本实用新型专利技术公开了一种胰岛分离纯化的装置，包括多节两端开口的离心管身，离心管帽，不同网孔尺寸的多层滤网。属于生物技术领域。该发明专利技术装置，利用实验室的离心管、滤网等常规耗材，制备具有多层分离筛结构的分离装置，实现于同一个离心管滤过不同体积尺寸的组织细胞以及多次消化、洗涤的功能。本实用新型专利技术装置在操作上简单、易行，成本低廉，节省实验耗时，节省人力，且使得胰腺的消化比较完全，提高了胰岛的活性和得率，利于实验室胰岛研究，也适合工业化批量生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学领域，特别是涉及一种胰岛分离纯化装置，具体地说本专利技术可以节省胰岛获得的时间，保证较高的胰岛活性率，且提高胰岛纯度，且节约成本。
技术介绍
糖尿病已成为危险人类健康的第三大杀手，糖尿病体质的患者是细菌生长的“沃土”，同时也伴随着白细胞吞噬功能的下降，从而更易倒置炎症和自身免疫疾病，包括呼吸道感染、皮肤感染、视网膜病变等。胰岛作为胰腺分泌胰岛素的唯一组成部分，是许多大小不等的和形状不定的胰岛细胞团，散在分布于胰腺的不同部位，可控制糖的代谢，维持体内血糖稳定在一个正常波动水平。在现今，治疗糖尿病(尤其是1型糖尿病)最理想的方法是胰岛移植(世界华人消化杂志2012年11月28日；20(33)：3186-3190)。现在主流的从供体获得胰岛的机械分离法，持续用机械力和消化液的流动来冲击胰腺达到消化的目的，比如专利(专利号：201210563477.1)、(专利号：200980156514.3)、(专利号：201210222446.X)、(专利号：200510040622.8)、(专利号：200580043739.X)以及(专利号：201410196765.7)。然而，这些方法分离胰岛，存在胰岛容易破碎，过滤时胰岛混合液容易丢失，消化分离所用时间较长影响胰岛活性，胰岛纯度不高，设备不易购买或者昂贵，人力物力耗费较多等缺点。本专利技术通过创新改进现有分离纯化装置，试图克服上述缺点。
技术实现思路
本专利技术的目的是通过下述技术方案实现的。1.一种胰岛分离纯化装置，其特征在于，该装置包括多节两端开口的离心管身，离心管帽，不同网孔尺寸的多层滤网，用于胰岛消化、分离纯化及收集。2.根据权利要求1所述的胰岛分离纯化装置，其特征在于，所述离心管身两端均有螺纹开口，能实现与对应离心管帽或另一节离心管身的端端组装吻合。3.根据权利要求1所述的胰岛分离纯化装置，其特征在于，所述离心管壁上有刻度值，用于计算管内液体量。4.根据权利要求1所述的胰岛分离纯化装置，其特征在于，所述离心管外壁上有磨砂表面，用于作标记之用。5.根据权利要求1所述的胰岛分离纯化装置，其特征在于，所述离心管身含有一节或多节短管身，用于增加管内空间和增加滤过次数。6.据权利要求5所述的胰岛分离纯化装置，其特征在于，所述短管身中部横截面处可镶嵌有筛网。7.根据权利要求1和权利要求6所述的胰岛分离纯化装置，其特征在于，所述滤网网孔尺寸为3-1000um。8.根据权利要求1和权利要求5、6、7所述的胰岛分离纯化装置，其特征在于，所述含滤网的短管身可有不同组合方式组装，以实现不同胰岛尺寸的消化分离目的。9.根据权利要求1所述的胰岛分离纯化装置，其特征在于，所述离心管(包括离心管身和管帽)和滤网由生物材料(含有PP材料、聚四氟乙烯、新型纳米或金属材料)制成。有益效果本专利技术涉及的胰岛分离方法，具有以下有益效果：(1)本专利技术涉及的胰岛分离纯化装置，利用胰腺消化液中不同组织细胞的尺寸差异(单个细胞5-30um，胰岛70-220um，支持组织块＞600um)，通过多层差异性网孔尺寸网筛过滤消化液的装置，可以一次性获得较高纯度胰岛细胞，减少胰岛耗损，提高胰岛活性和移植成功率。(2)本专利技术所涉及的胰岛分离纯化装置，利用胰腺消化液中不同组织细胞的尺寸差异，于同一只离心管内即可实现二次甚至多次消化，使胰腺消化比较完全，提高了胰岛得率，且节省消化酶的用量和消化时间。(3)本专利技术所涉及的胰岛分离纯化装置，所需设备简单，不需要额外复杂昂贵的设备，且一次实验只需两只离心管即可完成实验，极大程度上节约了成本，且本专利技术装置可以由实验员在常规实验室利用普通材料(离心管、滤网、刀片等)自己制作完成，降低生产成本，特别适合中小型实验室研究员使用，亦可实现工业化批量生产。(4)本专利技术所涉及的胰岛分离纯化装置，操作简单，不需要复杂的步骤，在常规实验室环境下即可进行，且消化过程人为干预少，减少细胞污染的可能性，且节省人力，节省时间，提高实验效率和成功率。