本发明专利技术涉及一种适用于高密度细胞培养体系的外周血细胞培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，基础培养基为RMPI 1640培养基，添加组分及其浓度如下：牛血清，160‑220ml/L；PHA‑植物血球凝集素，16‑30g/L；L‑谷氨酰胺，8‑12g/L；谷胱甘肽，8‑14g/L；亚油酸，0.1‑0.3g/L；硫辛酸，0.1‑0.3g/L；各添加组分的浓度以外周血细胞培养基的总体积为基准。与现有技术相比，本发明专利技术的外周血细胞培养基能够使得外周血细胞快速、大量的增殖，增殖效果好，培养时间短，特别适合外周血细胞的高密度细胞培养体系。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种适用于高密度细胞培养体系的外周血细胞培养基，属于细胞培养
技术介绍
细胞培养现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域，成为最重要的基础科学之一。关于体外细胞培养体系，现有技术中除了常规的培养板、培养皿、培养瓶等二维的细胞培养体系，现在已研发出三维培养体系，例如目前市售的高密度细胞培养桶，是一种既可以适用于贴壁细胞，又可以适用于悬浮细胞的三维培养体系，可以快速地培养大量细胞，且可以进行为期半年以上的长期细胞培养，不需要经常更换耗材，与传统的培养板、培养皿和培养瓶相比，更方便、成本更低，因此受到本领域研发人员的广泛关注。然而，现有技术中的传统的外周血细胞培养基大多适用于中等规模的细胞培养体系，一般来说无法适用于大规模的、高密度的细胞培养；另一方面，现有的无血清培养基仅适用于培养板、培养皿、培养瓶等二维的细胞培养体系，无法适用于高密度细胞培养桶这样的三维培养体系。现在亟待开发专用于高密度细胞培养体系的外周血细胞培养基。
技术实现思路
鉴于相关技术的上述问题和/或其他问题，本专利技术一方面提供了一种适用于高密度细胞培养体系的外周血细胞培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RMPI 1640培养基；所述添加组分及其浓度如下：牛血清，160-220ml/L；PHA-植物血球凝集素，16-30g/L；L-谷氨酰胺，8-12g/L；谷胱甘肽，8-14g/L；亚油酸，0.1-0.3g/L；硫辛酸，0.1-0.3g/L；各添加组分的浓度以所述外周血细胞培养基的总体积为基准。优选的，以所述外周血细胞培养基的总体积为基准，所述RMPI 1640培养基的干粉量为10-15g/L。更优选的，以所述外周血细胞培养基的总体积为基准，所述RMPI 1640培养基的干粉量为13.6g/L。优选的，所述添加组分中，所述牛血清的浓度为200ml/L，所述PHA-植物血球凝集素的浓度为24g/L，所述L-谷氨酰胺的浓度为11g/L，且所述谷胱甘肽的浓度为12g/L。优选的，所述添加组分中，所述亚油酸的浓度为0.2g/L，所述硫辛酸的浓度为0.2g/L。优选的，所述添加组分还包括青霉素和链霉素，所述青霉素的浓度为1×105-4×105IU/L，所述链霉素的浓度为1×105-4×105IU/L。优选的，所述添加组分还包括酚红钠，所述酚红钠的浓度为5-7mg/L。优选的，所述外周血细胞培养基的pH值为7.3～7.5。本专利技术另一方面提供了上述的外周血细胞培养基在高密度细胞培养体系中的应用。优选的，所述高密度细胞培养体系为高密度细胞培养桶。本专利技术的适用于高密度细胞培养体系的外周血细胞培养基，采用RMPI1640培养基作为基础培养基以及特定的添加组分的组合，尤其是牛血清、PHA-植物血球凝集素、L-谷氨酰胺和谷胱甘肽，四者同时满足上述的浓度范围时，能够使得外周血细胞快速、大量的增殖，特别适合外周血细胞的高密度细胞培养体系。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术并不限于这些具体实施方式。在本专利技术的一个具体实施方案中，一种适用于高密度细胞培养体系的外周血细胞培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RMPI 1640培养基；所述添加组分及其浓度如下：牛血清，160-220ml/L；PHA-植物血球凝集素，16-30g/L；L-谷氨酰胺，8-12g/L；谷胱甘肽，8-14g/L；亚油酸，0.1-0.3g/L；硫辛酸，0.1-0.3g/L；各添加组分的浓度以所述外周血细胞培养基的总体积为基准。本专利技术的专利技术人经过大量的研究试验发现，当外周血细胞培养基采用RMPI 1640培养基作为基础培养基以及上述特定的添加组分的组合，尤其是牛血清、PHA-植物血球凝集素、L-谷氨酰胺和谷胱甘肽，四者同时满足上述的浓度范围时，能够使得外周血细胞快速、大量的增殖，特别适合外周血细胞的高密度细胞培养体系。在本专利技术的一个优选实施方案中，以所述外周血细胞培养基的总体积为基准，所述RMPI 1640培养基的干粉量为10-15g/L。