本发明专利技术涉及一种适用于高密度细胞培养体系的免疫细胞的无血清培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RPMI 1640；所述添加组分及其浓度如下：人白蛋白，12‑16g/L；转铁蛋白，20‑25mg/L；人重组胰岛素，24‑30mg/L；L‑谷氨酰胺，8‑10g/L；HEPES，5‑7g/L；以及白介素‑2，3×105‑8×105IU/L。与现有技术相比，本发明专利技术的免疫细胞无血清培养基采用RPMI 1640作为基础培养基以及特定的添加组分的组合，能够使得免疫细胞快速、大量的增殖，且细胞存活率更高，特别适合免疫细胞的高密度细胞培养体系。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种适用于高密度细胞培养体系的免疫细胞的无血清培养基，属于细胞培养
技术介绍
细胞免疫治疗是采集人体自身免疫细胞，经过体外培养，使其数量成千倍增多，靶向性杀伤功能增强，然后再回输到人体来杀灭血液及组织中的病原体、癌细胞、突变的细胞，打破免疫耐受，激活和增强机体的免疫能力，兼顾治疗和保健的双重功效，例如常见的细胞免疫治疗有细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)疗法、树突状细胞(DC)疗法、DC+CIK细胞疗法、自然杀伤细胞(NK)疗法、DC-T细胞疗法等。上述细胞免疫治疗中比较重要的一个环节是“免疫细胞的体外培养”，而这个环节中最重要的是用于免疫细胞培养的无血清培养基。虽然血清是动物细胞培养中最基本的添加物，尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时，常常会先使用有血清的培养液进行培养，待细胞生长旺盛以后，再换成无血清培养液；但由于动物血清中含有动物成分，且成分复杂，应用与临床细胞治疗体系中，可能会导致一些潜在的风险，因此，无血清培养基被广泛的应用于培养哺乳动物以制备单克隆抗体，病毒抗原和重组蛋白等。无血清培养基是指不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基，可以应用于培养免疫细胞，例如淋巴细胞(例如，T淋巴细胞、B细胞、NK细胞等)、树突状细胞(也称DC细胞)、单核/巨噬细胞等。关于细胞培养体系，现有技术中除了常规的培养板、培养皿、培养瓶等二维的细胞培养体系，现在已研发出三维培养体系，例如目前市售的高密度细胞培养桶，是一种既可以适用于贴壁细胞，又可以适用于悬浮细胞的三维培养体系，可以快速地培养大量细胞，且可以进行为期半年以上的长期细胞培养，不需要经常更换耗材，与传统的培养板、培养皿和培养瓶相比，更方便、成本更低，因此受到本领域研发人员的广泛关注。然而，现有技术中的无血清培养基大多适用于中等规模的细胞培养体系，一般来说无法适用于大规模的、高密度的细胞培养；另一方面，现有的无血清培养基仅适用于培养板、培养皿、培养瓶等二维的细胞培养体系，无法适用于高密度细胞培养桶这样的三维培养体系。现在亟待开发专用于高密度细胞培养体系的免疫细胞的无血清培养基。
技术实现思路
鉴于相关技术的上述问题和/或其他问题，本专利技术一方面提供了一种适用于高密度细胞培养体系的免疫细胞的无血清培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RPMI 1640；所述添加组分及其浓度如下：人白蛋白，12-16g/L；转铁蛋白，20-25mg/L；人重组胰岛素，24-30mg/L；L-谷氨酰胺，8-10g/L；HEPES，5-7g/L；以及白介素-2，3×105-8×105IU/L；各添加组分的浓度以所述无血清培养基的总体积为基准。优选的，以所述无血清培养基的总体积为基准，所述RMPI 1640培养基的干粉量为14.8-19.8g/L。优选的，以所述无血清培养基的总体积为基准，所述RMPI 1640培养基的干粉量为18g/L，所述人白蛋白的浓度为13g/L，所述转铁蛋白的浓度为22mg/L，所述人重组胰岛素的浓度为27mg/L，以及所述L-谷氨酰胺的浓度为9g/L。优选的，所述HEPES的浓度为6g/L。优选的，所述白介素-2的浓度为5×105IU/L。优选的，所述添加组分还包括庆大霉素和链霉素，所述庆大霉素的浓度为1×105-4×105IU/L，所述链霉素的浓度为1×105-4×105IU/L。优选的，所述添加组分还包括酚红钠，所述酚红钠的浓度为5-7mg/L；所述无血清培养基的pH值为7.2～7.6。本专利技术另一方面提供了上述的无血清培养基在高密度细胞培养体系中的应用。优选的，所述高密度细胞培养体系为高密度细胞培养桶。优选的，所述免疫细胞为CIK细胞。本专利技术的适用于高密度细胞培养体系的免疫细胞的无血清培养基，采用RPMI 1640作为基础培养基以及特定的添加组分的组合，尤其是人白蛋白、转铁蛋白、人重组胰岛素和L-谷氨酰胺，四者同时满足特定的浓度范围时，能够使得免疫细胞快速、大量的增殖，且细胞存活率更高，特别适合免疫细胞的高密度细胞培养体系。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术并不限于这些具体实施方式。在本专利技术的一个具体实施方案中，一种适用于高密度细胞培养体系的免疫细胞的无血清培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RPMI 1640；所述添加组分及其浓度如下：人白蛋白，12-16g/L；转铁蛋白，20-25mg/L；人重组胰岛素，24-30mg/L；L-谷氨酰胺，8-10g/L；HEPES，5-7g/L；以及白介素-2，3×105-8×105IU/L。本专利技术的专利技术人经过大量的研究试验发现，当免疫细胞的无血清培养基采用RPMI 1640作为基础培养基以及上述特定的添加组分的组合，尤其是人白蛋白、转铁蛋白、人重组胰岛素和L-谷氨酰胺，四者同时满足上述的浓度范围时，能够使得免疫细胞快速、大量的增殖，且细胞存活率更高，特别适合免疫细胞的高密度细胞培养体系。在本专利技术的一个优选实施方案中，以所述无血清培养基的总体积为基准，所述RMPI 1640培养基的干粉量为14.8-19.8g/L。在本专利技术的一个优选实施方案中，以所述无血清培养基的总体积为基准，所述RMPI 1640培养基的干粉量为18g/L，人白蛋白的浓度为13g/L，转铁蛋白的浓度为22mg/L，人重组胰岛素的浓度为27mg/L，以及L-谷氨酰胺的浓度为9g/L。当本专利技术的免疫细胞的无血清培养基中，人白蛋白、转铁蛋白、人重组胰岛素和L-谷氨酰胺同时采用上述特定的浓度时，特别适合免疫细胞的高密度细胞培养体系，尤其是诸如高密度细胞培养桶之类的三维培养体系，具有较好的增殖效果和细胞存活率。在本专利技术的一个优选实施方案中，无血清培养基中还可以添加抗生素，添加组分还包括庆大霉素和链霉素，庆大霉素的浓度为1×105-4×105IU/L，链霉素的浓度为1×105-4×105IU/L。这两种抗生素组合及其特定的浓度，特别适合免疫细胞的高密度细胞培养体系，抗菌效果优异，细胞存活率高。在本专利技术的另一个优选实施方案中，所述添加组分还包括酚红钠，所述酚红钠的浓度为5-7mg/L。酚红钠可以作为培养基中的酸碱指示剂，当采用5-7mg/L的浓度时，更优选6mg/L的浓度时，对于免疫细胞的高密度细胞培养体系来说，酸碱指示非常灵敏。在本专利技术的再一个优选实施方案中，将该无血清培养基的pH值控制在7.2～7.6。在本专利技术的一个优选实施方案中，本专利技术的无血清培养基是专用于高密度细胞培养桶的免疫细胞无血清培养基。在本分吗的一个优选实施方案中，本专利技术的无血清培养基是专用于CIK细胞的高密度细胞培养体系的无血清培养基。实施例1实施例1的适用于高密度细胞培养体系的免疫细胞的无血清培养基的配制过程如下：步骤1)：在无菌条件下将合成的RPMI1640干粉在电子天平上称取180g后置于消毒容器内，加9L纯化水稀释后搅拌均匀获得基础培养基；步骤2)：将添加组分：130g人白蛋白、220mg转铁蛋白、270mg人重组胰岛素、90g L-谷氨酰胺、60g HEPES、2g庆大霉素(相当于2×105本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种适用于高密度细胞培养体系的免疫细胞的无血清培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RPMI 1640；所述添加组分及其浓度如下：人白蛋白，12‑16g/L；转铁蛋白，20‑25mg/L；人重组胰岛素，24‑30mg/L；L‑谷氨酰胺，8‑10g/L；HEPES，5‑7g/L；以及白介素‑2，3×105‑8×105IU/L；各添加组分的浓度以所述无血清培养基的总体积为基准。
【技术特征摘要】
1.一种适用于高密度细胞培养体系的免疫细胞的无血清培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RPMI 1640；所述添加组分及其浓度如下：人白蛋白，12-16g/L；转铁蛋白，20-25mg/L；人重组胰岛素，24-30mg/L；L-谷氨酰胺，8-10g/L；HEPES，5-7g/L；以及白介素-2，3×105-8×105IU/L；各添加组分的浓度以所述无血清培养基的总体积为基准。2.如权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于：以所述无血清培养基的总体积为基准，所述RMPI 1640培养基的干粉量为14.8-19.8g/L。3.如权利要求2所述的无血清培养基，其特征在于：以所述无血清培养基的总体积为基准，所述RMPI 1640培养基的干粉量为18g/L，所述人白蛋白的浓度为13g/L，所述转铁蛋白的浓度为22mg/L，所述人重组胰岛素的浓度为27mg/L，...
【专利技术属性】
技术研发人员：颜学恒，周艳，
申请(专利权)人：上海逍鹏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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