新的欧洲型猪生殖与呼吸综合征病毒株制造技术

本发明专利技术涉及含有PRRSV的新PRRSV欧洲型株的经改良修饰的活PRRS疫苗，及所述疫苗的使用及制造方法。

【技术实现步骤摘要】
本申请是基于申请日为2012年2月14日，优先权日为2011年2月17日，申请号为201280009228.6，专利技术名称为：“新的欧洲型猪生殖与呼吸综合征病毒株”的专利申请的分案申请。
本专利技术涉及一种欧洲型猪生殖与呼吸综合征病毒(European Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus；PRRSV)的活减毒株、产生所述病毒株的方法、基于所述病毒株的疫苗、用于产生所述疫苗的方法，以及其用于治疗猪的用途。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)被许多人视为目前影响全世界养猪业的最重要的疾病。1987年，该综合征首先在美国描述为“神秘猪疾病”且迅速传遍全球。其引起生殖力严重降低，致使因继发性感染引起的死亡率增加，且导致饲料转化率及平均日增重降低。不幸的是，已证明难以控制引起PRRS的病毒。PRRS病毒(PRRSV)为一种归类于动脉炎病毒家族(family Arteriviridae)的包膜单链RNA病毒(Cavanaugh,1997)。其引起广泛的猪疾病，该猪疾病首先于1987年在美国描述为“神秘猪疾病”(Hill,1990)。该疾病在所有年龄组的猪中均表现为呼吸疾病，引起一些较年轻的猪死亡以及在繁殖适龄母猪中产生严重的生殖问题。PRRSV可经由受感染猪与易感染猪之间的直接接触传播且常常如此。在极短距离内也可能通过空气或经由精液传播。一旦感染，病毒可在成年猪血液中保留约两周，且在受感染猪中保留1至2个月或更长时间。受感染公猪可持续将病毒排在精液中长达100天以上。此长期病毒血症显著提高传播的可能性。此外，PRRS病毒可在妊娠期倒数第三期期间穿过胎盘，感染子宫内的仔猪且引起死胎或产下弱仔猪。所有类型及规模的畜群，包括健康状态良好或一般的或者来自室内或室外单元的畜群，均可感染PRRS病毒。感染畜群可能遭遇严重的生殖力降低，以及断乳后肺炎程度提高且生长缓慢。生殖期通常持续两至三个月；然而，断乳后问题经常变成地方病。生殖疾病的特征为在妊娠后期影响母猪与小母猪的流产爆发。在妊娠约109天及112天过早产下小猪。死胎及产下弱仔猪的数目增加且引起断乳前死亡率显著增加。传统上已在养殖场，特别是连续流动养殖场中见到呼吸期。然而，也可在肥育畜中见到作为猪呼吸疾病综合症(porcine respiratory disease complex；PRDC)的一部分的由PRRS病毒引起的呼吸问题。生长速率会降低，不能出售的猪的百分比增加，且断乳后死亡率升高。诊断结果指示存在与PRRS病毒相关联的高程度肺炎，以及一般视为继发感染原的多种其他微生物。细菌分离株可尤其包括猪链球菌(Streptococcus suis)、猪嗜血杆菌(Haemophilus suis)、胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)、猪放线杆菌(Actinobacillus suis)、猪肺炎霉浆菌(Mycoplasma hyopneumoniae)及多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)。通常涉及的病毒剂包括猪流感病毒及猪呼吸道冠状病毒。患病猪很少对高水平的药物治疗起反应，且全进/全出(all-in/all-out)系统已无法控制该疾病。PRRSV病毒以两种称为“美国”型与“欧洲”型的基因型存在，这种基因型共享约50％序列同源性(Dea S等人，(2000).Arch Virol 145:659-88)。此两种基因型也可以其免疫性质而加以区分。有关各种分离株的大部分序列信息是基于结构蛋白，即仅占病毒基因组约4％的包膜蛋白GP5，而关于非结构蛋白(nsp)所知甚少。PRRSV的分离及疫苗的制造已在多个公开案中描述(WO 92/21375、WO 93/06211、WO 93/03760、WO 93/07898、WO 96/36356、EP 0 676 467、EP 0 732 340、EP 0 835 930)。疫苗接种为减轻PRRS负担的关键方法，因为自PRRS感染恢复的猪将发展免疫反应，此免疫反应在正常情况下将保护猪免遭相同病毒株再次感染。然而，PRRS病毒能够发生变化(通过突变或重组的方式)；因此，可能出现新的病毒株。在这种状况下，病毒株之间的交叉保护可能不存在，且在先前已感染的农场中可能观察到新的爆发。因此，持续需要其他疫苗。
技术实现思路
本专利技术涉及欧洲基因型的经改良修饰的活PRRS疫苗，及可用于制造所述疫苗的新PRRSV株。特别是，本专利技术提供经改良的PRRS病毒株，其已根据布达佩斯条约的规定保藏在欧洲细胞培养物保藏中心(ECACC)登录号ECACC 11012501及ECACC 11012502(各自于2011年1月25日保藏)下，或上述病毒株之一的任何后代或子代。在具体实施方案中，本专利技术描述一种欧洲型猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，其为保藏在欧洲细胞培养物保藏中心(ECACC)登录号ECACC 11012501或登录号ECACC 11012502下的病毒株。PRRSV的特征在于通过在细胞培养物中传代至少36次来使该病毒减毒，使得当将经修饰的病毒给予至易感染PRRSV的猪或其他哺乳动物时，其无法引起PRRSV疾病的临床征象，但能够诱导使哺乳动物对PRRSV的病原性形式免疫的免疫反应。亦涵盖一种制备保藏在欧洲细胞培养物保藏中心(ECACC)登录号ECACC 11012502下的活减毒PRRSV或自保藏在登录号ECACC 11012501下的亲本株减毒的PRRSV的方法，其包括使MA 104生长的欧洲型PRRSV适应非MA 104哺乳动物细胞。本专利技术的另一方面涵盖一种用于保护猪免遭PRRSV感染的疫苗，其包含保藏在欧洲细胞培养物保藏中心(ECACC)登录号ECACC 11012502下的活减毒PRRSV或自保藏在登录号ECACC 11012501下的亲本株减毒的PRRSV及药学上可接受的载剂。该种疫苗宜进一步包含一或多种非PRRSV的减毒或钝化病原体或其抗原性物质。举例而言，非PRRSV病原体可选自假狂犬病毒(Pseudorabies virus)、猪流感病毒(Porcine influenza virus)、猪细小病毒(Porcine parvovirus)、传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、猪丹毒杆菌(Erysipelo rhusiopathiae)、支气管败血性博德氏杆菌(Bordetella bronchiseptica)、猪霍乱沙门氏杆菌(Salmonella cholerasuis)、副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、猪链球菌(Streptococcus suis)、猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)及胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)。在其他实施方案中，疫苗可进一步包含一或多种选自以下的其他欧洲型PRRSV株：保藏在登录号莱利本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含欧洲型猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的组合物，所述PRRSV是保藏在欧洲细胞培养物保藏中心(ECACC)登录号ECACC 11012502下的病毒株。

