本发明专利技术公开了脂肪干细胞联合内皮祖细胞在制备治疗糖尿病性勃起功能障碍药物中的应用，以及一种用于治疗糖尿病性勃起功能障碍的干细胞联合制剂，是由人来源的脂肪干细胞（ADSCs）和人内皮祖细胞（EPCs）混合配制而成，充分发挥了ADSCs和EPCs两种干细胞的优势，利用ADSCs的旁分泌作用促进EPCs的增殖和分化，从而修复受损伤的血管内皮，显著改善大鼠糖尿病性勃起功能障碍症状；而且克服了ADSCs无法向血管内皮分化和EPCs移植入体内后存活率不高，移植后其增殖、分化能力下降的缺点。本发明专利技术ADSCs联合EPCs治疗糖尿病性勃起功能障碍的技术操作简单，制备简便，具有非常重要的临床意义和广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药
更具体地，涉及一种用于治疗糖尿病性勃起功能障碍的干细胞联合制剂。
技术介绍
糖尿病性勃起功能障碍（diabetic erectile dysfunction，DED）患者逐年增多，现有疗法对其疗效不佳。目前临床一线疗法——5型磷酸二酯酶抑制剂（phosphodiesterase type 5 inhibitor，PDE-5I）治疗DED的有效率仅50%～60% 。现有研究认为DED的始发及核心发病机制为阴茎海绵体血管内皮功能障碍，在此基础上继发勃起相关的神经、平滑肌等损害及一系列病理生理变化。我们通过研究DED大鼠模型证实其海绵体内皮细胞eNOS、VEGF及其受体表达均下降，Jesmin等发现DED大鼠海绵体血管内皮细胞凋亡增加，导致一氧化氮（NO）释放减少，引起血管内皮细胞功能障碍；之后可造成海绵体血管壁增厚导致小动脉和毛细血管管腔的狭窄、血栓形成，导致海绵体组织缺血缺氧，进而导致阴茎勃起功能减退，而阴茎微小血管病变进一步造成神经、平滑肌缺血缺氧，加重勃起功能障碍。近年来，干细胞移植疗法的研究给DED的治疗带来了希望。脂肪干细胞（ADSCs）移植治疗DED，能够在一定程度上改善勃起功能，可通过分泌VEGF、HGF、 FGF2、CXCL5等生长因子改善局部微环境，促进局部功能细胞（如血管内皮细胞）的增殖，改善了血管内皮功能；但是ADSCs在体内不能直接分化为血管内皮细胞，限制了其疗效。2011年Gou等首次应用EPCs移植治疗DED，试图依靠EPCs的增殖、分化以修复受损的海绵体内皮功能及补充外周血的EPCs；结果发现EPCs确实可以整合到海绵体的血管区域并增殖、分化为内皮细胞，移植后DED大鼠的勃起功能得到部分改善，但疗效欠佳。我们的研究也证实了上述结果，同时发现EPCs移植入体内后存活率不高，移植后其增殖、分化能力下降，限制了其疗效和应用前景。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有治疗糖尿病性勃起功能障碍药物的不足以及干细胞在该领域应用的缺陷，提供一种合理、方便、治疗效果更好的联合干细胞制剂，涉及两种干细胞在疾病治疗中的应用，具体是脂肪干细胞（ADSCs）和内皮祖细胞（EPCs）联合在制备治疗糖尿病性勃起功能障碍药物中的应用。本专利技术的目的是提供脂肪干细胞联合内皮祖细胞在制备治疗糖尿病性勃起功能障碍药物中的应用。本专利技术另一目的是提供一种用于治疗糖尿病性勃起功能障碍的干细胞联合制剂。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：脂肪干细胞（ADSCs）联合内皮祖细胞（EPCs）在制备治疗糖尿病性勃起功能障碍药物中的应用。其中，优选地，所述内皮祖细胞为人内皮祖细胞。优选地，所述脂肪干细胞和内皮祖细胞的比例为1～2：1～2。更优选地，所述脂肪干细胞和内皮祖细胞的比例为1：1。优选地，所述脂肪干细胞的浓度为1.0～10.0×106/ml。更优选地，所述脂肪干细胞的浓度为3.0～6.0×106/ml。最优选地，所述脂肪干细胞的浓度为5.0×106/ml。优选地，所述内皮祖细胞的浓度为1.0～10.0×106/ml。更优选地，所述内皮祖细胞的浓度为3.0～6.0×106/ml。最优选地，所述内皮祖细胞的浓度为5.0×106/ml。一种用于治疗糖尿病性勃起功能障碍的干细胞联合制剂，包含有效量的脂肪干细胞（ADSCs）联合内皮祖细胞（EPCs）。优选地，在所述的干细胞联合制剂中，脂肪干细胞和内皮祖细胞的比例为1～2：1～2。更优选地，在所述的干细胞联合制剂中，脂肪干细胞和内皮祖细胞的比例为1：1。另外，更优选地，所述干细胞联合制剂是由脂肪干细胞、内皮祖细胞和PBS混合制备而成。优选地，所述脂肪干细胞的浓度为1.0～10.0×106/ml。更优选地，所述脂肪干细胞的浓度为3.0～6.0×106/ml。最优选地，所述脂肪干细胞的浓度为5.0×106/ml。优选地，所述内皮祖细胞的浓度为1.0～10.0×106/ml。更优选地，所述内皮祖细胞的浓度为3.0～6.0×106/ml。最优选地，所述内皮祖细胞的浓度为5.0×106/ml。优选地，所述的PBS为1×PBS。具体优选地，所述干细胞联合制剂的制备方法如下：分别将脂肪干细胞和内皮祖细胞离心后用1×PBS洗涤1～3次（优选1次），并用细胞计数板计数，加入1×PBS中分别制备成细胞浓度为1.0～10.0×106/ml的1×PBS制剂，将两种制剂按照1～2：1～2（优选1：1）的比例混合，得到脂肪干细胞和内皮祖细胞联合注射液。其中，优选地，是加入1×PBS中分别制备成细胞浓度为3.0～6.0×106/ml的1×PBS制剂。更优选地，是加入1×PBS中分别制备成细胞浓度为5.0×106/ml的1×PBS制剂。另外，上述干细胞联合制剂在制备防治糖尿病性勃起功能障碍的药物中的应用，以及由此制备得到的防治糖尿病性勃起功能障碍的药物，也都在本专利技术的保护范围之内。本专利技术关于用于治疗糖尿病性勃起功能障碍的干细胞联合制剂中，脂肪干细胞（ADSCs）是源自脂肪组织的间充质干细胞，这种细胞扩增能力强，分泌细胞因子种类多，具有多向分化潜能，免疫原性低，获取方法简单。ADSCs治疗勃起功能障碍一般采用阴茎海绵体内注射的方式，通过旁分泌作用改善内皮功能是治疗的关键。而EPCs是一类能定向增殖分化为成熟血管内皮细胞的前体细胞，主要起源于骨髓，能定向迁移和粘附于受损伤的血管内壁，一方面分化为成熟血管内皮细胞，直接形成新生内皮修复损伤血管；另一方面释放大量促血管生长因子（如VEGF等），刺激损伤区域周围内皮细胞增殖、迁移，加快受损血管的再内皮化，从而快速修复血管内皮功能。EPCs确实可以整合到海绵体的血管区域并增殖、分化为内皮细胞，移植后DED大鼠的勃起功能得到部分改善，但疗效欠佳，EPCs移植入体内后存活率不高，移植后其增殖、分化能力下降，限制了其疗效和应用前景。本专利技术充分发挥了ADSCs和EPCs两种干细胞的优势，利用ADSCs的旁分泌作用促进EPCs的增殖和分化，从而修复受损伤的血管内皮，显著改善大鼠糖尿病性勃起功能障碍症状；而且克服了ADSCs无法向血管内皮分化和EPCs移植入体内后存活率不高，移植后其增殖、分化能力下降的缺点。从而达到取长补短的目的。另外，本专利技术的方案中，对于脂肪干细胞（ADSCs）和内皮祖细胞（EPCs）的来源和制备方法并不做严格的限制，可以是任意已知的制备方法或获取方法。如已经授权的专利技术专利200910196288.3公开的一种获得内皮祖细胞的方法，将市购的骨髓细胞孵育即可得到的悬浮细胞为内皮祖细胞。专利技术专利201010568873.4公开的一种脂肪干细胞的分离培养方法，以及专利技术专利201210018269.3公开的一种脂肪干细胞的获取方法等。本专利技术实施例部分提供了一种可实施的选择方案：（1）脂肪干细胞的分离培养局麻下通过抽脂术获取人皮下脂肪（如患者腹部皮下脂肪），I型胶原酶消化法获取原代脂肪干细胞，离心得细胞沉淀，加入基础培养基重悬后，在饱和湿度、5%CO2、37℃标准环境下，利用细胞培养液培养后接种到培养瓶中，培养并适时传代。细胞消化时，使用EDTA-胰酶消化，PBS洗涤细胞，ADSCs重新接种于心的培本文档来自技高网...
【技术保护点】
脂肪干细胞联合内皮祖细胞在制备治疗糖尿病性勃起功能障碍药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.脂肪干细胞联合内皮祖细胞在制备治疗糖尿病性勃起功能障碍药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述内皮祖细胞为人内皮祖细胞。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脂肪干细胞和内皮祖细胞的比例为1～2：1～2。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述脂肪干细胞的浓度为1.0～10.0×106/ml，所述内皮祖细胞的浓度为1.0～10.0×106/ml。5.一种用于治疗糖尿病性勃起功能障碍的干细胞联合制剂，其特征在于，包含有效量的脂肪干细胞和内皮祖细胞。6.根据权利要求5所述的干细胞联合制剂，其特征在于，所述脂肪干细胞和内皮祖细胞的比例为1～2：1～2。7.根据权利要求5所述的干细胞联合制剂，其特征在于，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓春华，刘贵华，孙祥宙，陈鑫，杨其运，韩大愚，夏凯，
申请(专利权)人：中山大学附属第一医院，中山大学附属第六医院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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