在本专利技术的一个更优选的实施方案中，所述RMPI 1640培养基的干粉量为13.6g/L。在本专利技术的另一个更优选的实施方案中，所述添加组分中，所述牛血清的浓度为200ml/L，所述PHA-植物血球凝集素的浓度为24g/L，所述L-谷氨酰胺的浓度为11g/L，且所述谷胱甘肽的浓度为12g/L。当本专利技术的外周血细胞培养基中，RMPI 1640培养基的浓度，以及牛血清、PHA-植物血球凝集素、L-谷氨酰胺和谷胱甘肽同时采用上述特定的浓度时，符合外周血细胞的高密度培养的营养需求，特别适合外周血细胞的高密度细胞培养体系，尤其是诸如高密度细胞培养桶之类的三维培养体系，具有较好的增殖效果。在本专利技术的一个优选的实施方案中，所述添加组分中，所述亚油酸的浓度为0.2g/L，所述硫辛酸的浓度为0.2g/L。这两种物质以及特定浓度的组合对于外周血细胞的生长起到保护作用，尤其对于外周血细胞的高密度培养体系，能够增加外周血细胞的存活率。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述添加组分还可以抗生素，例如包括青霉素和链霉素；所述青霉素的浓度为1×105-4×105IU/L，所述的链霉素浓度为1×105-4×105IU/L。更优选的，青霉素的浓度为2×105IU/L，链霉素浓度为2×105IU/L。这两种抗生素组合及其特定的浓度，特别适合外周血细胞的高密度细胞培养体系，抗菌效果优异，细胞存活率高。在本专利技术的一个优选的实施方案中，所述添加组分还包括酚红钠，所述酚红钠的浓度为5-7mg/L。在本专利技术的一个优选实施方案中，将该无血清培养基的pH值控制在7.3～7.5。在本专利技术的一个优选实施方案中，本专利技术的外周细胞培养基是专用于高密度细胞培养桶的外周细胞培养基。实施例1实施例1的适用于高密度细胞培养体系的外周血细胞培养基的配制过程如下：步骤1)：在无菌条件下将合成的RPMI1640干粉在电子天平上称取136g后置于消毒容器内，加7.5L重蒸水稀释后搅拌均匀获得基础培养基；步骤2)：将添加组分：2L牛血清、240g PHA-植物血球凝集素、110g L-谷氨酰胺、120g谷胱甘肽、1.2g青霉素(相当于2×106IU)、2g链霉素(相当于2×106IU)、2g亚油酸、2g硫辛酸和60mg酚红钠依次加入步骤1)获得的基础培养基中，充分混匀；步骤3)：过滤灭菌，再调节pH值至7.4±0.1，最后加入重蒸水将体积调节至10L；步骤4)：培养基配制完成后，过滤灭菌，分装、封口，最后冷藏(-20℃环境)备用。实施例2实施例2的适用于高密度细胞培养体系的外周血细胞培养基的配制过程如下：步骤1)：在无菌条件下将合成的RPMI1640干粉在电子天平上称取140g后置于消毒容器内，加7.5L重蒸水稀释后搅拌均匀获得基础培养基；步骤2)：将添加组分：1.7L牛血清、260g PHA-植物血球凝集素、100g L-谷氨酰胺、110g谷胱甘肽、2g青霉素(相当于3.3×106IU)、3g链霉素(相当于3×106IU)、1.8g亚油酸、1.8g硫辛酸和66mg酚红钠依次加入本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种适用于高密度细胞培养体系的外周血细胞培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RMPI 1640培养基；所述添加组分及其浓度如下：牛血清，160‑220ml/L；PHA‑植物血球凝集素，16‑30g/L；L‑谷氨酰胺，8‑12g/L；谷胱甘肽，8‑14g/L；亚油酸，0.1‑0.3g/L；硫辛酸，0.1‑0.3g/L；各添加组分的浓度以所述外周血细胞培养基的总体积为基准。
【技术特征摘要】
1.一种适用于高密度细胞培养体系的外周血细胞培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RMPI 1640培养基；所述添加组分及其浓度如下：牛血清，160-220ml/L；PHA-植物血球凝集素，16-30g/L；L-谷氨酰胺，8-12g/L；谷胱甘肽，8-14g/L；亚油酸，0.1-0.3g/L；硫辛酸，0.1-0.3g/L；各添加组分的浓度以所述外周血细胞培养基的总体积为基准。2.如权利要求1所述的外周血细胞培养基，其特征在于：以所述外周血细胞培养基的总体积为基准，所述RMPI 1640培养基的干粉量为10-15g/L。3.如权利要求2所述的外周血细胞培养基，其特征在于：以所述外周血细胞培养基的总体积为基准，所述RMPI 1640培养基的干粉量为13.6g/L。4.如权利要求2所述的外周血细胞培养基，其特征在于：所述添加组分中，所述牛血清的浓度为200ml/L，所述PHA-植物血球凝...
【专利技术属性】
技术研发人员：颜学恒，周艳，
申请(专利权)人：上海逍鹏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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