【技术特征摘要】
2011.02.17 US 61/444,0741.一种包含欧洲型猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的组合物，所述PRRSV是保藏在欧洲细胞培养物保藏中心(ECACC)登录号ECACC 11012502下的病毒株。2.如权利要求1的组合物，其中所述PRRSV通过在细胞培养物中传代至少36次来减毒，以使得当该经修饰的病毒给予至易感染PRRSV的猪或其他哺乳动物时，其无法引起PRRSV疾病的临床征象，但能够诱导使该哺乳动物对PRRSV的病原性形式免疫的免疫反应。3.根据权利要求1或2的组合物，其为冷冻干燥形式。4.根据权利要求1至3任一项的组合物，其中所述组合物配制为允许每剂量施用101至107个病毒颗粒，或其中所述组合物包含至少约107个病毒颗粒。5.根据权利要求1至4任一项的组合物，其进一步包含一种或多种减毒的或失活的非PPRSV病原体或其抗原性材料。6.根据权利要求5的组合物，其中所述非PPRSV病原体选自假狂犬病毒、猪流感病毒、猪细小病毒、传染性胃肠炎病毒、大肠杆菌、猪丹毒杆菌、支气管败血性博德氏杆菌、猪霍乱沙门氏杆菌、副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪链球菌、猪肺炎支原体及胸膜肺炎放线杆菌。7.根据权利要求1至6任一项的组合物，进一步包含佐剂，任选地选自下组：MCP-1、α-生育酚(例如α-生育酚乙酸酯)、睡眠嗜血杆菌(Haemophilus sonmus)级分、卡波普(carbopol)及其组合。8.根据权利要求1至7任一项的组合物，用作药物的用途。9.根据权利要求1至7任一项的组合物，用于以下方法中的用途：-治疗猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染或降低其严重程度，-预防PRRSV感染，-诱导产生对PRRS病毒的抗体反应，和/或-减轻与PRRSV感染相关联的一种或多种临床症状的严重程度，其中所述一种或多种临床症状优选选自下组：肺损伤、厌食症、皮肤变色、昏睡、呼吸征象、干瘪仔猪、咳嗽、腹泻及其组合。10.根据权利要求7的组合物，用于以下方法中的用途：-当与不接受与所述佐剂组合的免疫原性组合物的动物相比时，降低肺损伤的百分比达至少50％，-当与不接受与所述佐剂组合的免疫原性组合物的动物相比时，降低动物中的病毒血症达至少45％。11.用于根据权利要求8至10任一项的用途的组合物，其中所述方法包括向以下项施用治疗量的PRRSV抗原的步骤：-约3周龄或更年幼的小猪；-约3周龄和4周龄之间的猪，-约4周和16周龄之间的猪，其中所述猪任选的在5周至6周龄之间或9周至15周龄之间或7周至10周龄之间，或-16周以上的猪，其中所述16周以上的猪任选的是小母...

【专利技术属性】
技术研发人员：K伯加德，J科罗尔，SM莱顿，V奥林格，FX奥维隆，S佩施，MD皮昂特科夫斯基，MB鲁夫，P厄特里，EM沃恩，
申请(专利权)人：贝林格尔·英格海姆维特梅迪卡有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE