橘红珠药材的特征图谱快速鉴别方法技术

本发明专利技术涉及一种橘红珠药材的高效液相特征图谱快速鉴别方法。所述方法是：在特殊的色谱柱条件下，将供试品高效液相特征图谱与对照图谱对比，以柚皮苷峰为参照峰，包括参照峰在内，所得供试品特征图谱有4个与对照图谱对应的共有特征峰，相对保留时间分别为：1.00、1.49、1.74和3.19；各峰相对保留时间在规定值的±5％之内，为检测条件对橘红珠药材进行快速鉴别。该方法科学全面，具有专属性强、稳定性高、重复性好、鉴别快速等优点，尤其适合规模化生产的检测和鉴别。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种橘红珠药材的高效液相特征图谱快速鉴别方法。
技术介绍
橘红珠，又名橘珠、橘胎，为芸香科植物化州柚(Citrus grandis ‘Tomentosa’)的未成熟幼小果实，收载于《中药大辞典》(下册)，具有止咳、化痰、平喘等功效。橘红珠的活性化学成分主要为黄酮类(如柚皮苷、野漆树苷)、香豆素类(如橙皮内酯水合物、异橙皮内酯)。彭维等(橘红珠质量标准的研究[J].中南药学,2006,04:257-259)采用聚酰胺薄膜层析法鉴别橘红珠中的柚皮苷、野漆树苷；采用硅胶G薄层层析法鉴别其中的橙皮内酯水合物、异橙皮内酯；采用高效液相色谱法测定其中的柚皮苷含量。但鉴于薄层鉴别法受温度、湿度以及载样量等诸多因素影响，存在样品可鉴别的成分数量较少，不能全面反映中药材内在质量；重现性差等缺点。
技术实现思路
为克服以上缺陷，本专利技术提供了一种橘红珠药材的特征图谱快速鉴别方法，通过对照图谱对橘红珠药材的真伪及品质优劣进行快速鉴别。所述鉴别方法包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备，取橘红珠药材粉末0.5g，精密称定，加甲醇10ml，超声处理30min，放冷，用甲醇补足失重，过滤，取滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备，精密称取柚皮苷对照品10.16mg、野漆树苷对照品10.25mg、橙皮内酯水合物对照品10.45mg、异欧前胡素5.48mg，加甲醇溶解，摇匀，分别制成每1ml含柚皮苷508μg、野漆树苷16.4μg、橙皮内酯水合物8.36μg、异欧前胡素54.8μg的对照品溶液；(3)色谱条件，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以6％醋酸为流动相B；梯度洗脱，洗脱梯度为0-25min内，保持流动相A为30％，流动相B为70％；25-75min内，流动相A由30％到45％，流动相B由70％到55％；在75-110min内，流动相A由45％到100％，流动相B由55％到0％；在110-120min内，100％为流动相A；流速为1ml/min；检测波长为320nm；(4)对照图谱的建立，按上述供试品溶液、对照品的制备方法及色谱条件对10批以上的橘红珠样品进行HPLC分析，得到相应特征图谱；将上述特征图谱输入中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对主要色谱峰进行匹配，生成对照图谱，对照图谱包括柚皮苷、野漆树苷，橙皮内酯水合物和异欧前胡素4个特征峰。(5)鉴别方法，将供试品特征图谱与对照图谱对比，以柚皮苷峰为参照峰，包括参照峰在内，所得供试品特征图谱有4个共有特征峰，相对保留时间分别为：1.00、1.49、1.74和3.19；各峰相对保留时间在规定值的±5％之内。相对于现有技术，本专利技术可较全面、准确快速鉴别橘红珠药材的真伪及品质优劣。该方法具有专属性强、稳定性高、重复性好等优点，尤其适合规模化生产的检测和鉴别。附图说明图1是橘红珠药材的对照特征图谱；图2是精密度试验结果图谱；图3是重复性试验结果图谱；图4是稳定性试验结果图谱；图5是12批橘红珠样品的特征图谱检测结果图谱；图6是10批沙田柚样品的特征图谱检测结果图谱；图7是10批蜜柚样品的特征图谱检测结果图谱；图8是橘红珠(化州柚)与其混淆品共有模式的比较图谱。具体实施方式下面通过具体的实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1 橘红珠药材特征图谱测定1实验材料电子分析天平(BP211D，瑞士Sartorius公司)；超声波清洗器(KQ3200E，昆山市超声仪器有限公司，超声频率：40KHz，超声功率：150W)；旋转蒸发仪(N-1000，日本东京理化Eyela公司)；超纯水器(Simplicity 185personal，美国Millipore公司)；Dionex MultiMate3000型DGLC双三元梯度泵高效液相色谱仪；Dionex P680型高效液相色谱仪；色谱柱：依利特Hypersil BDS C18(4.6mm×250mm,5μm)、戴安Acclaim 120 C18(4.6mm×250mm,5μm)、Welth Materials Colume XB-C18(4.6mm×250mm,5μm)。异欧前胡素、柚皮苷对照品，购自中国药品生物制品检定所；野漆树苷对照品，购自上海同田生物技术有限公司；橙皮内酯水合物对照品为实验室自制，HPLC检测纯度高于98％。甲醇(色谱纯)，超纯水，冰醋酸(分析纯)。橘红珠药材12批，采集于化州柚的主产区，即广东、广西两省，经鉴定为芸香科植物化州柚(Citrus grandis ‘Tomentosa’)幼果。2实验方法2.1对照品溶液的制备精密称取柚皮苷对照品10.16mg、野漆树苷对照品10.25mg、橙皮内酯水合物对照品10.45mg、异欧前胡素5.48mg，加甲醇溶解，摇匀，分别制成每1ml含柚皮苷508μg、野漆树苷16.4μg、橙皮内酯水合物8.36μg、异欧前胡素54.8μg的对照品溶液。2.2供试品溶液的制备取橘红珠药材粉末(过二号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇10ml，称定重量，超声处理(功率120W，频率40kHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。2.3色谱条件以甲醇为流动相A，以6％醋酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为1ml/min，检测波长为320nm。梯度洗脱方式表3实验结果3.1方法学考察(1)精密度试验取批号为TG-01的橘红珠样品，制成供试品溶液，连续测定6次，并使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)软件进行相似度评价，结果见图2、表1。结果表明仪器精密度良好。表1 精密度相似度评价(2)重复性试验取批号为TG-01的橘红珠样品，平行制备6份供试品溶液，进样测定，并使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)软件进行相似度评价，结果见图3、表2。结果表明重复性良好。表2 重复性相似度评价(3)稳定性试验取批号为TG-01的橘红珠样品，制成供试品溶液，分别在室温下放置0、2、4、6、12、24h后进样测定，并使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)软件进行相似度评价，结果见图4、表3。结果表明供试品溶液在24h内稳定性良好。表3 稳定性相似度评价3.2橘红珠样品检测结果分别取批号为TG-01、TG-02、TG-03、TG-04、TG-05、TG-06、TG-07、TG-08、TG-09、TG-10、TG-11、TG-12十二批橘红珠样品，分别制成供试品溶液，测定，结果见图5。使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)软件，对主要色谱峰进行匹配，生成对照图谱，见图1。十二批橘红珠样品与对照色谱图基本一致，有相对应的4个特征峰。其中峰1为柚皮苷，峰2为野漆树苷，峰3为橙皮内酯水合物，峰4为异欧前胡素。以各样品中的柚皮苷为S峰，计算各自特征峰2、3、4的相对保留时间，均在规定值的±5％之内。实施例2橘红珠混淆品沙田柚、蜜柚的鉴别1实验样品沙田柚、蜜柚实验样品各十批，主要采集于广东、广西两省，经鉴定分别为沙田柚(C.grandis cv Shatian)和蜜柚(C.grandis cv Miyou)幼果。2检测结果分别取沙田柚、蜜柚样品依法进行测定，结果本文档来自技高网...

【技术保护点】
橘红珠药材的HPLC特征图谱快速鉴别方法，其特征在于包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备，取橘红珠药材粉末0.5g，精密称定，加甲醇10ml，超声处理30min，放冷，用甲醇补足失重，过滤，取滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备，精密称取柚皮苷对照品10.16mg、野漆树苷对照品10.25mg、橙皮内酯水合物对照品10.45mg、异欧前胡素5.48mg，加甲醇溶解，摇匀，分别制成每1ml含柚皮苷508μg、野漆树苷16.4μg、橙皮内酯水合物8.36μg、异欧前胡素54.8μg的对照品溶液；(3)色谱条件，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以6％醋酸为流动相B；梯度洗脱，洗脱梯度为0‑25min内，保持流动相A为30％，流动相B为70％；25‑75min内，流动相A由30％到45％，流动相B由70％到55％；在75‑110min内，流动相A由45％到100％，流动相B由55％到0％；在110‑120min内，100％为流动相A；流速为1ml/min；检测波长为320nm；(4)对照图谱的建立，按上述供试品溶液、对照品的制备方法及色谱条件对10批以上的橘红珠样品进行HPLC分析，得到相应特征图谱；将上述特征图谱输入中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对主要色谱峰进行匹配，生成对照图谱，对照图谱包括柚皮苷、野漆树苷，橙皮内酯水合物和异欧前胡素4个特征峰。(5)鉴别方法，将供试品特征图谱与对照图谱对比，以柚皮苷峰为参照峰，包括参照峰在内，所得供试品特征图谱有4个共有特征峰，相对保留时间分别为：1.00、1.49、1.74和3.19；各峰相对保留时间的偏差在±5％之内。...

【技术特征摘要】
1.橘红珠药材的HPLC特征图谱快速鉴别方法，其特征在于包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备，取橘红珠药材粉末0.5g，精密称定，加甲醇10ml，超声处理30min，放冷，用甲醇补足失重，过滤，取滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备，精密称取柚皮苷对照品10.16mg、野漆树苷对照品10.25mg、橙皮内酯水合物对照品10.45mg、异欧前胡素5.48mg，加甲醇溶解，摇匀，分别制成每1ml含柚皮苷508μg、野漆树苷16.4μg、橙皮内酯水合物8.36μg、异欧前胡素54.8μg的对照品溶液；(3)色谱条件，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以6％醋酸为流动相B；梯度洗脱，洗脱梯度为0-25min内，保持流动相A为30％，流动相B为70％；25-75min内，流动相A由30...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏薇薇，李泮霖，王永刚，彭维，苏畅，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44