用于确定疾病状态的方法技术

本发明专利技术涉及一种用于确定植入物周围疾病的状态的方法，所述方法包括下述步骤：在离体样品中定量形成集合的一组标记的一种或多种受调节的标记的表达水平，所述一种或多种受调节的标记与纤溶酶原系统和/或炎症和/或蛋白水解活性或它们的组合，或它们的比率有关；和通过将在步骤a中获得的表达水平与参考值进行对比，确定植入物周围疾病的状态。本发明专利技术也涉及一种用于实施本发明专利技术的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于诊断牙周和植入物周围疾病的状态的方法。
技术介绍
每年进行大量牙植入物康复手术。与绝大部分植入治疗成功的病例相比，一定数量的患者发生植入物周围疾病(peri-implant disease)。我们区分两种植入物周围疾病状态：粘膜炎，其涉及软组织炎症；和植入物周炎，其除了炎症以外还涉及支持骨的植入物的损失。粘膜炎和植入物周炎也可以视作植入物周围的组织病症。两种状态可能表现出蛋白水解活性，但是在不同的量级。在某些情况下，利用机械清创术的非外科手术治疗和用3％过氧化氢的冲洗可以是足够有效的治疗。在持续的植入物周围疾病的情况下，经常进行与表面清创术联合的切除外科手术。通过外科手术矫治在患病的植入部位处的骨缺陷(例如骨峰)，可以减少袋深度并提供促进口腔卫生的软组织形态。但是，某些患者对治疗的反应不够好，并且尽管有良好的菌斑控制和最小的植入物周围粘膜炎症，在某些情况下可能复发包括化脓和进行性骨丢失的症状。这样的复发的原因不明。即将需要对植入物周围疾病的病因学的改进的理解和对允许早期检测和干预的更灵敏诊断工具的开发；因此，增加易感患者中植入治疗的预测性。此外，为了增加呈现骨丢失征象的植入物的存活率，需要在疾病进展的早期阶段的临床干预。这需要疾病状态的及早确定，并且因此，需要更灵敏的技术。植入物周围疾病的诊断通常基于与骨丢失的放射摄影证据相组合的临床测量。植入物周炎在临床上常常转化为袋的形成和加深，植入物周围上皮密封的破坏，探查时出血(BoP)，化脓和进行性骨丢失。这些诊断方法常常联合使用用于诊断植入物周围疾病作为植入物支持组织中广泛的病理性改变的指征。这样的诊断方法的有限灵敏度和/或特异性使得难以及早检测病理性改变。很多作者已经研究了使用对菌斑样品中的齿龈缝隙液体中的遗传标记的分析作为可能的用于植入物周围疾病的预后和诊断工具的可行性，并有多变的结果。一种常常研究的标记是白介素-1β(IL-1β)，它是一种参与多种生物过程的促炎细胞因子，所述生物过程包括免疫调节，炎症和结缔组织代谢。IL-1β刺激骨质吸收并抑制骨形成(Panagakos等人，Int J Oral Maxillofac Implants 1996，11：794-799)。IL-1β主要由巨噬细胞产生，但也由其它细胞(包括嗜中性粒细胞性粒细胞)产生。几项研究已经表明，IL-1β在植入物周围的缝隙液体中的存在代表植入物周围疾病的征象。已经报道，与健康部位相比(Panagakos等人，Int J Oral Maxillofac Implants 1996，11：794-799；Kao等人，Int J Oral Maxillofac Implants 1995，10：696-701；Murata等人，Clin Oral Impl Res 2002，13：637-643)并且与植入物周围粘膜炎部位相比(Murata等人，Clin Oral Impl Res 2002，13：637-643)，并且此外当对比具有植入物周炎的早期和晚期征象的受试者时，植入物周炎的显著升高的水平。但是，Hultin等人(Clin Oral Impl Res 2002，13：349-358)证实了相矛盾的结果，在植入物周炎和健康部位之间没有IL-1β表达的差异。白介素-8(IL-8)是嗜中性粒细胞的一种促炎症标记和趋化因子。它参与调节牙周炎(Nassar等人，Infection and Immunity 2002，268-276；Goutoudi等人，Int J Dent 2012；2012：362905)和植入物周炎(Petkovic等人，Int J Oral Maxillofac Surg 2010，39(5)：478-85)中对微生物侵入的先天性免疫应答。