一类抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体及其编码基因和应用制造技术

本发明专利技术公开了一类抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体及其编码基因和应用。本发明专利技术的抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体，包括重链和轻链，重链包括重链恒定区和重链可变区，轻链包括轻链恒定区和轻链可变区，所述的重链恒定区为小鼠抗体的重链恒定区或人抗体的重链恒定区，所述的轻链恒定区为小鼠抗体的轻链恒定区或人抗体的轻链恒定区。本发明专利技术的单克隆抗体能够特异的与VEGFR2结合，并且阻断VEGF与VEGFR2的结合；细胞生物学活性分析表明，其对VEGF诱导的HUVEC细胞的增殖具有显著的抑制作用。因此，可以将本发明专利技术的抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体应用于制备阻断VEGFR2功能的药物，从而成为一种抗肿瘤的新药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子免疫学领域，具体涉及一类抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体及其编码基因和应用。
技术介绍
血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR2)是一种特异作用于血管内皮细胞的生长因子的受体，又称作KDR或FLK1。目前发现的VEGFR主要有5种：VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3、NP-1和NP-2，其中VEGFR-1和VEGFR2主要存在于血管内皮细胞，VEGFR3主要存在于淋巴管内皮细胞。NP-1和NP-2不仅在内皮细胞表达，还表达于某些肿瘤细胞内。但VEGF促血管内皮细胞增殖等生物活性的发挥主要是通过与VEGFR2结合实现。新生血管的形成在人类的多种疾病中发挥重要作用，如视网膜病变、关节炎、子宫内膜异位症等。肿瘤的生长通常也会伴随着新生血管的形成，早在1971年，J.Folkman就提出可通过阻断肿瘤血管的生成来抑制肿瘤的生长及转移，近年来，研究发现，越来越多的恶性肿瘤如前列腺癌、肝癌、乳腺癌、子宫内膜癌及卵巢癌等，其发展、转移、预后与血管内皮细胞生长因子及其受体家族相关，因此，以VEGF及其受体为靶点的抗肿瘤治疗再次受到关注，在受体家族中，以对VEGFR-2为靶点的研究最为广泛。单克隆抗体以其特异性强、安全性高和效果好等优点成为此类抗肿瘤药物开发的首选。美国礼来公司研发的Cyramza(Ramucirumab)即是一种阻断KDR功能的单克隆抗肿瘤药物。2014年4月美国FDA批准Cyramza治疗经一线化疗(包含铂类或氟尿嘧啶类药物)疾病进展的晚期或转移性胃或胃食管结合部腺癌患者。Cyramza成为美国FDA首个被批准治疗此类患者的药物。目前乳腺癌、大肠癌、肝癌、肺癌也已处于III期临床试验阶段。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一类抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体及其编码基因和应用。本专利技术的抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体，其特征在于，包括重链和轻链，重链包括重链恒定区和重链可变区，轻链包括轻链恒定区和轻链可变区，所述的重链恒定区为小鼠抗体的重链恒定区或人抗体的重链恒定区，所述的轻链恒定区为小鼠抗体的轻链恒定区或人抗体的轻链恒定区；所述的重链可变区为蛋白PCABH、H3、H6、H11、H14或H15中的任意一种，所述的轻链可变区为蛋白PCABL、L3、L5、L7、L8、L11或L14中的任意一种；所述的蛋白PCABH的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述的蛋白L3的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示，所述的蛋白L5的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示，所述的蛋白L7的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示，所述的蛋白L8的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示，所述的蛋白L11的氨基酸序列如SEQ ID NO:32所示，所述的蛋白L14的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，所述的蛋白H3的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示，所述的蛋白H6的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，所述的蛋白H11的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示，所述的蛋白H14的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述的蛋白H15的VH氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示，所述的蛋白PCABL的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示。优选，所述的重链可变区为蛋白PCABH，所述的轻链可变区为蛋白L3、L5、L7、L8、L11或L14中的任意一种；或所述的重链可变区为蛋白H3、H6、H11、H14或H15中的任意一种，所述的轻链可变区为蛋白PCABL。进一步优选，所述的重链可变区为蛋白PCABH，所述的轻链可变区为蛋白L3、L5或L14中的任意一种；或所述的重链可变区为蛋白H14，所述的轻链可变区为蛋白PCABL。这些单克隆抗体在与抗血管内皮生长因子受体VEGFR2结合时体现出了大大好于上市抗体的解离速率。进一步优选，所述的重链可变区为蛋白PCABH，所述的轻链可变区为蛋白L3、L5、L7、L8或L14中的任意一种；或所述的重链可变区为蛋白H3、H11或H15中的任意一种，所述的轻链可变区为蛋白PCABL。这些单克隆抗体抑制VEGF诱导的HUVEC细胞增殖的效果大大好于上市抗体。本专利技术的第二个目的是提供编码上述抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体的基因。优选，所述的编码蛋白PCABH的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:7所示，所述的编码蛋白L3的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:23所示，所述的编码蛋白L5的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:25所示，所述的编码蛋白L7的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:27所示，所述的编码蛋白L8的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:29所示，所述的编码蛋白L11的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:31所示，所述的编码蛋白L14的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:9所示，所述的编码蛋白PCABL的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:21所示，所述的编码蛋白H3的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:11所示，所述的编码蛋白H6的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:13所示，所述的编码蛋白H11的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:15所示，所述的编码蛋白H14的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:17所示，所述的编码蛋白H15的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:19所示。本专利技术的第三个目的是提供一种单克隆抗体偶联物，其特征在于，包括上述任意一种抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体以及与其偶联的偶联部分，所述的偶联部分选自放射性核素、药物、毒素、细胞因子、酶、荧光素和生物素中的一种或多种。进一步优选，所述偶联部分为蓖麻毒素。更进一步优选，所述偶联部分为蓖麻毒素A链。本专利技术的第四个目的是提供抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体或上述单克隆抗体偶联物在制备与血管内皮生长因子受体VEGFR2特异性结合，从而阻断VEGF与VEGFR2结合的药物中的应用。所述的药物为预防和/或治疗和/或辅助治疗肿瘤的药物。所述的肿瘤选自直结肠癌、非小细胞肺癌、恶性胶质瘤和肾癌。本专利技术的第五个目的是提供一种与血管内皮生长因子受体VEGFR2特异性结合，从而阻断VEGF与VEGFR2结合的药物，其特征在于，包括上述抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体或上述单克隆抗体偶联物作为活性成份和药学上可以接受的载体或辅料。所述的药物为预防和/或治疗和/或辅助治疗肿瘤的药物。所述的肿瘤选自直结肠癌、非小细胞肺癌、恶性胶质瘤和肾癌。本专利技术新发现了一类抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体及其编码基因，这些单克隆抗体能够特异的与VEGFR2结合，并且十分有效的阻断VEGF与VEGFR2的结合；细胞生物学活性分析表明，本专利技术的抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体对VEGF诱导的HUVEC细胞的增殖具有显著的抑制作用。因此，可以将本专利技术的抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体应用于制备阻断VEGFR2功能的药物，从而成为一种抗肿瘤的新药物。附图说明图1是本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体，其特征在于，包括重链和轻链，重链包括重链恒定区和重链可变区，轻链包括轻链恒定区和轻链可变区，所述的重链恒定区为小鼠抗体的重链恒定区或人抗体的重链恒定区，所述的轻链恒定区为小鼠抗体的轻链恒定区或人抗体的轻链恒定区；所述的重链可变区为蛋白PCABH、H3、H6、H11、H14或H15中的任意一种，所述的轻链可变区为蛋白PCABL、L3、L5、L7、L8、L11或L14中的任意一种；所述的蛋白PCABH的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述的蛋白L3的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示，所述的蛋白L5的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示，所述的蛋白L7的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示，所述的蛋白L8的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示，所述的蛋白L11的氨基酸序列如SEQ ID NO:32所示，所述的蛋白L14的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，所述的蛋白H3的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示，所述的蛋白H6的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，所述的蛋白H11的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示，所述的蛋白H14的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述的蛋白H15的VH氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示，所述的蛋白PCABL的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示。...

【技术特征摘要】
1.抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体，其特征在于，包括重链和轻链，重链包括重链恒定区和重链可变区，轻链包括轻链恒定区和轻链可变区，所述的重链恒定区为小鼠抗体的重链恒定区或人抗体的重链恒定区，所述的轻链恒定区为小鼠抗体的轻链恒定区或人抗体的轻链恒定区；所述的重链可变区为蛋白PCABH、H3、H6、H11、H14或H15中的任意一种，所述的轻链可变区为蛋白PCABL、L3、L5、L7、L8、L11或L14中的任意一种；所述的蛋白PCABH的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述的蛋白L3的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示，所述的蛋白L5的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示，所述的蛋白L7的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示，所述的蛋白L8的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示，所述的蛋白L11的氨基酸序列如SEQ ID NO:32所示，所述的蛋白L14的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，所述的蛋白H3的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示，所述的蛋白H6的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，所述的蛋白H11的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示，所述的蛋白H14的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述的蛋白H15的VH氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示，所述的蛋白PCABL的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示。2.根据权利要求1所述的抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体，其特征在于，所述的重链可变区为蛋白PCABH，所述的轻链可变区为蛋白L3、L5、L7、L8、L11或L14中的任意一种；或所述的重链可变区为蛋白H3、H6、H11、H14或H15中的任意一种，所述的轻链可变区为蛋白PCABL。3.根据权利要求2所述的抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体，其特征在于，所述的重链可变区为蛋白PCABH，所述的轻链可变区为蛋白L3、L5、L7、L8或L14中的任意一种；或所述的重链可变区为蛋白H3、H11、H14或H15中的任意一种，所述的轻链可变区为蛋白PCABL。4.编码权利要求1所述的抗血管内皮生长因子受体VEGFR...

【专利技术属性】
技术研发人员：王忠民，李百勇，张鹏，夏瑜，
申请(专利权)人：中山康方生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44