眼疾病治疗剂、其筛选方法或伴随视网膜色素上皮细胞移植的排斥反应的预测方法技术

技术编号:14204582 阅读:291 留言:0更新日期:2016-12-18 11:12
本发明专利技术提供眼疾病治疗剂、及眼疾病治疗剂的筛选方法等。另外,本发明专利技术提供针对眼疾病患者的视网膜色素上皮细胞移植伴随的免疫排斥反应的预测方法。

Therapeutic agent for eye disease, screening method thereof, and method for predicting rejection of retinal pigment epithelial cell transplantation

The present invention provides eye disease therapeutic agent, and screening method for treating diseases of the eye. In addition, the present invention provides a method for predicting the immunological rejection associated with retinal pigment epithelial cell transplantation in patients with ocular diseases.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及眼疾病治疗剂、其筛选方法及伴随视网膜色素上皮细胞移植的排斥反应的预测方法。
技术介绍
已知主要组织相容性抗原(MHC)在人类中作为HLA(Human leukocyte antigen:人类白细胞抗原)在大部分的细胞、组织中表达。HLA主要包括A、B、C、DR、DQ、DP 6个基因座抗原,进一步分别由数十种不同类型(等位基因)的复杂组合构成,其组合存在数万种。HLA在人的体内作为重要的免疫机构,其主要功能为用于进行自他识别的抗原提呈。如果向他人移植了自己以外的细胞/组织的情况下(异体移植),该HLA作为最重要的抗原(异物)被T细胞等免疫相关细胞所识别,排斥成立而使移植物不能植活。在通常的脏器移植,特别是骨髓移植中,原则上认为需要使作为HLA的各抗原的A、B、C、DR、DQ、DP 6个基因座抗原全部一致,据说在不能一致时存在产生严重的排斥反应的风险,另外,移植后的预后也较差。已知视网膜色素上皮细胞会表达、产生抑制向眼内浸润的炎症细胞(Th1细胞、CD8阳性细胞、巨噬细胞、B细胞等)的分子,相对于同种的自体炎症性细胞提供抑制信号(例如:非专利文献1、2)。已知一方面,在相同的条件下,视网膜色素上皮细胞对调节性T细胞提供促进的信号(非专利文献3,4)。另一方面,已知视网膜色素上皮细胞也抑制异种T细胞(Th22细胞)(非专利文献5),视网膜色素上皮细胞自体存在免疫抑制功能,由此,视网膜色素上皮细胞周边的环境存在免疫反应受到抑制的趋势。另外,已知将利用IFN-γ或巨噬细胞进行了前处理的人视网膜色素上皮细胞与同种异体T细胞进行共培养时,由IL-2等的产生升高导致T细胞的活化(非专利文献6)。另外,已知IFN-γ在MHC类II分子的表达中实现重要的功能(非专利文献7)。然而,目前为止尚无在使用视网膜色素上皮细胞(以下记为“RPE细胞”)的针对视网膜疾病患者的移植中考虑了HLA匹配的同种异体移植策略。现有技术文献非专利文献非专利文献1:Sugita S et al,J Immunol.2004,172:4184-4194.非专利文献2:Sugita S et al,J Immunol.2006,176:118-127.非专利文献3:Sugita S et al,J Immunol,2008,181:7525-7536.非专利文献4:Sugita S et al,J Immunol,2009,183:5013-5022.非专利文献5:Sugita S et al,IOVS,2013,vol.54,No.10:6926-6933.非专利文献6:Enzmann V et al.Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol.2001Jul;239(6):445-51非专利文献7:Enzmann V.Transplant Immunology 7:9-14,1999
技术实现思路
专利技术要解决的问题本专利技术的目的在于提供眼疾病治疗剂及眼疾病治疗剂的筛选方法等。进一步本专利技术的其他目的在于,提供针对眼疾病患者的视网膜色素上皮细胞移植伴随的免疫排斥反应的预测方法。解决问题的方法本专利技术人等得到了如下见解:通过获得从多名受试者得到的T细胞、源自iPS细胞的视网膜色素上皮(RPE)细胞,进行了HLA分型的基础上,将上述T细胞与RPE细胞进行接触培养,从而测定了从T细胞产生的细胞因子浓度,结果在上述T细胞的HLA-A、HLA-B、HLA-DR的3个基因座的等位基因,与HLA-A、HLA-B、HLA-DR的3个基因座的基因型分别为纯合的基因型的视网膜色素上皮细胞的各基因座中的等位基因一致的情况下,细胞因子浓度与T细胞单独的情况相同,或比其降低。本专利技术人基于这些见解进一步反复研究,结果完成了本专利技术。即,本专利技术涉及以下内容。[1]眼疾病治疗剂,所述眼疾病治疗剂含有视网膜色素上皮细胞并用于眼疾病患者,其中,所述视网膜色素上皮细胞在HLA-A基因座、HLA-B基因座及HLA-DR基因座的基因型分别为纯合的基因型,所述眼疾病患者具有在相应的基因座中至少一个等位基因与所述视网膜色素上皮细胞的所述基因座中的等位基因一致的组合。[2]根据[1]所述的药剂,其抑制移植后的免疫排斥反应。[3]根据[1]或[2]所述的药剂,其中,所述视网膜色素上皮细胞源自多功能性干细胞。[4]根据[3]所述的药剂,其中,所述多功能性干细胞为iPS细胞。[5]根据[1]~[4]中任一项所述的药剂,其中,所述眼疾病为视网膜变性或伴随视网膜变性的疾病。[6]选择相对于眼疾病患者的眼疾病治疗剂的方法,其包括以下工序:(i)检查源自患者的T细胞的HLA-A基因座、HLA-B基因座及HLA-DR基因座的基因型的工序,(ii)选择具有与工序(i)中判明的各基因座中的等位基因一致的等位基因的视网膜色素上皮细胞的工序。[7]根据[6]所述的方法,其中,工序(ii)中,所述视网膜色素上皮细胞具有的HLA-A基因座、HLA-B基因座及HLA-DR基因座的基因型分别为纯合的基因型。[8]选择针对眼疾病患者的眼疾病治疗剂的方法,其包括以下工序:(1)将源自患者的T细胞,与视网膜色素上皮细胞进行接触培养的工序,(2)测定工序(1)的培养上清液中分泌的炎性细胞因子浓度的工序,及(3)在工序(2)中的炎性细胞因子浓度与单独培养源自患者的T细胞的培养上清液中的炎性细胞因子浓度为同水平、或者其以下的情况下,判定该视网膜色素上皮细胞可用作针对该患者的眼疾病治疗剂的有效成分的工序。[9]根据[8]所述的方法,其中,所述视网膜色素上皮细胞具有的HLA-A基因座、HLA-B基因座及HLA-DR基因座的基因型分别为纯合的基因型。[10]根据[8]或[9]所述的方法,其包括用抗CD3抗体使工序(1)中源自患者的T细胞活化。[11]根据[8]~[10]中任一项所述的方法,其中,工序(1)中源自患者的T细胞为CD4阳性,工序(2)中测定的炎性细胞因子为IFN-γ。[12]根据[8]~[10]中任一项所述的方法,其中,工序(1)中源自患者的T细胞为CD8阳性,工序(2)中测定的炎性细胞因子为粒酶B。[13]试验方法,其用于预测移植移植用视网膜色素上皮细胞的眼疾病患者的排斥反应,其包括以下工序:(A)将源自患者的T细胞与该视网膜色素上皮细胞进行接触培养的工序,(B)测定工序(A)的培养上清液中分泌的炎性细胞因子浓度的工序,及(C)在工序(B)中的炎性细胞因子浓度显著高于单独培养的源自患者的T细胞的培养上清液中炎性细胞因子浓度的情况下,判定相对于该视网膜色素上皮细胞产生排斥反应的工序。[14]根据[13]所述的方法,该移植用视网膜色素上皮细胞具有的HLA-A基因座、HLA-B基因座及HLA-DR基因座的基因型分别为纯合的基因型。[15]根据[13]或[14]所述的方法,其包括用抗CD3抗体使工序(A)中的源自患者的T细胞活化。[16]根据[13]~[15]中任一项所述的方法,其中,工序(A)中源自患者的T细胞为CD4阳性,工序(B)中测定的炎性细胞因子为IFN-γ。[17]根据[13]~[15]中任一项所述的方法,其中,工序(A)中源自患者的T细胞为CD8阳性,工序(B)中测定的炎性细胞因子为粒酶本文档来自技高网
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【技术保护点】
眼疾病治疗剂,所述眼疾病治疗剂含有视网膜色素上皮细胞并用于眼疾病患者,其中,所述视网膜色素上皮细胞在HLA‑A基因座、HLA‑B基因座及HLA‑DR基因座的基因型分别为纯合的基因型,所述眼疾病患者具有在相应的基因座中至少一个等位基因与所述视网膜色素上皮细胞的所述基因座中的等位基因一致的组合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.02.21 JP 2014-0323251.眼疾病治疗剂,所述眼疾病治疗剂含有视网膜色素上皮细胞并用于眼疾病患者,其中,所述视网膜色素上皮细胞在HLA-A基因座、HLA-B基因座及HLA-DR基因座的基因型分别为纯合的基因型,所述眼疾病患者具有在相应的基因座中至少一个等位基因与所述视网膜色素上皮细胞的所述基因座中的等位基因一致的组合。2.根据权利要求1所述的药剂,其抑制移植后的免疫排斥反应。3.根据权利要求1或2所述的药剂,其中,所述视网膜色素上皮细胞源自多功能性干细胞。4.根据权利要求3所述的药剂,其中,所述多功能性干细胞为iPS细胞。5.根据权利要求1~4中任一项所述的药剂,其中,所述眼疾病为视网膜变性或伴随视网膜变性的疾病。6.选择针对眼疾病患者的眼疾病治疗剂的方法,其包括以下工序:(i)检查源自患者的T细胞的HLA-A基因座、HLA-B基因座及HLA-DR基因座的基因型的工序,(ii)选择具有与工序(i)中判明的各基因座中的等位基因一致的等位基因的视网膜色素上皮细胞的工序。7.根据权利要求6所述的方法,其中,工序(ii)中的视网膜色素上皮细胞具有的HLA-A基因座、HLA-B基因座及HLA-DR基因座中的基因型分别为纯合的基因型。8.选择针对眼疾病患者的眼疾病治疗剂的方法,其包括以下工序:(1)将源自患者的T细胞与视网膜色素上皮细胞进行接触培养的工序,(2)测定工序(1)的培养上清液中分泌的炎性细胞因子浓度的工序,及(3)在工序(2)中的炎性细胞因子浓度与单独培养源自患者的T细胞的培养上清液中的炎性细胞因子浓度为同水平、或者其以下的情况下,判定所述视网膜色素上皮细胞可用作针对所述患者的眼疾病治疗剂的有效成分的工序。9.权利要求8所述的方法,其中,所述视网膜色素上皮细胞具有的HLA-A基因座、HLA-B基因座及HLA-DR基因座中的基因型分别为纯合的基因型。10.根据权利要求8或9所述的方法,其中,用抗CD3抗体使工序(1)中的源自患者的T细胞活化。11.根据权利要求8~10中任一项所述的方法,其中,工序(1)中源自患者的T细胞为CD4阳性,工序(2)中测定的炎性细胞因子为IFN-γ。12.根据权利要求8~10中任一项所述的方法,其中,工序(1)中源自患者的T细胞为CD8阳性,工序(2)中测定的炎性细胞因子为粒酶B。13.试验方法,其用于预测移植移植用视网膜色素上皮细胞的眼疾病患者的排斥反应,其包括以下工序:(A)将源自患者的T细胞与所述视网膜色素上皮细胞进行接触培养的工序,(B)测定工序(A)的培养上清液中分泌的炎性细胞因子浓度的工序,及(C)在工序(B)中的炎性细胞因子浓度显著高于单独培养的源自患者的T...

【专利技术属性】
技术研发人员:高桥政代杉田直
申请(专利权)人:希里欧斯株式会社
类型:发明
国别省市:日本;JP

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