Nowzari等人(Clin Implant Dent Relat Res 2008，10(3)：166-173)研究了健康受试者中植入物和牙周围的细胞因子存在，并且发现与牙相比在植入物周围IL-8的两倍增加。白介素-6(IL-6)是一种多功能细胞因子，其由多种细胞产生以调节血细胞生成，炎症，免疫应答和骨体内稳态(Yoshitake等人，J Biol Chem 2008，283∶11535-11540)。在Liskmann等人的研究(Int J Oral Maxillofac Implants 2006，21(4)：543-50)中，与来自健康受试者的唾液样品相比，来自患有植入物周围疾病的受试者的唾液样品中的IL-6水平显著升高。Konttinen等人(Int J Periodontics restorative Dent 2006，26∶135-141)测量了与健康植入物部位相比在具有植入物周炎的失败植入物处统计学上更高水平的IL-6。基质金属蛋白酶(MMP)是参与从受损害的组织降解和除去胶原的蛋白水解酶。MMP由存在于炎症部位的细胞响应于刺激(诸如脂多糖和细胞因子)而分泌(Aboyoussef等人，Int J Oral Maxillofac Implants 1998，13：689-696)。胶原酶和明胶酶是MMP超家族的两个亚家族。等人的发现(Clin Oral Impl Res 2003，14：158-165)指示，增加的MMP-8(胶原酶-2)的水平可能与炎性植入物周围疾病的活跃阶段相关。还已经研究了MMP-9(明胶酶B)的表达；同时Ma等人(Clin Oral Impl Res 2003，14：709-713)表明MMP-9和骨水平之间的关联，Aboyoussef等人(Int J Oral Maxillofac Implants 1998，13：689-696)未能表明健康和植入物周炎部位之间的任何显著差异。认为MMP和基质金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP)之间的失衡会触发细胞外基质，基膜和牙槽骨的降解，并且因此引发牙周病(Sorsa等人，Oral Diseases 2004，10：311-318)。已经提出，唾液MMP-8，TIMP-1和尤其是它们的比率是晚期牙周炎的检测中的潜在候选物(Gursoy等人，Clin Periodontol 2010，37∶487-493)。在生理学以及病理学组织重塑中，纤溶酶原系统在细胞外蛋白酶解中最重要(由Collen，Thromb Haemost 1999，82∶259-270综述)。纤溶酶是一种具有广泛活性的蛋白酶，其能够降解许多胞外蛋白以及活化潜在的胶原酶和其它金属蛋白酶(Werb等人，New Eng J Med 1977，296：1017-1023；Matrisian，Bioessays 1992，14：455-463)。纤溶酶通过切割非胶原ECM蛋白直接作用于胞外基质(ECM)，并且还通过活化一系列其它酶(尤其是对不同结缔组织蛋白具有特异性的基质金属蛋白酶(MMP))的前体形式而间接地起作用。通过纤溶酶原系统与其它组织降解系统之间的相互作用，纤溶酶原代表一种重要的潜在蛋白水解潜能，并且其活化的严格控制对于维护组织的完整性而言是重要的。纤溶酶通过纤溶酶原激活物(丝氨酸蛋白酶，已经鉴别出它的两种类型：尿激酶型，u-PA，和组织型，t-PA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于确定植入物周围疾病的状态的方法，其中所述方法包括以下步骤：a)在离体样品中定量选自由以下组成的组的一种或多种受调节的标记的表达水平：tPA，IL‑4，IL‑6，IL‑10，IL‑12，IL18，TIMP‑1和PAI‑2，或它们的任意组合，或它们的任意比率；和/或定量下述标记组合中的一种或多种的表达水平：tPA和tPA/PAI‑2；PAI‑2和tPA/PAI‑2；tPA，PAI‑2和tPA/PAI‑2；IL‑1β和IL‑8；IL‑8和PAI‑2；IL‑6，TIMP‑1和PAI‑2；tPA和PAI‑2；IL‑1β，IL‑8和IL‑6；IL‑1β，IL‑8，IL‑6和TIMP‑1；IL‑1β，IL‑8，IL‑6，TIMP‑1和tPA；IL‑1β，IL‑8，IL‑6，TIMP‑1和PAI‑2；IL‑1β，IL‑8，PAI‑2和tPA；IL‑1β，IL‑8和PAI‑2；IL‑1β，IL‑8和tPA；IL‑1β，IL‑8和tPA/PAI‑2；IL‑1β，IL‑8，TIMP‑1和PAI‑2；IL‑1β，IL‑8，TIMP‑1和tPA；IL‑1β和PAI‑2；和b)通过将在步骤a)中获得的表达水平与一个或多个参比表达水平进行对比，确定植入物周围疾病的状态。