本发明专利技术涉及一种适用于高密度细胞培养体系的羊水细胞培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，基础培养基为F12培养基，添加组分及其浓度如下：胎牛血清，80‑120ml/L；人重组胰岛素，24‑30mg/L；人重组表皮细胞生长因子，20‑25μg/L；人重组碱性成纤维细胞生长因子，35‑45μg/L；人白蛋白，10‑15g/L；转铁蛋白，4‑16mg/L；氢化可的松，0.2‑1mg/L；睾丸素，0.2‑1mg/L；黄体酮，0.2‑1mg/L；维生素E，1‑5mg/L；L‑谷氨酰胺，12‑20g/L；HEPES，5‑10g/L；嵌段式聚醚F‑68，0.5‑2g/L；各添加组分的浓度以所述羊水细胞培养基的总体积为基准。与现有技术相比，本发明专利技术的羊水细胞培养基能够使得羊水细胞快速、大量的增殖，增殖效果好，培养时间短，特别适合羊水细胞的高密度细胞培养体系。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种适用于高密度细胞培养体系的羊水细胞培养基，属于细胞培养
技术介绍
产前诊断是优生学的重要组成部分，它是建立在遗传咨询基础上通过在出生前对胚胎或胎儿的发育状态、是否患有疾病等方面进行检测诊断。产前诊断目前主要有早期绒毛组织取出、孕中期羊水和脐带血、孕妇外周血分离胎儿细胞等诊断方法。其中孕中期羊水细胞检测仍然是最主要的诊断方法。关于孕中期羊水细胞检测，是通过羊水穿刺抽取孕妇的羊水标本，对羊水细胞进行培养，或提取羊水细胞DNA，再进行遗传学诊断(例如，诊断胎儿染色体病、单基因病等)。关于羊水细胞的体外培养是羊水细胞检测最为关键的一个环节。关于体外细胞培养体系，现有技术中除了常规的培养板、培养皿、培养瓶等二维的细胞培养体系，现在已研发出三维培养体系，例如目前市售的高密度细胞培养桶，是一种既可以适用于贴壁细胞，又可以适用于悬浮细胞的三维培养体系，可以快速地培养大量细胞，且可以进行为期半年以上的长期细胞培养，不需要经常更换耗材，与传统的培养板、培养皿和培养瓶相比，更方便、成本更低，因此受到本领域研发人员的广泛关注。然而，现有技术中的传统的羊水细胞培养基大多适用于中等规模的细胞培养体系，一般来说无法适用于大规模的、高密度的细胞培养；另一方面，现有的无血清培养基仅适用于培养板、培养皿、培养瓶等二维的细胞培养体系，无法适用于高密度细胞培养桶这样的三维培养体系。现在亟待开发专用于高密度细胞培养体系的羊水细胞培养基。
技术实现思路
鉴于相关技术的上述问题和/或其他问题，本专利技术一方面提供了一种适用于高密度细胞培养体系的羊水细胞培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为F12培养基；所述添加组分及其浓度如下：胎牛血清，80-120ml/L；人重组胰岛素，24-30mg/L；人重组表皮细胞生长因子，20-25μg/L；人重组碱性成纤维细胞生长因子，35-45μg/L；人白蛋白，10-15g/L；转铁蛋白，4-16mg/L；氢化可的松，0.2-1mg/L；睾丸素，0.2-1mg/L；黄体酮，0.2-1mg/L；维生素E，1-5mg/L；L-谷氨酰胺，12-20g/L；HEPES，5-10g/L；嵌段式聚醚F-68，0.5-2g/L；各添加组分的浓度以所述羊水细胞培养基的总体积为基准。优选的，以所述羊水细胞培养基的总体积为基准，所述F12培养基的干粉量为15-18g/L。优选的，所述人重组胰岛素的浓度为28mg/L，人重组表皮细胞生长因子的浓度为24μg/L，人重组碱性成纤维细胞生长因子的浓度为40μg/L，且人白蛋白的浓度为12g/L。优选的，所述L-谷氨酰胺的浓度为12-20g/L。优选的，所述转铁蛋白的浓度为12mg/L。优选的，所述嵌段式聚醚F-68的浓度为1g/L。优选的，所述氢化可的松的浓度为0.7mg/L，所述睾丸素的浓度为0.6mg/L，所述黄体酮的浓度为0.6mg/L，且所述维生素E的浓度为2mg/L。优选的，所述添加组分还包括青霉素和链霉素；所述青霉素的浓度100-400IU/mL，所述的链霉素浓度为100-400IU/mL。本专利技术另一方面提供了上述的羊水细胞培养基在高密度细胞培养体系中的应用。优选的，所述高密度细胞培养体系为高密度细胞培养桶。本专利技术的适用于高密度细胞培养体系的羊水细胞培养基，采用F12培养基作为基础培养基以及特定的添加组分的组合，尤其是人重组胰岛素、人重组表皮细胞生长因子、人重组碱性成纤维细胞生长因子和人白蛋白，四者同时满足特定的浓度范围时，能够使得羊水细胞快速、大量的增殖，增殖效果好，培养时间短，特别适合羊水细胞的高密度细胞培养体系。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术并不限于这些具体实施方式。在本专利技术的一个具体实施方案中，一种适用于高密度细胞培养体系的羊水细胞培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为F12培养基；所述添加组分及其浓度如下：胎牛血清，80-120ml/L；人重组胰岛素，24-30mg/L；人重组表皮细胞生长因子，20-25μg/L；人重组碱性成纤维细胞生长因子，35-45μg/L；人白蛋白，10-15g/L；转铁蛋白，4-16mg/L；氢化可的松，0.2-1mg/L；睾丸素，0.2-1mg/L；黄体酮，0.2-1mg/L；维生素E，1-5mg/L；L-谷氨酰胺，12-20g/L；HEPES，5-10g/L；嵌段式聚醚F-68，0.5-2g/L；各添加组分的浓度以所述羊水细胞培养基的总体积为基准。本专利技术的专利技术人经过大量的研究试验发现，当羊水细胞培养基采用F12培养基作为基础培养基以及上述特定的添加组分的组合，尤其是人重组胰岛素、人重组表皮细胞生长因子、人重组碱性成纤维细胞生长因子和人白蛋白，四者同时满足上述的浓度范围时，能够使得羊水细胞快速、大量的增殖，且细胞存活率更高，特别适合羊水细胞的高密度细胞培养体系。在本专利技术的一个优选实施方案中，以所述羊水细胞培养基的总体积为基准，所述F12培养基的干粉量为15-18g/L。更优选的，人重组胰岛素的浓度为28mg/L，人重组表皮细胞生长因子的浓度为24μg/L，人重组碱性成纤维细胞生长因子的浓度为40μg/L，且人白蛋白的浓度为12g/L。当本专利技术的羊水细胞培养基中，F12培养基的浓度，以及人重组胰岛素、人重组表皮细胞生长因子、人重组碱性成纤维细胞生长因子和人白蛋白同时采用上述特定的浓度时，特别适合羊水细胞的高密度细胞培养体系，尤其是诸如高密度细胞培养桶之类的三维培养体系，具有较好的增殖效果和细胞存活率。在本专利技术的一个更优选的实施方案中，所述L-谷氨酰胺的浓度为12-20g/L。在本专利技术的另一个更优选的实施方案中，所述转铁蛋白的浓度为12mg/L。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述嵌段式聚醚F-68的浓度为1g/L。嵌段式聚醚F-68，即Pluronic F-68，其为一种表面活性剂，一般常用作乳化剂和增溶剂；然而，专利技术人意外的发现，在本专利技术的羊水细胞培养基中添加特定浓度的Pluronic F-68，对于高密度细胞体系中的羊水细胞的生长有稳定作用，能够提高羊水细胞的存活率。在本专利技术的一个优选实施方案中，羊水细胞培养基的激素类物质的添加量如下：氢化可的松的浓度为0.7mg/L，所述睾丸素的浓度为0.6mg/L，所述黄体酮的浓度为0.6mg/L，且所述维生素E的浓度为2mg/L；可以满足高密度细胞体系中的羊水细胞的生长需求。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述添加组分还可以抗生素，例如包括青霉素和链霉素；所述青霉素的浓度为100-400IU/mL，所述的链霉素浓度为100-400IU/mL。更优选的，青霉素的浓度为200IU/mL，链霉素浓度为200IU/mL。这两种抗生素组合及其特定的浓度，特别适合羊水细胞的高密度细胞培养体系，抗菌效果优异，细胞存活率高。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述胎牛血清的浓度为100ml/L。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述HEPES的浓度为6.4g/L。在本专利技术的再一个优选实施方案中，将该无血清培养基的p本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种适用于高密度细胞培养体系的羊水细胞培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为F12培养基；所述添加组分及其浓度如下：胎牛血清，80‑120ml/L；人重组胰岛素，24‑30mg/L；人重组表皮细胞生长因子，20‑25μg/L；人重组碱性成纤维细胞生长因子，35‑45μg/L；人白蛋白，10‑15g/L；转铁蛋白，4‑16mg/L；氢化可的松，0.2‑1mg/L；睾丸素，0.2‑1mg/L；黄体酮，0.2‑1mg/L；维生素E，1‑5mg/L；L‑谷氨酰胺，12‑20g/L；HEPES，5‑10g/L；嵌段式聚醚F‑68，0.5‑2g/L；各添加组分的浓度以所述羊水细胞培养基的总体积为基准。
【技术特征摘要】
1.一种适用于高密度细胞培养体系的羊水细胞培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为F12培养基；所述添加组分及其浓度如下：胎牛血清，80-120ml/L；人重组胰岛素，24-30mg/L；人重组表皮细胞生长因子，20-25μg/L；人重组碱性成纤维细胞生长因子，35-45μg/L；人白蛋白，10-15g/L；转铁蛋白，4-16mg/L；氢化可的松，0.2-1mg/L；睾丸素，0.2-1mg/L；黄体酮，0.2-1mg/L；维生素E，1-5mg/L；L-谷氨酰胺，12-20g/L；HEPES，5-10g/L；嵌段式聚醚F-68，0.5-2g/L；各添加组分的浓度以所述羊水细胞培养基的总体积为基准。2.如权利要求1所述的羊水细胞培养基，其特征在于：以所述羊水细胞培养基的总体积为基准，所述F12培养基的干粉量为15-18g/L。3.如权利要求2所述的羊水细胞培养基，其特征在于：所述人重组胰岛素的浓度为28mg/L，所述人重组表皮细胞生长因子的浓度为24μg/L，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：颜学恒，周艳，
申请(专利权)人：上海逍鹏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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