附图说明图1本专利技术装置示意图：1离心管帽；2管外壁磨砂面；3胰腺组织；4粗孔筛；5、8结合处(可拆卸)；6胰岛；7细孔筛；9单细胞混悬液；A上管节；B中管节；C下管节。具体实施方式以下将结合实例对本专利技术做进一步的说明。一种高效分离纯化小鼠胰岛方法的具体操作步骤：分离液的配制：Hanks液500mL加入羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)，配制成10mmol/L，0.22um孔径滤膜过滤除菌，调节pH值至7.2-7.4，4℃保存。消化液的配制：临用之前新鲜配制，以Hanks液溶解胶原酶V，其最终质量浓度为1mg/mL；补充氯化钙，使钙离子最终摩尔浓度为10mmol/L；添加DNA裂解酶，其最终质量浓度为0.01mg/mL。0.22um孔径滤膜过滤除菌。Ficoll 400配置：(1)Ficoll 100g+Hank’s 200ml，完全溶解后加Hank’s至400ml即为25％Ficoll溶液。(2)25％Ficoll 92ml+Hanks8ml即为23％Ficoll溶液。(3)25％Ficoll80ml+Hanks20ml即为20％Ficoll溶液。(4)25％Ficoll44ml+Hanks56ml即为11％Ficoll溶液。双硫腙(DTZ)染料：取DTZ粉末10mg溶于3ml无水乙醇，加入50ul浓氨水，再加Hanks液12ml，4°储存备用。临用前用Hanks液按1∶100稀释，0.22um孔径滤膜过滤除菌。本专利技术装置方法组：(1)胰腺的获取：选取实验小鼠BALB/C，麻醉之(按10％水合氯醛(0.05ml/10g)*体重)，腹部消毒(75％乙醇)，开腹；找到十二指肠壶腹部，用丝线贴近十二指肠结扎壶腹部；沿胆囊管找到胆总管，靠近肝门处向胰头方向用5号头皮针进针，结扎固定针头；剪破心脏放血；沿头皮针缓慢注入4度预冷胶原酶V(1g/L)2mL，使胰腺充分膨胀，立即剪除胃与横结肠之间的大网膜及脾脏，沿十二指肠边缘自十二指肠向小肠方向剥离胰腺组织.剩余部分沿胰腺边缘完整取出，置 于本专利技术所述离心管中(15ml，上层滤网孔径600um，下层滤网孔径60um)。(2)胰腺的消化：向步骤(1)所述离心管内加入胶原酶V(1g/L)6mL，覆盖所述胰腺，置于恒温水浴锅(37度)消化(约15min)。当胰腺呈现融化现象，震荡消化液变浑浊，出现乳糜样时，倒置离心管，使消化液与胰岛组织分离，终止消化。(3)胰岛的纯化、离心：取出步骤(2)中包含下层滤网的离心管节，并倒置于另一离心管(含60um网孔)管口，用Hank’s液冲洗网上残留组织团，从离心管两端滤网反复冲洗数次，动作需轻柔。残留于滤网上沉淀物即为纯化后的完整胰岛，用RMPI-1640培养基(含10％NBS)2ml重悬，混匀，于37度细胞培养箱静置、备用。(4)二次消化：对于残留于600um滤网上的未消化完全的胰腺组织块，重复上述步骤，利用上次未耗尽的胶原酶或重新加入胶原酶V(1g/L)2mL，继续消化未消化完成胰腺，并分离、收集胰岛细胞。对照组为(传统方法组)：(1)胰腺的获取：选取实验小鼠BALB/C，麻醉之(按10％水合氯醛(0.05ml/10g)*体重)，腹部消毒(75％乙醇)，开本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种胰岛分离纯化装置，其特征在于，该装置包括多节两端开口的离心管身，离心管帽，不同网孔尺寸的多层滤网，用于胰岛消化、分离纯化及收集。
【技术特征摘要】
1.一种胰岛分离纯化装置，其特征在于，该装置包括多节两端开口的离心管身，离心管帽，不同网孔尺寸的多层滤网，用于胰岛消化、分离纯化及收集。2.根据权利要求1所述的胰岛分离纯化装置，其特征在于，所述离心管身两端均有螺纹开口，能实现与对应离心管帽或另一节离心管身的端端组装吻合。3.根据权利要求1所述的胰岛分离纯化装置，其特征在于，所述离心管身上有刻度值，用于计算管内液体量。4.根据权利要求1所述的胰岛分离纯化装置，其特征在于，所述离心管身上有磨砂表面，用于作标记之用。5.根据权利要求1所述的胰岛分离纯化装置，其特征在于，所述离心管身含有一节或多节短管身，用于增加管内...
【专利技术属性】
技术研发人员：李柏峰，印宗毅，陈东英，
申请(专利权)人：中国医科大学附属第一医院，
类型：新型
国别省市：辽宁;21
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