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.02.06 GB 1402036.61.一种用于确定植入物周围疾病的状态的方法，其中所述方法包括以下步骤：a)在离体样品中定量选自由以下组成的组的一种或多种受调节的标记的表达水平：tPA，IL-4，IL-6，IL-10，IL-12，IL18，TIMP-1和PAI-2，或它们的任意组合，或它们的任意比率；和/或定量下述标记组合中的一种或多种的表达水平：tPA和tPA/PAI-2；PAI-2和tPA/PAI-2；tPA，PAI-2和tPA/PAI-2；IL-1β和IL-8；IL-8和PAI-2；IL-6，TIMP-1和PAI-2；tPA和PAI-2；IL-1β，IL-8和IL-6；IL-1β，IL-8，IL-6和TIMP-1；IL-1β，IL-8，IL-6，TIMP-1和tPA；IL-1β，IL-8，IL-6，TIMP-1和PAI-2；IL-1β，IL-8，PAI-2和tPA；IL-1β，IL-8和PAI-2；IL-1β，IL-8和tPA；IL-1β，IL-8和tPA/PAI-2；IL-1β，IL-8，TIMP-1和PAI-2；IL-1β，IL-8，TIMP-1和tPA；IL-1β和PAI-2；和b)通过将在步骤a)中获得的表达水平与一个或多个参比表达水平进行对比，确定植入物周围疾病的状态。2.根据前述权利要求中的一项或多项所述的方法，其中所述一种或多种受调节的标记选自由以下组成的组：tPA和PAI-2，或它们的任意组合，或它们的任意比率。3.根据前述权利要求中的一项或多项所述的方法，其中所述一种或多种受调节的标记的表达水平是tPA和PAI-2之间的比率。4.根据前述权利要求中的一项或多项所述的方法，其中所述标记是tPA。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种受调节的标记选自由以下组成的组：IL-6，TIMP-1和PAI-2，或它们的任意组合，或它们的任意比率。6.根据前述权利要求中的一项或多项所述的方法，其中所述离体样品是体液或组织。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述液体是口腔液，和/或血液，和/或血清，和/或血浆，和/或唾液。8.根据权利要求6-7中的一项或多项所述的方法，其中所述液体是植入物周围缝隙液体。9.根据权利要求6所述的方法，其中所述组织是骨和/或结缔组织和/或粘膜。10.根据权利要求6和/或9所述的方法，其中所述组织是骨，和/或植入物支持组织，和/或邻近植入物的骨和/或邻近牙齿的骨。11.根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其中步骤b)的一个或多个参比表达水平是来自在不同时间点取自相同来源的离体样品的所述一种或多种受调节的标记，或它们的任意组合，或它们的任意比率的表达水平，且其中所述一种或多种受调节的标记，或它们的任意组合，或它们的任意比率的表达水平的增量调节或减量调节指示植入物周围疾病的状态。12.根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其中步骤b)的一个或多个参比表达水平是来自取自显示出植入物周炎历史的来源的离体样品的所述一种或多种受调节的标记，或它们的任意组合，或它们的任意比率的...

【专利技术属性】
技术研发人员：简·霍尔，
申请(专利权)人：诺贝尔生物服务公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH