，压力为0.1‑0.15MPa，初始PH为3.5‑4.8；第2‑3天，培养温度为15‑18℃，通气量：每分钟每1L发酵液通入的空气量为1.5‑2L，搅拌速度210‑240r/min，压力为0.4‑0.6MPa；第4天，培养温度20‑22℃，通气量：每分钟每1L发酵液通入的空气量为0.8‑1L，搅拌速度210‑240r/min，压力为0.1‑0.2MPa，调节PH值为5.1‑6.3。...

【技术特征摘要】
1.一种制备金针菇液体菌种的新方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)、金针菇一级种的制备，取金针菇菌株接种于斜面培养基上，在23-25℃条件下，培养10-13天；(2)、摇瓶菌种的培养，取步骤(1)制备的金针菇一级种，按照液体培养基体积百分比10-18％的接种量，接种到装有摇瓶液体培养基的培养瓶中，培养5-8天得摇瓶菌种；培养条件为：温度25-28℃，震荡速率为120-190转/min，湿度65-80％，二氧化碳浓度为1500-2800ppm；(3)、摇瓶菌种的发酵罐培养，将摇瓶菌种按发酵培养基体积百分比7-15％的接种量接种至装有发酵培养基的发酵罐进行发酵培养，培养时间为4天，培养条件为：第1天，培养温度20-25℃，通气量：每分钟每1L发酵液通入的空气量为0.5-0.7L，搅拌速度为150-170r/min，压力为0.1-0.15MPa，初始PH为3.5-4.8；第2-3天，培养温度为15-18℃，通气量：每分钟每1L发酵液通入的空气量为1.5-2L，搅拌速度210-240r/min，压力为0.4-0.6MPa；第4天，培养温度20-22℃，通气量：每分钟每1L发酵液通入的空气量为0.8-1L，搅拌速度210-240r/min，压力为0.1-0.2MPa，调节PH值为5.1-6.3。2.如权利要求1所述的制备金针菇液体菌种的新方法，其特征在于，所述摇瓶菌种的培养过程中采用暗培养和光培养两个阶段进行，所述暗培养阶段为初始2-3天，所述光培养阶段为剩余时间。3.如权利要求2所述的制备金针菇液体菌种的新方法，其特征在于，所述光培养所需的光照强度为560-800勒克斯。4.如权利要求1所述的制备金针菇液体菌种的新方法，其特征在于，所述摇瓶液体培养基包括如下重量百分比的组分：2-3％豆粕、1-2％红糖、0.3-0.8％酵母膏、0.02-0.05％七水硫酸镁、0.01-0.02％碘化钾、0.01-0.03％碳酸铯、0.03-0.05％土霉素、0.01-0.02％氰钴胺、0.08-0.1％胆碱、0.05-0.07％...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖林刚，李银娟，杨香院，李坤，
申请(专利权)人：陕西众兴高科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61